本實用新型涉及生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種檢測口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒及系統(tǒng)。

背景技術(shù)：

口蹄疫(Foot and Mouth Disease，F(xiàn)MD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一種高度接觸性傳染病，對易感的偶蹄動物具有嚴重的潛在經(jīng)濟危害?？谔阋卟《灸軌蚋腥矩i、牛、羊等偶蹄獸引起急性、烈性、接觸性傳染病。其特征是在口、舌、唇、鼻、蹄、乳房發(fā)生水泡，并潰爛形成爛斑。牲畜感染口蹄疫病毒后，會造成牲畜進食量下降，機體抵抗力和免疫力降低，容易繼發(fā)其他病毒性疾病和細菌性疾病，從而造成感染動物的生產(chǎn)性能下降，危害畜牧業(yè)正常生產(chǎn)和發(fā)展。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將口蹄疫列為必須報告的動物傳染病，我國2008年修訂的《一、二、三類動物疫病病種明錄》將其列為一類動物疫病。

目前，口蹄疫病毒檢測主要以病原學(xué)檢測和血清學(xué)檢測為主，酶聯(lián)免疫吸附試驗、熒光標記試驗、熒光RT－PCR用于檢測豬口蹄疫病毒的抗體。

(1)酶聯(lián)免疫吸附試驗

利用抗原和抗體能與固相載體表面結(jié)合并能保持其免疫性，抗原或抗體與酶結(jié)合物后的標記物既能保持抗原或抗體的免疫活性，又能保持酶的活性，受檢物中的抗原或抗體與固相表面的抗體或抗原發(fā)生免疫反應(yīng)并結(jié)合在固相表面，此抗原抗體復(fù)合物又能結(jié)合相應(yīng)的酶標記物，洗滌除去未結(jié)合的酶標記物，加入酶反應(yīng)底物，底物被酶催化為有色產(chǎn)物的過程。

(2)熒光標記試驗

利用熒光色素與標記物結(jié)合后，并不影響標記物的免疫活性，可與標本中特異性抗原或抗體特異性結(jié)合且這種結(jié)合較為牢固，用緩沖液洗滌時除去游離的熒光素標記標記物后，用熒光顯微鏡觀察的免疫學(xué)示蹤技術(shù)。

(3)動物實驗或雞胚接種實驗。

應(yīng)用上述方法對口蹄疫病毒進行檢測時，存在耗時長，操作步驟繁瑣，容易發(fā)生交叉污染，設(shè)備造價較高，很難普及應(yīng)用，動物實驗成本較高等缺點。

相比之下，普通熒光定量PCR方法特異性好，檢測靈敏度高，但應(yīng)用熒光定量PCR的方法進行檢測時，經(jīng)常出現(xiàn)實驗中說明書閱讀不方便或說明書丟失的問題，同時，實驗中需要用到的無核酸移液槍槍頭需要提前進行去核酸處理，費時費力。

因此，開發(fā)一種操作簡便，省時省力，成本較低，便于操作人員閱讀說明書，且易普及應(yīng)用的，用于檢測口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒也日益成為研究的重點。

有鑒于此，特提出本實用新型。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本實用新型的目的在于提供一種檢測口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒，以緩解現(xiàn)有技術(shù)中存在的操作繁瑣，費時費力，實驗中說明書閱讀不方便的技術(shù)問題。

本實用新型提供的一種檢測口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒，包括：

盒體和盒蓋；

所述盒體內(nèi)設(shè)有固定墊，所述固定墊上設(shè)有用于放置試劑瓶和槍頭盒的凹槽；

所述盒蓋內(nèi)壁設(shè)有用于固定說明書的說明書固定裝置。

進一步地，所述固定墊為彈性材料固定墊，可拆卸地固定在所述盒體內(nèi)部。

進一步地，所述試劑瓶包括瓶身和瓶蓋，所述瓶身上設(shè)有用于標記內(nèi)部試劑的標簽，所述瓶蓋上也設(shè)有用于標記內(nèi)部試劑的標簽。

進一步地，所述試劑瓶為內(nèi)置陰性對照的陰性對照試劑瓶，內(nèi)置陽性對照的陽性對照試劑瓶，內(nèi)置反應(yīng)液的反應(yīng)液試劑瓶，內(nèi)置引物探針的引物探針試劑瓶，內(nèi)置酶的酶試劑瓶，內(nèi)置無核酸水的無核酸水試劑瓶。

進一步地，所述引物探針試劑瓶為避光包裝。

進一步地，所述槍頭盒包括槍頭盒體和槍頭盒蓋，所述槍頭盒體內(nèi)設(shè)有用于裝載移液槍槍頭的槍頭孔架。

進一步地，所述槍頭孔架上設(shè)有80－100個槍頭孔。

進一步地，所述槍頭孔內(nèi)放置有10μl的無核酸移液槍槍頭。

進一步地，所述說明書固定裝置為插槽或透明插袋。

另外，本實用新型還提供了一種檢測口蹄疫病毒的系統(tǒng)，應(yīng)用上述的熒光定量PCR試劑盒。

本實用新型提供的檢測口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒，操作簡便，成本較低，內(nèi)置用于放置移液槍槍頭的槍頭盒，可以避免實驗前對槍頭進行處理，省時省力，同時，盒蓋內(nèi)壁設(shè)有的用于固定說明書的說明書固定裝置，可使說明書不易丟失，且便于操作人員閱讀說明書。

附圖說明

為了更清楚地說明本實用新型具體實施方式或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對具體實施方式或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本實用新型的一些實施方式，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為本實用新型實施例1提供的檢測口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒的固定墊結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為本實用新型實施例1提供的檢測口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒的整體示意圖；

圖3為本實用新型實施例1提供的檢測口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒的內(nèi)部構(gòu)造示意圖；

圖4為本實用新型實施例1提供的檢測口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒的盒體示意圖。

圖標：1－盒體；2－盒蓋；3－固定墊；4－槍頭盒；41－槍頭盒體；42－槍頭盒蓋；43－槍頭孔架；51－陰性對照試劑瓶；52－陽性對照試劑瓶；53－反應(yīng)液試劑瓶；54－引物探針試劑瓶；55－酶試劑瓶；56－無核酸水試劑瓶；6－說明書固定裝置。

具體實施方式

下面將結(jié)合附圖對本實用新型的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例是本實用新型一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒緦嵱眯滦椭械膶嵤├?，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本實用新型保護的范圍。

在本實用新型的描述中，需要說明的是，術(shù)語“中心”、“上”、“下”、“左”、“右”、“豎直”、“水平”、“內(nèi)”、“外”等指示的方位或位置關(guān)系為基于附圖所示的方位或位置關(guān)系，僅是為了便于描述本實用新型和簡化描述，而不是指示或暗示所指的裝置或元件必須具有特定的方位、以特定的方位構(gòu)造和操作，因此不能理解為對本實用新型的限制。此外，術(shù)語“第一”、“第二”、“第三”僅用于描述目的，而不能理解為指示或暗示相對重要性。

在本實用新型的描述中，需要說明的是，除非另有明確的規(guī)定和限定，術(shù)語“安裝”、“相連”、“連接”應(yīng)做廣義理解，例如，可以是固定連接，也可以是可拆卸連接，或一體地連接；可以是機械連接，也可以是電連接；可以是直接相連，也可以通過中間媒介間接相連，可以是兩個元件內(nèi)部的連通。對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，可以具體情況理解上述術(shù)語在本實用新型中的具體含義。

本實用新型提供了一種檢測口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒，包括：

盒體1和盒蓋2；

盒體1內(nèi)設(shè)有固定墊3，固定墊3上設(shè)有用于放置試劑瓶和槍頭盒4的凹槽；

盒蓋2內(nèi)壁設(shè)有用于固定說明書的說明書固定裝置6。

其中，盒體1與盒蓋2可以是鉸接的，也可以是相互獨立的。

在本實用新型中，固定墊3為彈性材料固定墊，可拆卸地固定在盒體1內(nèi)部。

固定墊3為彈性材料，可以有效緩沖在熒光定量PCR試劑盒被移動的過程中產(chǎn)生的撞擊力。

在一個優(yōu)選的實施方式中，固定墊3為海綿固定墊。

在另一個優(yōu)選的實施方式中，固定墊3為泡沫固定墊。

在本實用新型中，試劑瓶包括瓶身和瓶蓋，瓶身上設(shè)有用于標記內(nèi)部試劑的標簽，瓶蓋上也設(shè)有用于標記內(nèi)部試劑的標簽。

在瓶身上設(shè)有用于標記內(nèi)部試劑的標簽，便于在試劑瓶拿出試劑盒后進行不同試劑的區(qū)分，同時，在瓶蓋上也設(shè)有用于標記內(nèi)部試劑的標簽，便于在試劑瓶放置在試劑盒內(nèi)時，不用取出試劑瓶即可對裝有不同試劑的試劑瓶進行區(qū)分，便于操作。

在本實用新型中，試劑瓶為內(nèi)置陰性對照的陰性對照試劑瓶51，內(nèi)置陽性對照的陽性對照試劑瓶52，內(nèi)置反應(yīng)液的反應(yīng)液試劑瓶53，內(nèi)置引物探針的引物探針試劑瓶54，內(nèi)置酶的酶試劑瓶55，內(nèi)置無核酸水的無核酸水試劑瓶56。

其中，反應(yīng)液試劑瓶53內(nèi)的反應(yīng)液為熒光定量PCR反應(yīng)液。

引物探針試劑瓶54內(nèi)的引物的核苷酸序列為：

上游引物：5’－ACTGGGTTTTACAAACCTGTGA－3’；

下游引物：5’－GCGAGTCCTGCCACGGA－3’。

引物探針試劑瓶54內(nèi)的探針的核苷酸序列為：

探針：5’－TCCTTTGCAGCCGTGGGAC－3’。

探針的5’端熒光報告基團是FAM，3’端熒光淬滅基團是BHQ。

在本實用新型中，引物探針試劑瓶54為避光包裝。

在一個優(yōu)選的實施方式中，引物探針試劑瓶54為棕色瓶。

在另一個優(yōu)選的實施方式中，引物探針試劑瓶54外部設(shè)有錫紙包裹。

在本實用新型中，槍頭盒4包括槍頭盒體41和槍頭盒蓋42，槍頭盒體41內(nèi)設(shè)有用于裝載移液槍槍頭的槍頭孔架43。

其中，槍頭盒體41與槍頭盒蓋42可以是鉸接的，也可以是相互獨立的。槍頭盒體41單獨配有槍頭盒蓋42，在盒蓋2打開的情況下，槍頭盒蓋42依然可以保證槍頭盒4內(nèi)部不被核酸污染，保證了本實用新型提供的熒光定量PCR試劑盒檢測結(jié)果的準確性。

在本實用新型中，槍頭孔架43上設(shè)有80－100個槍頭孔。

在一個優(yōu)選的實施方式中，槍頭孔架43上設(shè)有90個槍頭孔。

在本實用新型中，槍頭孔內(nèi)放置有10μl的無核酸移液槍槍頭。

在本實用新型中，說明書固定裝置6為插槽或透明插袋。

在實驗操作人員使用本實用新型提供的熒光定量PCR試劑盒時，將說明書放入盒蓋2內(nèi)壁上的說明書固定裝置6內(nèi)，在操作過程中方便閱讀，同時，可以避免說明書易丟失的問題。

本實用新型還提供了一種檢測口蹄疫病毒的系統(tǒng)，應(yīng)用了上述的熒光定量PCR試劑盒。

本實用新型提供的檢測口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒，操作簡便，成本較低，內(nèi)置用于放置移液槍槍頭的槍頭盒4，可以避免實驗前對槍頭進行處理，省時省力，同時，盒蓋2內(nèi)壁設(shè)有的用于固定說明書的說明書固定裝置6，可使說明書不易丟失，且便于操作人員閱讀說明書。

為了更清楚的理解本實用新型提供的檢測口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒，現(xiàn)結(jié)合具體實施例，對本實用新型進行詳細介紹。

實施例1

如圖1和圖2所示，本實施例提供的一種檢測口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒，包括：

盒體1和盒蓋2；

盒體1內(nèi)設(shè)有固定墊3，固定墊3上設(shè)有用于放置試劑瓶和槍頭盒4的凹槽；

盒蓋2內(nèi)壁設(shè)有用于固定說明書的說明書固定裝置6。

在本實施例中，盒體1與盒蓋2為鉸接。

在本實施例中，說明書固定裝置6為插槽。

固定墊3為彈性材料固定墊，可拆卸地固定在盒體1內(nèi)部。

在本實施例中，固定墊3為海綿固定墊。

在本實施例中，上述試劑瓶包括瓶身和瓶蓋，瓶身上設(shè)有用于標記內(nèi)部試劑的標簽，瓶蓋上也設(shè)有用于標記內(nèi)部試劑的標簽。

如圖3所示，試劑瓶為內(nèi)置陰性對照的陰性對照試劑瓶51，內(nèi)置陽性對照的陽性對照試劑瓶52，內(nèi)置反應(yīng)液的反應(yīng)液試劑瓶53，內(nèi)置引物探針的引物探針試劑瓶54，內(nèi)置酶的酶試劑瓶55，內(nèi)置無核酸水的無核酸水試劑瓶56。

在本實施例中，引物探針試劑瓶54為避光包裝。

在本實施例中，引物探針試劑瓶54為棕色瓶。

槍頭盒4包括槍頭盒體41和槍頭盒蓋42，槍頭盒體41內(nèi)設(shè)有用于裝載移液槍槍頭的槍頭孔架43。

在本實施例中，槍頭孔架43上設(shè)有90個槍頭孔。

槍頭孔內(nèi)放置有10μl的無核酸移液槍槍頭。

實施例2

本實施例提供的一種檢測口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒，包括：

盒體1和盒蓋2；

盒體1內(nèi)設(shè)有固定墊3，固定墊3上設(shè)有用于放置試劑瓶和槍頭盒4的凹槽；

盒蓋2內(nèi)壁設(shè)有用于固定說明書的說明書固定裝置6。

在本實施例中，盒體1與盒蓋2為相互獨立的。

在本實施例中，說明書固定裝置6為透明插袋。

固定墊3為彈性材料固定墊，可拆卸地固定在盒體1內(nèi)部。

在本實施例中，固定墊3為泡沫固定墊。

在本實施例中，上述試劑瓶包括瓶身和瓶蓋，瓶身上設(shè)有用于標記內(nèi)部試劑的標簽，瓶蓋上也設(shè)有用于標記內(nèi)部試劑的標簽。

試劑瓶為內(nèi)置陰性對照的陰性對照試劑瓶51，內(nèi)置陽性對照的陽性對照試劑瓶52，內(nèi)置反應(yīng)液的反應(yīng)液試劑瓶53，內(nèi)置引物探針的引物探針試劑瓶54，內(nèi)置酶的酶試劑瓶55，內(nèi)置無核酸水的無核酸水試劑瓶56。

其中，引物探針試劑瓶54為避光包裝。

在本實施例中，引物探針試劑瓶54外部設(shè)有錫紙包裹。

槍頭盒4包括槍頭盒體41和槍頭盒蓋42，槍頭盒體41內(nèi)設(shè)有用于裝載移液槍槍頭的槍頭孔架43。

在本實施例中，槍頭孔架43上設(shè)有80個槍頭孔。

槍頭孔內(nèi)放置有10μl的無核酸移液槍槍頭。

在使用上述實施例1或?qū)嵤├?提供的檢測口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒時，實驗操作人員首先打開盒蓋2，將試劑盒說明書固定于盒蓋2內(nèi)壁的說明書固定裝置6上，分別從相應(yīng)的試劑瓶中取2μl陰性對照，0.5μl酶，1.8μl引物探針，10μl反應(yīng)液，以及應(yīng)用試劑盒內(nèi)無核酸槍頭吸取5.7μl無核酸水加入熒光定量PCR反應(yīng)板中，作為陰性對照組；分別取2μl陽性對照，0.5μl酶，1.8μl引物探針，10μl反應(yīng)液，以及應(yīng)用試劑盒內(nèi)無核酸槍頭吸取5.7μl無核酸水加入熒光定量PCR反應(yīng)板中，作為陽性對照組；分別取2μl待測樣本，0.5μl酶，1.8μl引物探針，10μl反應(yīng)液，以及應(yīng)用試劑盒內(nèi)無核酸槍頭吸取5.7μl無核酸水加入熒光定量PCR反應(yīng)板中，作為實驗組。每個組設(shè)6個重復(fù)。之后，將熒光定量PCR反應(yīng)板放于熒光定量PCR儀器中，設(shè)置反應(yīng)條件為：45℃15min；95℃2min；95℃15s，60℃1min，40個循環(huán)；60℃設(shè)置采集熒光信號。待反應(yīng)結(jié)束后，觀察實驗結(jié)果并依據(jù)以下判定規(guī)則進行判定：

1、陽性對照孔：CT值＜30并有明顯的擴增曲線；陰性對照孔：無CT值或者CT值＞37，線性為直線或者輕微斜線，無明顯擴增曲線。以上要求需同時滿足，否則本次實驗無效，需要重新進行。

2、CT值＜30并有明顯的擴增曲線，則判定為口蹄疫陽性。

3、CT值＞37并無擴增曲線，則判定為口蹄疫陰性。

4、30＜CT值＜37可疑，需重復(fù)檢測。若第二次檢測CT值仍為30－37并有明顯擴增曲線則判定為陽性，否則為陰性。

試驗結(jié)束后，將盒蓋2蓋合于盒體1上，如圖4所示，并將本實施例提供的熒光定量PCR試劑盒于－20℃保存。

實施例1或?qū)嵤├?提供的檢測口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒，操作簡便，成本較低，內(nèi)置用于放置移液槍槍頭的槍頭盒4，可以避免實驗前對槍頭進行處理，省時省力，同時，盒蓋2內(nèi)壁設(shè)有的用于固定說明書的說明書固定裝置6，可使說明書不易丟失，且便于操作人員閱讀說明書。

實施例3

本實施例提供了一種檢測口蹄疫病毒的系統(tǒng)，包括熒光定量PCR儀，計算機，移液槍，以及本實用新型提供的熒光定量PCR試劑盒。

使用本實施例提供的檢測口蹄疫病毒的系統(tǒng)檢測口蹄疫病毒，在同一實驗地點即可完成口蹄疫病毒的檢測，操作方便，同時可以避免試劑及待測樣本在移動過程中被污染，減少誤差，提高檢測的準確性。

最后應(yīng)說明的是：以上各實施例僅用以說明本實用新型的技術(shù)方案，而非對其限制；盡管參照前述各實施例對本實用新型進行了詳細的說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對前述各實施例所記載的技術(shù)方案進行修改，或者對其中部分或者全部技術(shù)特征進行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本實用新型各實施例技術(shù)方案的范圍。