本申請屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種糞便樣本的的過濾分離方法、過濾組件及dna提取方法。

背景技術(shù)：

1、糞便樣本cfdna(cell-free?dna)檢測分析是目前有效的腸道疾病診斷檢測方法。在糞便樣本cfdna檢測方法中，首先需要對糞便樣本進(jìn)行固液分離等前處理以除去雜質(zhì)，進(jìn)而方便后續(xù)的cfdna提取純化。固液分離過程的質(zhì)量將直接影響cfdna的質(zhì)量。

2、目前，常用的糞便樣本固液分離雜質(zhì)去除的方法是離心法，即將糞便樣本稀釋液加入到離心管中，利用離心機(jī)進(jìn)行高速離心，再用移液槍從離心管中取出上清，以進(jìn)行后續(xù)的dna提取、轉(zhuǎn)化等過程。但是該方法需要一定的操作時間，離心機(jī)一次處理的樣本有限，且受到設(shè)備、場地等客觀條件的限制。通常的取樣管不能進(jìn)入高速離心機(jī)，因此糞便樣本的離心分離需要人工將樣本從取樣管中取出放入適配于高速離心機(jī)的離心管中，這一過程高度依賴于人工，降低了樣本處理效率。另外，離心法更適合于分離密度較大的雜質(zhì)，對于一些密度小的雜質(zhì)無法有效分離。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本申請的目的在于提供一種糞便樣本的過濾分離方法、過濾組件及cfdna提取方法，能夠提高糞便樣本固液分離效率，減少人工操作步驟，有利于實(shí)現(xiàn)糞便樣本從采樣管直接到dna檢測樣本的全流程自動化處理。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本申請?zhí)峁┤缦录夹g(shù)方案：

3、一種糞便樣本的過濾分離方法，包括：

4、將含有糞便樣本的待過濾物用過濾件經(jīng)過濾程序處理，獲得分離的濾液和濾殘?jiān)?/p>

5、其中，所述待過濾物為固液混合物；

6、所述過濾程序包括依次進(jìn)行的第一過濾程序和第二過濾程序；

7、所述第一過濾程序的過濾孔徑為100-425μm；

8、所述第二過濾程序的過濾孔徑為3-20μm。

9、在一些實(shí)施例中，所述待過濾物中，固含量為2％～20％。

10、在一些實(shí)施例中，所述待過濾物中，所述過濾件包括第一過濾層和第二過濾層，由所述第一過濾層實(shí)施所述第一過濾程序，由所述第二過濾層實(shí)施所述第二過濾程序。

11、在一些實(shí)施例中，所述待過濾物在機(jī)械力的作用下進(jìn)行所述過濾程序；優(yōu)選地，所述機(jī)械力選自振蕩、按壓、抽濾中的一種或多種。

12、在一些實(shí)施例中，所述機(jī)械力包括將過濾件朝向所述待過濾物按壓的作用力，向所述過濾件施加的壓強(qiáng)為0.02～0.5mpa；優(yōu)選0.1-0.25mpa。

13、在一些實(shí)施例中，所述方法包括：將所述過濾件朝向所述待過濾物施加所述按壓的作用力，使所述過濾件朝向所述待過濾物運(yùn)動，所述待過濾物依次經(jīng)過所述第一過濾層和第二過濾層，得到所述濾液。

14、在一些實(shí)施例中，所述第一過濾程序的過濾孔徑為100-300μm；優(yōu)選125-180μm，第二過濾程序的過濾孔徑為5-15μm。

15、在一些實(shí)施例中，所述過濾件為聚酰胺篩網(wǎng)。

16、在一些實(shí)施例中，所述方法還包括將所述糞便樣本和糞便保存液均勻混合形成所述待過濾物的步驟。

17、本申請?zhí)峁┮环N過濾組件，包括

18、一容器，上端具有第一開口，用于容納固液混合的待過濾物；和

19、一過濾管，所述過濾管可容置于所述容器內(nèi)并與所述容器相適配，所述過濾管具有中空的腔體，所述腔體上端具有第二開口，所述腔體底部和/或側(cè)壁由外至內(nèi)依次設(shè)置有第一過濾層和第二過濾層，能夠使所述容器內(nèi)的待過濾物依次經(jīng)過所述第一過濾層和所述過濾層；

20、所述第一過濾層的過濾孔徑為100-425μm；

21、所述第二過濾層的過濾孔徑為3-20μm。

22、在一些實(shí)施例中，所述過濾管的外徑小于所述容器的內(nèi)徑，且所述過濾管與所述容器開口朝上地同軸設(shè)置；優(yōu)選地，所述過濾管被配置為能夠沿所述容器的內(nèi)壁上下滑動。

23、在一些實(shí)施例中，所述過濾管的側(cè)壁設(shè)置有密封圈，所述過濾管在所述容器內(nèi)滑動時，所述密封圈用于流體密封所述過濾管與所述容器內(nèi)壁之間的空隙。

24、在一些實(shí)施例中，所述容器配置有與第一開口相適配的蓋，用于密封所述第一開口；優(yōu)選地，所述蓋同時適配于所述第一開口和所述第二開口。

25、在一些實(shí)施例中，所述第一過濾層的過濾孔徑為100-300μm；優(yōu)選125-180μm，第二過濾層的過濾孔徑為5-15μm。

26、本申請還提供一種糞便樣本的cfdna的提取方法，包括：

27、將糞便樣本經(jīng)如上所述的方法進(jìn)行過濾，或者經(jīng)如上所述的過濾組件進(jìn)行過濾，獲得濾液；和

28、從所述濾液中提取cfdna。

29、在一些實(shí)施例中，所述提取方法在一自動化設(shè)備中進(jìn)行，所述自動化設(shè)備被配置為自動進(jìn)行過濾程序，并自動收集濾液進(jìn)行提取cfdna的步驟。

30、有益效果：

31、本申請?zhí)峁┝艘环N糞便樣本的過濾分離方法，通過至少兩層的特定過濾孔徑的過濾程序，實(shí)現(xiàn)了糞便樣本的快速過濾分離，經(jīng)過該過濾程序過濾的糞便樣本的上清液中的cfdna，能夠達(dá)到甚至優(yōu)于高速離心分離法分離的質(zhì)量，能夠滿足腸道腫瘤dna甲基化檢測的要求。

32、本申請還提供一過濾組件，該過濾組件能夠用于實(shí)現(xiàn)前述的糞便樣本過濾分離方法，該過濾組件結(jié)構(gòu)簡單，能夠被簡單地以適配于各類現(xiàn)有的采樣管的形式被制造，無需額外生產(chǎn)采樣管。

33、本申請的糞便樣本過濾分離方法和過濾組件能夠集成應(yīng)用于自動化樣本處理系統(tǒng)和自動化dna提取系統(tǒng)當(dāng)中，由自動化處理平臺實(shí)現(xiàn)樣本過濾、濾液收集、dna提取純化等過程，能夠簡便地實(shí)現(xiàn)從糞便樣本采樣管直接進(jìn)入系統(tǒng)，直接輸出待檢測物料的全自動方案。

技術(shù)特征：

1.一種糞便樣本的過濾分離方法，其特征在于，包括：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述待過濾物中，固含量為2％～20％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述過濾件包括第一過濾層和第二過濾層，由所述第一過濾層實(shí)施所述第一過濾程序，由所述第二過濾層實(shí)施所述第二過濾程序。

4.根據(jù)權(quán)利要求3任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述待過濾物在機(jī)械力的作用下進(jìn)行所述過濾程序；優(yōu)選地，所述機(jī)械力選自振蕩、按壓、抽濾中的一種或多種。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述機(jī)械力包括將過濾件朝向所述待過濾物按壓的作用力，向所述過濾件施加的壓強(qiáng)為0.02～0.5mpa；優(yōu)選0.1-0.25mpa。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法包括：將所述過濾件朝向所述待過濾物施加所述按壓的作用力，使所述過濾件朝向所述待過濾物運(yùn)動，所述待過濾物依次經(jīng)過所述第一過濾層和第二過濾層，得到所述濾液。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述第一過濾程序的過濾孔徑為100-300μm；優(yōu)選125-180μm，第二過濾程序的過濾孔徑為5-15μm。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述過濾件為聚酰胺篩網(wǎng)。

9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法還包括將所述糞便樣本和糞便保存液均勻混合形成所述待過濾物的步驟。

10.一種過濾組件，其特征在于，包括

11.根據(jù)權(quán)利要求11所述的過濾組件，其特征在于，所述過濾管的外徑小于所述容器的內(nèi)徑，且所述過濾管與所述容器開口朝上地同軸設(shè)置；優(yōu)選地，所述過濾管被配置為能夠沿所述容器的內(nèi)壁上下滑動。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的過濾組件，其特征在于，所述過濾管的側(cè)壁設(shè)置有密封圈，所述過濾管在所述容器內(nèi)滑動時，所述密封圈用于流體密封所述過濾管與所述容器內(nèi)壁之間的空隙。

13.根據(jù)權(quán)利要求10-12任一項(xiàng)所述的過濾組件，其特征在于，所述容器配置有與第一開口相適配的蓋，用于密封所述第一開口；優(yōu)選地，所述蓋同時適配于所述第一開口和所述第二開口。

14.根據(jù)權(quán)利要求10所述的過濾組件，其特征在于，所述第一過濾層的過濾孔徑為100-300μm；優(yōu)選125-180μm，第二過濾層的過濾孔徑為5-15μm。

15.一種糞便樣本的dna的提取方法，其特征在于，包括：

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的提取方法，其特征在于，所述提取方法在一自動化設(shè)備中進(jìn)行，所述自動化設(shè)備被配置為自動進(jìn)行過濾程序，并自動收集濾液進(jìn)行提取dna的步驟。

技術(shù)總結(jié)
本申請?zhí)峁┮环N糞糞便樣本的過濾分離方法、過濾組件及DNA提取方法，通過至少兩層的特定過濾孔徑的過濾程序，實(shí)現(xiàn)了糞便樣本的快速過濾分離，經(jīng)過該過濾程序過濾的糞便樣本的上清液中的cfDNA，能夠達(dá)到甚至優(yōu)于高速離心分離法分離的質(zhì)量，能夠滿足腸道腫瘤DNA甲基化檢測的要求。該過濾方法結(jié)合過濾組件可實(shí)現(xiàn)從糞便樣本到DNA的自動化提取。

技術(shù)研發(fā)人員：嚴(yán)國志,周諦晗,阮彥添,萬慧,梁嘉琳,王青,董蘭蘭
受保護(hù)的技術(shù)使用者：武漢艾米森生命科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2