本發(fā)明涉及一種菌根真菌雙色蠟?zāi)⒌木鷦┲苽浞椒ā?/p>
背景技術(shù)：
1、現(xiàn)階段，人們對(duì)環(huán)境保護(hù)的意識(shí)越來越強(qiáng)，但對(duì)生產(chǎn)發(fā)展的要求越來越高，在生產(chǎn)中施用大量化學(xué)肥料會(huì)對(duì)環(huán)境及人類身體健康帶來諸多不利影響，而微生物菌肥是一種環(huán)保安全的肥料，因此，微生物菌肥的需求量越來越大。雙色蠟?zāi)?laccaria?bicolor)是屬于擔(dān)子菌亞門(basidiomycotina)、口蘑科(tricholomataceae)、蠟?zāi)?laccaria)的外生菌根真菌。這種真菌分布于世界各地，在森林苗圃和成熟的林分都很常見，能夠定殖于植物根部，促進(jìn)植物側(cè)根形成，增加植物對(duì)土壤中營養(yǎng)元素的吸收，對(duì)宿主植物具有顯著的促生效應(yīng)，它還能夠提高植物對(duì)重金屬、鹽脅迫等非生物逆境的抵抗能力，是一種優(yōu)良的外生菌根真菌。該菌可進(jìn)行純培養(yǎng)，用于制作生物菌肥，但生產(chǎn)中應(yīng)用還較少，產(chǎn)量較低，為了方便這種優(yōu)良菌種的研究與推廣，篩選一種適用于大量培養(yǎng)雙色蠟?zāi)⒕鷦┑姆椒ň哂蟹浅Ｖ匾囊饬x。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、為了方便雙色蠟?zāi)⑦@種優(yōu)良菌種的研究與推廣，克服現(xiàn)有培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)方法的不足，本發(fā)明的目的是提供一種高效制備雙色蠟?zāi)⒕鷦┑姆椒ǎ闺p色蠟?zāi)⒕鷦┑呐囵B(yǎng)周期更短，質(zhì)量更高，為該菌種的推廣、研究與應(yīng)用提供幫助，為生物菌肥的生產(chǎn)提供技術(shù)保障。
2、本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下所述。
3、液體培養(yǎng)基的配方為：每升蒸餾水中溶解10g葡萄糖，2g麥芽糖，1g酵母提取物(酵母精)，0.5g磷酸二氫鉀，0.25g磷酸氫二銨，0.15g硫酸鎂，5ml濃度1％的二水氯化鈣，2.5ml濃度1％的氯化鈉，1.2ml濃度1％的氯化鐵。
4、制作固體培養(yǎng)基與上述液體培養(yǎng)基配方一致，另需每升加瓊脂15g。
5、固體菌劑培養(yǎng)，將已經(jīng)培養(yǎng)好的固體菌劑，切成1cm3左右小塊，取一小塊放在倒好培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中央，有菌絲的一面貼在培養(yǎng)基上，封口膜封好后避光培養(yǎng)。
6、液體菌劑的培養(yǎng)，把帶有菌絲的固體菌劑小塊放入滅好菌的液體培養(yǎng)基中，每瓶(250ml的錐形瓶，每個(gè)錐形瓶放200ml液體培養(yǎng)基)放15-20個(gè)小塊，放好菌塊的錐形瓶放在搖床中進(jìn)行避光培養(yǎng)，溫度25℃，轉(zhuǎn)速160轉(zhuǎn)。
1.一種菌根真菌雙色蠟?zāi)⒌木鷦┲苽浞椒āＲ后w培養(yǎng)基的配方為：每升蒸餾水中溶解10g葡萄糖，2g麥芽糖，1g酵母提取物(酵母精)，0.5g磷酸二氫鉀，0.25g磷酸氫二銨，0.15g硫酸鎂，5ml濃度1％的二水氯化鈣，2.5ml濃度1％的氯化鈉，1.2ml濃度1％的氯化鐵。制作固體培養(yǎng)基與上述液體培養(yǎng)基配方一致，另需每升加瓊脂15g。培養(yǎng)基需高溫高壓滅菌。將固體菌劑，切成1cm3左右小塊，取一小塊放在倒好培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中央，有菌絲的一面貼在培養(yǎng)基上，封口膜封好后避光培養(yǎng)，培養(yǎng)出固體菌劑。液體菌劑的培養(yǎng)需把帶有菌絲的固體菌劑小塊放入滅好菌的液體培養(yǎng)基中，每瓶(250ml的錐形瓶，每個(gè)錐形瓶放200ml液體培養(yǎng)基)放15-20個(gè)小塊，放好菌塊的錐形瓶放在搖床中進(jìn)行避光培養(yǎng)，溫度25℃，轉(zhuǎn)速160轉(zhuǎn)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種菌根真菌雙色蠟?zāi)⒌木鷦┲苽浞椒?，其特征是，配制液體培養(yǎng)基時(shí)，為加速溶解，需將溶液加熱至60-70℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種菌根真菌雙色蠟?zāi)⒌木鷦┲苽浞椒?，其特征是，制作固體培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)將1升培養(yǎng)基所需的15g瓊脂分裝在5個(gè)250ml錐形瓶中，每瓶3g，再倒入200ml液體培養(yǎng)基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種菌根真菌雙色蠟?zāi)⒌木鷦┲苽浞椒?，其特征是，所有培養(yǎng)基均需放在錐形瓶中，并用封瓶膜封好后放在高壓滅菌鍋中121℃高壓蒸汽滅菌20min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種菌根真菌雙色蠟?zāi)⒌木鷦┲苽浞椒?，其特征是，固體菌劑及液體菌劑的制備過程均需在無菌操作臺(tái)上進(jìn)行，操作過程嚴(yán)格滅菌，固體及液體菌劑接種完畢后應(yīng)及時(shí)封口，以防所培養(yǎng)雙色蠟?zāi)⒕鷦┲袚饺腚s菌。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種菌根真菌雙色蠟?zāi)⒌木鷦┲苽浞椒?，其特征是，培養(yǎng)固體菌劑時(shí)，需將切成小塊的固體菌劑有菌絲的一面貼在新的培養(yǎng)基表面，以保證菌絲順利接觸培養(yǎng)基，盡快在新的培養(yǎng)基上生長繁殖。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種菌根真菌雙色蠟?zāi)⒌木鷦┲苽浞椒?，其特征是，固體培養(yǎng)基(培養(yǎng)皿)應(yīng)于常溫下避光培養(yǎng)，培養(yǎng)7-10天，待菌絲快長滿培養(yǎng)基表面時(shí)，可用于下一批菌劑的制備，暫時(shí)用不到的固體菌劑需避光放入4℃冰箱中冷藏保存。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種菌根真菌雙色蠟?zāi)⒌木鷦┲苽浞椒?，其特征是，液體培養(yǎng)基應(yīng)放入搖床中，在溫度25℃、轉(zhuǎn)速160轉(zhuǎn)條件下避光培養(yǎng)，培養(yǎng)7-10天，待液體培養(yǎng)基中的瓊脂小塊長成球狀菌落，且瓶中所有菌球體積占液體培養(yǎng)基體積超過2/3時(shí)，液體菌劑成熟，可以用于實(shí)驗(yàn)接種或生產(chǎn)實(shí)踐。暫時(shí)用不到的液體菌劑需避光放入4℃冰箱中冷藏保存。