本發(fā)明屬于生物材料，具體涉及一種交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、透明質(zhì)酸是一種天然粘多糖，由(1-β-4)d-葡糖醛酸和(1-β-3)n-乙?；?d-氨基葡糖雙糖單位重復(fù)連接而成，是人和動物皮膚、玻璃體、關(guān)節(jié)潤滑液和軟骨組織的重要成分，透明質(zhì)酸鈉在人體內(nèi)具有多種作用，包括：空間填充、水合作用、關(guān)節(jié)潤滑、以及提供細(xì)胞可以通過其遷移的基質(zhì)，雖然透明質(zhì)酸的優(yōu)點眾多，但是天然的透明質(zhì)酸力學(xué)性能薄弱、在體內(nèi)容易被降解等性質(zhì)限制了其在生物材料方面的應(yīng)用。交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉是透明質(zhì)酸鈉通過化學(xué)交聯(lián)修飾得到的高分子凝膠，彌補了天然透明質(zhì)酸鈉存留時間短的缺點。

2、專利文件cn106279726b公開了一種交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠及其制備方法，在超聲條件下，向透明質(zhì)酸鈉的堿性水溶液中滴加交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，用酸調(diào)節(jié)體系ph值7.1-7.5，攪拌1-2h，然后用無水乙醇沉淀，即得交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠。但該方法中并沒有除去交聯(lián)劑的步驟，容易造成交聯(lián)劑的殘留。

3、專利文件cn112940300b公開了一種交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠的制備方法，包括以下步驟：

4、(1)使包含交聯(lián)劑與透明質(zhì)酸、其金屬鹽、或其混合物的水溶液在非中性環(huán)境下混合均勻，形成混合溶液；(2)將上述混合溶液置于低于0℃且高于混合溶液共晶點的溫度下并保持足以形成固液異相體系的時間以形成固液異相體系；(3)將該異相體系置于低于0℃且高于混合溶液共晶點的溫度下進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)；(4)將交聯(lián)反應(yīng)后的異相體系中的固相融化，任選地中和、純化和勻化。但該方法所述的中和步驟并不能保證體系的ph下降的更為緩和，從而容易破壞透明質(zhì)酸鈉凝膠系統(tǒng)的三維交聯(lián)結(jié)構(gòu)。

5、綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)無法兼顧透明質(zhì)酸凝膠制備工藝簡單，安全性好，有效去除交聯(lián)劑，粘滯性強，內(nèi)聚性高，吸水率低等產(chǎn)業(yè)化需求。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，提供了一種交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽組合物及其制備方法和應(yīng)用。

2、本發(fā)明的第一方面提供了一種交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽，所述交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽的制備方法包括如下步驟：

3、(1)將透明質(zhì)酸i或其鹽、透明質(zhì)酸ⅱ或其鹽、第一堿性溶液和交聯(lián)劑混合，反應(yīng)，得到交聯(lián)透明質(zhì)酸i′或其鹽；

4、(2)將透明質(zhì)酸ⅲ或其鹽、第二堿性溶液和交聯(lián)劑混合，反應(yīng)，得到交聯(lián)透明質(zhì)酸ⅱ′或其鹽；

5、(3)將步驟(1)所得交聯(lián)透明質(zhì)酸i′或其鹽加水稀釋后，加入步驟(2)所得交聯(lián)透明質(zhì)酸ⅱ′或其鹽及透明質(zhì)酸iv或其鹽，混合反應(yīng)，得到所述的交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽。

6、進(jìn)一步地，所述第一堿性溶液的質(zhì)量濃度高于所述第二堿性溶液的質(zhì)量濃度。

7、進(jìn)一步地，所述透明質(zhì)酸i的分子量高于所述透明質(zhì)酸ⅱ、iii、iv的分子量。

8、進(jìn)一步地，步驟(1)中第一堿性溶液的濃度為10～100mg/ml(如10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、35mg/ml、36mg/ml、37mg/ml、38mg/ml、39mg/ml、40mg/ml、41mg/ml、42mg/ml、43mg/ml、44mg/ml、45mg/ml、46mg/ml、47mg/ml、48mg/ml、49mg/ml、50mg/ml、51mg/ml、52mg/ml、53mg/ml、54mg/ml、55mg/ml、56mg/ml、57mg/ml、58mg/ml、59mg/ml、60mg/ml、70mg/ml、80mg/ml、90mg/ml、100mg/ml)，優(yōu)選12～90mg/ml，更優(yōu)選15～80mg/ml。

9、進(jìn)一步地，步驟(2)中第二堿性溶液的濃度為0.1～50mg/ml(如0.1mg/ml、1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、16mg/ml、17mg/ml、18mg/ml、19mg/ml、20mg/ml、21mg/ml、22mg/ml、23mg/ml、24mg/ml、25mg/ml、26mg/ml、27mg/ml、28mg/ml、29mg/ml、30mg/ml、40mg/ml、50mg/ml)，優(yōu)選1～40mg/ml，更優(yōu)選5～30mg/ml。

10、進(jìn)一步地，所述透明質(zhì)酸i的分子量為900～3000kda(如900kda、950kda、1000kda、1100kda、1200kda、1300kda、1400kda、1500kda、1600kda、1700kda、1800kda、1900kda、2000kda、2500kda、3000kda)，優(yōu)選1000～2000kda，更優(yōu)選1200～1600kda。

11、在本發(fā)明的一個實施方式中，所述透明質(zhì)酸i的分子量為1500kda。

12、進(jìn)一步地，所述透明質(zhì)酸ⅱ、iii、iv的分子量為100～1000kda(如100kda、150kda、200kda、250kda、300kda、350kda、400kda、450kda、500kda、550kda、560kda、570kda、580kda、590kda、600kda、610kda、620kda、630kda、640kda、650kda、700kda、750kda、800kda、850kda、900kda、1000kda)，優(yōu)選300～800kda，更優(yōu)選400～700kda。

13、進(jìn)一步地，所述透明質(zhì)酸ⅱ、iii、iv的分子量的可以相同或不同。

14、在本發(fā)明的一個實施方式中，所述透明質(zhì)酸ⅱ、iii、iv的分子量為600kda。

15、進(jìn)一步地，步驟(1)中所述透明質(zhì)酸i或其鹽與透明質(zhì)酸ⅱ或其鹽的質(zhì)量比為2-10:1，優(yōu)選3-9:1。

16、在本發(fā)明的一個實施方式中，步驟(1)所述透明質(zhì)酸i或其鹽與透明質(zhì)酸ⅱ或其鹽的質(zhì)量比為3:1。

17、進(jìn)一步地，所述交聯(lián)透明質(zhì)酸i′或其鹽與交聯(lián)透明質(zhì)酸ⅱ′或其鹽質(zhì)量比1-10:1；優(yōu)選為2-6:1。

18、進(jìn)一步地，透明質(zhì)酸iv或其鹽相對于透明質(zhì)酸i或其鹽而言，其加入量為透明質(zhì)酸i或其鹽的5-30％。

19、進(jìn)一步地，步驟(3)中加水稀釋至堿性溶液的濃度與步驟(2)中第二堿性溶液的濃度相等。

20、進(jìn)一步地，步驟(1)、(2)、(3)中所述反應(yīng)的溫度為20～30℃。

21、進(jìn)一步地，步驟(1)、(2)、(3)中所述反應(yīng)的時間為4～30h。

22、進(jìn)一步地，步驟(1)、(2)、(3)中的反應(yīng)的溫度、時間可以相同或不同。

23、在本發(fā)明的一個實施方式中，步驟(1)所述反應(yīng)的溫度為25℃、反應(yīng)的時間為20h。

24、進(jìn)一步地，所述透明質(zhì)酸i或其鹽、透明質(zhì)酸ii或其鹽、透明質(zhì)酸?；蚱潲}和透明質(zhì)酸iv或其鹽可來源于動物或通過細(xì)菌發(fā)酵獲得。

25、進(jìn)一步的，透明質(zhì)酸鹽選自：透明質(zhì)酸鈉(ha)、透明質(zhì)酸鉀、透明質(zhì)酸鈣、透明質(zhì)酸鎂、透明質(zhì)酸銨、透明質(zhì)酸四丁基銨、透明質(zhì)酸鉍和透明質(zhì)酸鋅中的任一種；優(yōu)選透明質(zhì)酸鈉。

26、進(jìn)一步地，交聯(lián)透明質(zhì)酸鹽選自：交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉、交聯(lián)透明質(zhì)酸鉀、交聯(lián)透明質(zhì)酸鈣、交聯(lián)透明質(zhì)酸鎂、交聯(lián)透明質(zhì)酸銨、交聯(lián)透明質(zhì)酸四丁基銨、交聯(lián)透明質(zhì)酸鉍和透明質(zhì)酸鋅中的任一種，優(yōu)選為交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉。

27、進(jìn)一步地，堿性溶液選自：氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀、亞硫酸鈉、亞硫酸鉀中的一種或多種配制的溶液，優(yōu)選為氫氧化鈉溶液。所述第一堿性溶液、第二堿性溶液可以相同或不同；優(yōu)選地，第一堿性溶液、第二堿性溶液相同。

28、進(jìn)一步地，所述的交聯(lián)劑選自：1,4-丁二醇二縮水甘油醚(bdde)、二乙烯基砜、聚乙二醇、京尼平和碳化二亞胺中的一種或兩種以上的組合，優(yōu)選為1,4-丁二醇二縮水甘油醚。

29、進(jìn)一步地，所得交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽的交聯(lián)度為1％～6％，優(yōu)選1.5％～5％。

30、本發(fā)明首先通過將高、低分子量的透明質(zhì)酸或其鹽進(jìn)行復(fù)配，在堿溶液量大的條件下，通過破壞透明質(zhì)酸或其鹽之間的氫鍵作用，使透明質(zhì)酸或其鹽的分子鏈充分延伸舒展，其中低分子量的透明質(zhì)酸或其鹽的分子鏈在舒展的同時可以自由地進(jìn)行無規(guī)則平移或旋轉(zhuǎn)運動，從而使得低分子量的透明質(zhì)酸或其鹽能夠穿插或豎立在高分子量的透明質(zhì)酸或其鹽之間，實現(xiàn)高、低分子量的透明質(zhì)酸或其鹽穿插交聯(lián)；同時，堿溶液量大，在交聯(lián)的同時對透明質(zhì)酸或其鹽的分子鏈存在一定的降解作用，最終形成網(wǎng)孔間距較大的三維疏松網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。隨后，在堿溶液量小的條件下，對低分子量的透明質(zhì)酸或其鹽進(jìn)行交聯(lián)，堿液量低，透明質(zhì)酸或其鹽之間的氫鍵作用較強，分子鏈纏繞較為普遍，透明質(zhì)酸或其鹽與交聯(lián)劑易于快速反應(yīng)形成緊實的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，得到微米的凝膠顆粒。而由于堿溶液量大的條件下，交聯(lián)反應(yīng)不夠徹底，仍存在一部分交聯(lián)劑，通過加水調(diào)節(jié)稀釋，使堿溶液量大的條件變?yōu)閴A溶液小的條件，并加入微米的凝膠顆粒、透明質(zhì)酸或其鹽，繼續(xù)反應(yīng)，消耗未完全反應(yīng)的交聯(lián)劑，從而可以使緊實的結(jié)構(gòu)穿入較為疏松的結(jié)構(gòu)中，形成疏松孔隙包裹彈性硬球的軟彈性嵌合結(jié)構(gòu)的交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽凝膠。由于疏松孔隙區(qū)域具有良好的延展性，因此凝膠具有良好的支撐性能、延展性能和抗形變性能，并具有更好的吸水和保水性，組織相容性更好，更適于腔體內(nèi)外表面平鋪注射填充。

31、本發(fā)明的第二方面提供了一種交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽組合物，所述組合物包括：第一方面的交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽、非交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽、磷酸鹽緩沖液、局部麻醉藥和水溶性纖維素。

32、進(jìn)一步地，所述交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽的質(zhì)量濃度為1～30mg/ml(如1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml、10.5mg/ml、11mg/ml、11.5mg/ml、12mg/ml、12.5mg/ml、13mg/ml、13.5mg/ml、14mg/ml、14.5mg/ml、15mg/ml、15.5mg/ml、16mg/ml、16.5mg/ml、17mg/ml、17.5mg/ml、18mg/ml、18.5mg/ml、19mg/ml、19.5mg/ml、20mg/ml)，優(yōu)選5～25mg/ml，更優(yōu)選10～20mg/ml。

33、進(jìn)一步地，交聯(lián)透明質(zhì)酸鹽選自：交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉、交聯(lián)透明質(zhì)酸鉀、交聯(lián)透明質(zhì)酸鈣、交聯(lián)透明質(zhì)酸鎂、交聯(lián)透明質(zhì)酸銨、交聯(lián)透明質(zhì)酸四丁基銨、交聯(lián)透明質(zhì)酸鉍和透明質(zhì)酸鋅中的任一種，優(yōu)選為交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉。

34、進(jìn)一步地，非交聯(lián)透明質(zhì)酸鹽選自：非交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉、非交聯(lián)透明質(zhì)酸鉀、非交聯(lián)透明質(zhì)酸鈣、非交聯(lián)透明質(zhì)酸鎂、非交聯(lián)透明質(zhì)酸銨、非交聯(lián)透明質(zhì)酸四丁基銨、非交聯(lián)透明質(zhì)酸鉍和非透明質(zhì)酸鋅中的任一種，優(yōu)選為非交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉。

35、進(jìn)一步地，所述非交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽的濃度為0.2～10mg/ml(如0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.7mg/ml、0.8mg/ml、0.9mg/ml、1mg/ml、1.1mg/ml、1.2mg/ml、1.3mg/ml、1.4mg/ml、1.5mg/ml、1.6mg/ml、1.7mg/ml、1.8mg/ml、1.9mg/ml、2mg/ml、2.5、3mg/ml、3.5、4mg/ml、4.5mg/ml、5mg/ml、5.5mg/ml、6mg/ml、6.5mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml)，優(yōu)選0.5～8mg/ml，更優(yōu)選1～6mg/ml。

36、進(jìn)一步地，所述非交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽的分子量為100～1000kda(如100kda、150kda、200kda、250kda、300kda、350kda、400kda、450kda、500kda、550kda、560kda、570kda、580kda、590kda、600kda、610kda、620kda、630kda、640kda、650kda、700kda、750kda、800kda、850kda、900kda、1000kda)，優(yōu)選300～800kda，更優(yōu)選400～700kda。

37、進(jìn)一步地，所述水溶性纖維素選自羥乙基甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素，羥丁基甲基纖維素，乙基甲基纖維素和羧甲基纖維素的一種或多種，優(yōu)選為羥丙基甲基纖維素。

38、進(jìn)一步地，所述水溶性纖維素含量范圍：0.01～40mg/ml，優(yōu)選0.2～25mg/ml，更優(yōu)選0.5～10mg/ml。

39、進(jìn)一步地，所述磷酸鹽緩沖液包括：磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉和氯化鉀。

40、進(jìn)一步地，所述磷酸氫二鈉的濃度為0.01～10mg/ml(如0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml、0.06mg/ml、0.07mg/ml、0.08mg/ml、0.09mg/ml、1mg/ml、1.1mg/ml、1.2mg/ml、1.3mg/ml、1.4mg/ml、1.5mg/ml、1.6mg/ml、1.7mg/ml、1.8mg/ml、1.9mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml)，優(yōu)選地，所述磷酸氫二鈉的濃度為3～10mg/ml，進(jìn)一步優(yōu)選地，所述磷酸氫二鈉的濃度為4～8mg/ml。

41、在本發(fā)明的一個實施方式中，所述磷酸氫二鈉的濃度為10mg/ml。

42、進(jìn)一步地，所述磷酸二氫鈉的濃度為0.01～9mg/ml(如0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml、0.06mg/ml、0.07mg/ml、0.08mg/ml、0.09mg/ml、1mg/ml、1.5、2mg/ml、2.5、3mg/ml、3.5、4mg/ml、4.5mg/ml、5mg/ml、5.5mg/ml、6mg/ml、6.5mg/ml、7mg/ml、7.5mg/ml、8mg/ml、8.5mg/ml、9mg/ml)，優(yōu)選地，所述磷酸二氫鈉的濃度為1～7mg/ml，進(jìn)一步優(yōu)選地，所述磷酸二氫鈉的濃度為2～6mg/ml。

43、在本發(fā)明的一個實施方式中，所述磷酸二氫鈉的濃度為4mg/ml。

44、進(jìn)一步地，所述氯化鉀的濃度為0.01～7mg/ml(如0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml、0.06mg/ml、0.07mg/ml、0.08mg/ml、0.09mg/ml、1mg/ml、1.1mg/ml、1.2mg/ml、1.3mg/ml、1.4mg/ml、1.5mg/ml、1.6mg/ml、1.7mg/ml、1.8mg/ml、1.9mg/ml、2mg/ml、2.5、3mg/ml、3.5、4mg/ml、4.5mg/ml、5mg/ml、5.5mg/ml、6mg/ml、6.5mg/ml、7mg/ml)，優(yōu)選地，所述氯化鉀的濃度為0.05～5mg/ml，進(jìn)一步優(yōu)選地，所述氯化鉀的濃度為0.1～3mg/ml。

45、在本發(fā)明的一個實施方式中，所述氯化鉀的濃度為1mg/ml。

46、進(jìn)一步地，所述局部麻醉藥選自：酰胺型和酯型中的一種或其組合的組。

47、進(jìn)一步地，所述局部麻醉藥選自：利多卡因或其鹽、布比卡因或其鹽、布坦卡因或其鹽、卡替卡因或其鹽、辛可卡因或其鹽、氯丁卡因或其鹽、對哌啶基乙?；被郊姿嵋阴セ蚱潲}、依替卡因或其鹽、甲哌卡因或其鹽、奧昔卡因或其鹽、丙胺卡因或其鹽、羅哌卡因或其鹽、托利卡因或其鹽、三甲卡因或其鹽、伐多卡因或其鹽、阿替卡因或其鹽、左布比卡因或其鹽、阿米卡因或其鹽、可卡因或其鹽、丙泮卡因或其鹽、氯美卡因或其鹽、環(huán)美卡因或其鹽、丙美卡因或其鹽、地卡因或其鹽、苯佐卡因或其鹽、布他卡因或其鹽、丁托西卡因或其鹽、氨基苯甲酸丁酯或其鹽、氯普魯卡因或其鹽、二甲卡因或其鹽、奧布卡因或其鹽、哌羅卡因或其鹽、對乙氧卡因或其鹽、普魯卡因或其鹽、丙氧卡因或其鹽、三卡因或其鹽中一種或多種組成的組，優(yōu)選地，為利多卡因或其鹽，進(jìn)一步優(yōu)選地，為鹽酸利多卡因。

48、進(jìn)一步地，所述局部麻醉藥的含量范圍為0.1～10mg/ml(如0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.5mg/ml、0.8mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml、2.5mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml)，優(yōu)選地，所述局部麻醉藥的含量范圍為0.1～8mg/ml，進(jìn)一步優(yōu)選地，所述局部麻醉藥的含量范圍為0.5～8mg/ml，更進(jìn)一步優(yōu)選地，所述局部麻醉藥的含量范圍為0.5～5mg/ml。

49、在本發(fā)明的一個實施方式中，所述局部麻醉藥的含量范圍為3mg/ml。

50、本發(fā)明通過將交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽凝膠與其他輔料形成凝膠組合物，可以使得凝膠組合物具有更好的吸水和保水性，組織相容性更好，更適于平鋪、腔體內(nèi)外表面注射填充。

51、本發(fā)明第三方面提供一種交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽組合物的制備方法，包括如下步驟：

52、將第一方面所述的交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽經(jīng)透析后取出，先用鹽酸溶液調(diào)節(jié)體系ph值至10～11，再用乳酸溶液緩慢調(diào)節(jié)體系ph值至中性，然后加入磷酸鹽緩沖液、局部麻醉劑、水溶性纖維素、非交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽，混合均勻，濕熱滅菌，即得組合物。

53、進(jìn)一步地，所述局部麻醉藥選自：酰胺型和酯型中的一種或其組合的組。

54、進(jìn)一步地，所述局部麻醉藥選自：利多卡因或其鹽、布比卡因或其鹽、布坦卡因或其鹽、卡替卡因或其鹽、辛可卡因或其鹽、氯丁卡因或其鹽、對哌啶基乙酰基氨基苯甲酸乙酯或其鹽、依替卡因或其鹽、甲哌卡因或其鹽、奧昔卡因或其鹽、丙胺卡因或其鹽、羅哌卡因或其鹽、托利卡因或其鹽、三甲卡因或其鹽、伐多卡因或其鹽、阿替卡因或其鹽、左布比卡因或其鹽、阿米卡因或其鹽、可卡因或其鹽、丙泮卡因或其鹽、氯美卡因或其鹽、環(huán)美卡因或其鹽、丙美卡因或其鹽、地卡因或其鹽、苯佐卡因或其鹽、布他卡因或其鹽、丁托西卡因或其鹽、氨基苯甲酸丁酯或其鹽、氯普魯卡因或其鹽、二甲卡因或其鹽、奧布卡因或其鹽、哌羅卡因或其鹽、對乙氧卡因或其鹽、普魯卡因或其鹽、丙氧卡因或其鹽、三卡因或其鹽中一種或多種組成的組，優(yōu)選地，為利多卡因或其鹽，進(jìn)一步優(yōu)選地，為鹽酸利多卡因。

55、進(jìn)一步地，所述鹽酸利多卡因的質(zhì)量為0.1～1g(如0.1g、0.2g、0.3g、0.35g、0.4g、0.45g、0.5g、0.6g、0.7g、0.8g、0.9g、1g)。

56、進(jìn)一步地，所述羥丙基甲基纖維素的質(zhì)量為0.05～1g(如0.05g、0.06g、0.07g、0.08g、0.09g、0.1g、0.11g、0.12g、0.13g、0.14g、0.15g、0.1g、0.2g、0.3g、0.35g、0.4g、0.45g、0.5g、0.6g、0.7g、0.8g、0.9g、1g)。

57、進(jìn)一步地，所述非交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽0.1～1g(如0.1g、0.2g、0.3g、0.35g、0.4g、0.45g、0.5g、0.6g、0.7g、0.8g、0.9g、1g)。

58、本發(fā)明的第四方面提供了一種由前述第一方面所述的交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽或第二方面所述的組合物、第三方面制備所得交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽組合物在制備藥品、組織工程材料、化妝品中的應(yīng)用。

59、優(yōu)選的，所述組織工程材料包括軟組織填充材料、軟骨修復(fù)材料、組織工程支架。

60、本發(fā)明的第五方面提供了一種由前述第一方面所述的交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽或第二方面所述的組合物、第三方面制備所得交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽組合物的美容的非醫(yī)療的用途，用于改善皮膚的外觀、撫平皺紋或?qū)κ茉囌叩哪樆蛏眢w進(jìn)行外形修復(fù)。

61、進(jìn)一步地，所述對身體的外形修復(fù)包括中重度大陰唇萎縮填充修復(fù)或陰道內(nèi)粘膜層的填充修復(fù)。

62、本發(fā)明第六方面提供一種改善皮膚的外觀、撫平皺紋或?qū)κ茉囌叩哪樆蛏眢w進(jìn)行外形修復(fù)的美容的非醫(yī)療的方法，包括：

63、i)提供如前述第一方面所述的交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽或第二方面所述的組合物、第三方面制備所得交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽組合物，且

64、ii)注射所述如前述第一方面所述的交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽或第二方面所述的組合物、第三方面制備所得交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽組合物至受試者的皮膚中。

65、進(jìn)一步的，所述步驟ii的組合物被注射到真皮和/或皮下組織中。

66、本發(fā)明的有益效果：

67、(1)本發(fā)明首先通過將高、低分子量的透明質(zhì)酸或其鹽進(jìn)行復(fù)配，在堿溶液量大的條件下，通過破壞透明質(zhì)酸或其鹽之間的氫鍵作用，使透明質(zhì)酸或其鹽的分子鏈充分延伸舒展，在舒展的同時使低分子量的透明質(zhì)酸或其鹽能夠穿插或豎立在高分子量的透明質(zhì)酸或其鹽之間，實現(xiàn)高、低分子量的透明質(zhì)酸或其鹽穿插交聯(lián)；同時，堿溶液量大，在交聯(lián)的同時對透明質(zhì)酸或其鹽的分子鏈存在一定的降解作用，最終形成網(wǎng)孔間距較大的三維疏松網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。隨后，在堿溶液量小的條件下，對低分子量的透明質(zhì)酸或其鹽進(jìn)行交聯(lián)，堿液量低，透明質(zhì)酸或其鹽之間的氫鍵作用較強，分子鏈纏繞較為普遍，透明質(zhì)酸或其鹽與交聯(lián)劑易于快速反應(yīng)形成緊實的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，得到微米的凝膠顆粒。而由于堿溶液量大的條件下，交聯(lián)反應(yīng)不夠徹底，仍存在一部分交聯(lián)劑，通過加水調(diào)節(jié)稀釋，使堿溶液量大的條件變?yōu)閴A溶液小的條件，并加入微米的凝膠顆粒、透明質(zhì)酸或其鹽，繼續(xù)反應(yīng)，消耗未完全反應(yīng)的交聯(lián)劑，從而可以使緊實的結(jié)構(gòu)穿入較為疏松的結(jié)構(gòu)中，形成疏松孔隙包裹彈性硬球的軟彈性嵌合結(jié)構(gòu)的交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽凝膠，由于疏松孔隙區(qū)域具有良好的延展性，因此凝膠具有良好的支撐性能、延展性能和抗形變性能，并具有更好的吸水和保水性。

68、(2)本發(fā)明可根據(jù)植入人體部位的不同，調(diào)整高、低分子量透明質(zhì)酸或其鹽的加入量和分子量，以調(diào)整交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽的孔結(jié)構(gòu)、保水性及機(jī)械性能，實現(xiàn)凝膠填充劑與注射部位匹配的精準(zhǔn)化。

69、(3)本發(fā)明通過將交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽凝膠與水溶性纖維素、非交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽等輔料形成凝膠組合物，可以使得凝膠組合物具有良好的吸水和保水性，組織相容性更好，更適于腔體內(nèi)外表面平鋪注射填充。