本實用新型涉及一種提取器,尤其是一種細胞培養(yǎng)上清中外泌體快速提取器。

背景技術：

外泌體(Exosome)發(fā)現(xiàn)于1986年，是一種直徑40～150nm的雙層膜囊泡狀結構小體，可由機體內多種細胞如免疫細胞、干細胞、心血管細胞、網(wǎng)織紅細胞、血小板、神經(jīng)細胞和腫瘤細胞等主動分泌產(chǎn)生，廣泛分布于外周血、尿液、唾液、乳汁、腹水、羊水等體液中。

外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(如細胞因子、生長因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質，在體內參與細胞通訊、細胞遷移、促血管新生和抗腫瘤免疫等生理過程，與多種疾病的發(fā)生和進程密切相關。由于外泌體的特殊結構和功能，使得它具有潛在的應用價值，一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標，另一方面也可以作為治療手段，未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床治療。

外泌體的分離純化一直是科研工作者關注的問題，獲得高純度的外泌體對后續(xù)的研究至關重要。目前人們多采用超速離心、免疫磁珠、超濾、沉淀或試劑盒等方法實現(xiàn)外泌體的提取分離。

技術實現(xiàn)要素：

本實用新型所要解決的技術問題是，提供一種簡便易操作，不但能高效提取且不影響外泌體生物活性的細胞培養(yǎng)上清中外泌體快速提取器。

為了解決上述技術問題，本實用新型采用的技術方案是：一種細胞培養(yǎng)上清中外泌體快速提取器，包括管蓋和管體，管體由4個可拆卸的管身由螺口旋轉連接組成，螺口連接處配有密封墊，4個管身分別為頂層管身、第一層中間管身、第二層中間管身和底層管身，頂層管身、第一層中間管身、第二層中間管身中各有一個濾網(wǎng)。

所述管蓋和管體通過螺口旋轉或卡扣連接。

所述頂層管身內置的為0.22um濾網(wǎng)。

所述第一層中間管身內置的為100nm濾網(wǎng)。

所述的第二層中間管身內置的為40nm濾網(wǎng)。

所述的底層管身的底端為錐型平底或錐型圓底。

本實用新型的有益效果是：使用簡便，易操作，能高效提取細胞上清液中的外泌體，一次性的無菌器具，保證了提取操作過程無污染。

附圖說明

圖1是本實用新型細胞培養(yǎng)上清中外泌體快速提取器結構示意圖。

具體實施方式

下面結合附圖和具體實施方式對本實用新型作進一步詳細說明：

如圖1所示，本實用新型的細胞培養(yǎng)上清中外泌體快速提取器，包括管蓋1和管體2，管體2由4個可拆卸的管身由螺口旋轉連接組成，螺口連接處配有密封墊，4個管身分別為頂層管身2A、第一層中間管身2B、第二層中間管身2C和底層管身2D，頂層管身2A、第一層中間管身2B、第二層中間管身2C中各有一個濾網(wǎng)3A、3B、3C。

所述管蓋1和管體2通過螺口旋轉或卡扣連接。

所述頂層管身2A內置的為0.22um濾網(wǎng)3A。

所述第一層中間管身2B內置的為100nm濾網(wǎng)3B。

所述的第二層中間管身2C內置的為40nm濾網(wǎng)3C。

所述的底層管身2D的底端為錐型平底或錐型圓底。

本發(fā)明外泌體快速提取器的原理：由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體，利用不同孔徑濾膜通過離心的方法對樣品進行選擇性分離，獲得外泌體。

上述細胞培養(yǎng)上清中外泌體快速提取器使用方法如下：

步驟一：在潔凈工作臺中把提取器的管蓋打開，將管身放到試管架上。

步驟二：收集細胞培養(yǎng)上清液，3000g,10min離心。

步驟三：離心后，取上清液，棄掉沉淀。

步驟四：將細胞培養(yǎng)上清轉移至提取器中，提取器每次可以分離提取細胞培養(yǎng)上清≤15ml，擰緊管蓋，3000g,15min離心。

步驟五：離心后，分別擰開螺口，用無菌1ml槍頭吸取1mlPBS反復吹洗頂層管身2A內置的濾網(wǎng)3A后將懸液棄掉；用另一支無菌1ml槍頭吸取1mlPBS反復吹洗第一層中間管身2B內置的濾網(wǎng)3B，將含有外泌體的懸液放到外泌體收集瓶內；再用無菌1ml槍頭吸取1mlPBS反復吹洗二層中間管身2C內置的濾網(wǎng)3C，將含有外泌體的懸液放到另一個外泌體收集瓶內。

步驟六：如果上清液的體積超過15ml，那么需要把提取器的管體組裝上再開始操作，操作步驟同上(步驟一～步驟五)。

綜上所述，本實用新型的內容并不局限在上述的實施例中，相同領域內的有識之士可以在本實用新型的技術指導思想之內可以輕易提出其他的實施例，但這種實施例都包括在本實用新型的范圍之內。