本發(fā)明涉及納米抗體，具體而言，涉及一種抗mcherry標(biāo)簽的納米抗體、抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的進(jìn)展，基因工程重組蛋白的分離純化技術(shù)起著十分重要的作用，想要特異而快速地將目標(biāo)蛋白從復(fù)雜的樣品中分離純化出來(lái)就要選擇合適的蛋白純化方法，其中，最常用的蛋白純化方法就是親和層析(affinity?chromatography,ac)方法，該方法常用融合標(biāo)簽技術(shù)將蛋白與親和標(biāo)簽融合表達(dá)，利用親和標(biāo)簽進(jìn)一步純化出目的蛋白。目前研究人員已經(jīng)相繼開發(fā)出了許多具有不同功能的蛋白標(biāo)簽，包括：谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(gst)、多聚組氨酸(poly-his)、v5標(biāo)簽、mbp標(biāo)簽、mcherry標(biāo)簽、flag多肽以及免疫球蛋白的fc段等。融合標(biāo)簽的使用方便了目的蛋白的表達(dá)和純化，為研究目的蛋白的結(jié)構(gòu)和功能提供了便利手段。

2、mcherry是一種來(lái)源于珊瑚(discosoma)中的紅色熒光蛋白(rfp)變體衍生而來(lái)的紅色熒光標(biāo)簽。它可以在多種生物系統(tǒng)中用作細(xì)胞標(biāo)記和可視化工具，包括酵母、哺乳動(dòng)物細(xì)胞以及斑馬魚等小型脊椎動(dòng)物。mcherry具有較高的光穩(wěn)定性，能夠耐受多次激發(fā)，因此適用于長(zhǎng)時(shí)間的觀察和成像。它具有較高的熒光強(qiáng)度，使其能夠在各種觀察條件下進(jìn)行清晰、準(zhǔn)確的檢測(cè)。此外，mcherry與常見的綠色熒光蛋白(gfp)相比，具有更高的吸收和發(fā)射波長(zhǎng)，使其在某些情況下更能抵抗光漂白和背景干擾。mcherry可以與藍(lán)色、綠色和黃色熒光蛋白形成良好的光譜搭配，以實(shí)現(xiàn)多色共定位和時(shí)間序列成像。它也可以與抗體或其他標(biāo)簽結(jié)合，用于免疫熒光、蛋白質(zhì)相互作用研究以及細(xì)胞追蹤等應(yīng)用。在植物生物學(xué)研究中，mcherry被用作報(bào)告基因，以監(jiān)測(cè)基因表達(dá)和蛋白質(zhì)定位?？傊?，mcherry是一種非常有用的紅色熒光標(biāo)簽，具有高度的穩(wěn)定性和靈敏度，適用于各種生物系統(tǒng)和熒光成像應(yīng)用。

3、基于mcherry標(biāo)簽在蛋白表達(dá)純化、免疫熒光、蛋白質(zhì)相互作用研究以及細(xì)胞追蹤等生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的突出特性，研發(fā)出針對(duì)mcherry標(biāo)簽蛋白的抗體顯得尤為重要。

4、1993年，hamerscasterman等研究發(fā)現(xiàn)，在駱駝科動(dòng)物(駱駝，單峰駱駝和美洲駝)的體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了一類僅有重鏈二聚體(h2)的抗體，其主要是igg2和igg3類型，此類抗體由于缺乏輕鏈，于是將這種抗體稱為僅有重鏈的抗體(heavy?chain?only?like?antibody，hcabs)，而它們的抗原結(jié)合部位由一個(gè)結(jié)構(gòu)域組成，稱為vhh區(qū)，因此該類抗體也被稱為單結(jié)構(gòu)域抗體或者單域抗體(sdab)。由于該類抗體為去除恒定區(qū)后的可變區(qū)序列，分子量只有15kda，大約10納米的直徑，因此也被稱為納米抗體(nbs)。

5、目前將納米抗體技術(shù)與標(biāo)簽蛋白相結(jié)合的方法正逐漸應(yīng)用到生物研究領(lǐng)域中。其中，德國(guó)的chromotek公司已率先展開了nano-trap技術(shù)，該技術(shù)將標(biāo)簽蛋白的納米抗體與瓊脂糖凝膠或磁珠共價(jià)偶聯(lián)，形成一系列產(chǎn)品。由于納米抗體的優(yōu)質(zhì)特性，nano-trap縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間，并且降低了非特異性結(jié)合，從而極大的促進(jìn)了對(duì)蛋白質(zhì)功能研究的進(jìn)展。鑒于mcherry標(biāo)簽的功能特性及納米抗體的優(yōu)點(diǎn)，我們認(rèn)為有必要研發(fā)mcherry標(biāo)簽的納米抗體，以方便研究含有mcherry標(biāo)簽的融合蛋白或與mcherry相互作用的蛋白。

6、鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種抗mcherry標(biāo)簽的納米抗體以充分發(fā)揮納米抗體的優(yōu)越性能。該納米抗體既具有優(yōu)異的特異性抗原結(jié)合能力，又能克服傳統(tǒng)抗體熱穩(wěn)定性不足、生產(chǎn)成本高等固有缺陷。并進(jìn)一步提供其通過親和純化技術(shù)在蛋白質(zhì)互相作用的應(yīng)用。

2、本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：

3、第一方面，本發(fā)明提供了一種抗mcherry標(biāo)簽的納米抗體，納米抗體包括：

4、如seq?id?no.4所示的重鏈可變區(qū)中的cdr1、cdr2和cdr3；

5、如seq?id?no.5所示的重鏈可變區(qū)中的cdr1、cdr2和cdr3；

6、或如seq?id?no.6所示的重鏈可變區(qū)中的cdr1、cdr2和cdr3。

7、第二方面，本發(fā)明還提供了一種多價(jià)納米抗體、多特異性納米抗體或融合型納米抗體，其包括上述的抗mcherry標(biāo)簽的納米抗體。

8、第三方面，本發(fā)明還提供了一種抗體，其含有上述的抗mcherry標(biāo)簽的納米抗體或上述的多價(jià)納米抗體、多特異性納米抗體或融合型納米抗體。

9、第四方面，本發(fā)明還提供了一種核酸分子或包含核酸分子的重組載體，核酸分子編碼上述的抗mcherry標(biāo)簽的納米抗體；或核酸分子編碼上述的多價(jià)納米抗體、多特異性納米抗體或融合型納米抗體；或核酸分子編碼上述的抗體。

10、第五方面，本發(fā)明還提供了一種宿主細(xì)胞，其含有上述的重組載體。

11、第六方面，本發(fā)明還提供了一種制備上述的抗mcherry標(biāo)簽的納米抗體；或上述的多價(jià)納米抗體、多特異性納米抗體或融合型納米抗體；或上述的抗體的方法，其包括：培養(yǎng)上述的宿主細(xì)胞。

12、第七方面，本發(fā)明還提供了一種抗mcherry標(biāo)簽的納米抗體；或上述的多價(jià)納米抗體、多特異性納米抗體或融合型納米抗體；或上述的抗體在如下任一項(xiàng)的應(yīng)用，

13、(1)制備mcherry檢測(cè)產(chǎn)品；

14、(2)制備mcherry富集或純化產(chǎn)品；

15、(3)制備帶有mcherry標(biāo)簽的融合蛋白的富集產(chǎn)品或純化產(chǎn)品；

16、(4)制備用于帶有mcherry標(biāo)簽蛋白的互作蛋白的分離或純化的產(chǎn)品；

17、(5)制備帶有mcherry標(biāo)簽的特異性蛋白-dna復(fù)合體的分離或純化的產(chǎn)品；

18、(6)制備針對(duì)帶有mcherry標(biāo)簽的融合蛋白或細(xì)胞的示蹤檢測(cè)產(chǎn)品中的應(yīng)用。

19、第八方面，本發(fā)明還提供了一種帶有上述的抗mcherry標(biāo)簽的納米抗體；或上述的多價(jià)納米抗體、多特異性納米抗體或融合型納米抗體；或上述的抗體的產(chǎn)品，產(chǎn)品為納米顆粒、磁珠、瓊脂糖凝膠微球、硅膠微球、乳膠微球、試管、ep管、多孔板微量反應(yīng)板凹孔、膜、pdms膜或芯片。

20、第九方面，本發(fā)明還提供了一種分離mcherry、帶有mcherry標(biāo)簽的融合蛋白、mcherry互作蛋白或帶有mcherry標(biāo)簽的特異性蛋白-dna復(fù)合體的方法，其包括：將上述的抗mcherry標(biāo)簽的納米抗體、上述的多價(jià)納米抗體、多特異性納米抗體或融合型納米抗體；上述的抗體或產(chǎn)品與待分離樣本混合，洗脫。

21、本發(fā)明具有以下有益效果：

22、(1)本發(fā)明提供的3種抗mcherry標(biāo)簽的納米抗體對(duì)于mcherry抗原具有特異性的識(shí)別和結(jié)合能力，因此，顯示出本發(fā)明提供的納米抗體具有高度特異的結(jié)合活性。

23、(2)本發(fā)明還提供了一種含抗mcherry標(biāo)簽的納米抗體的親和純化材料(如包含抗mcherry納米抗體磁珠、瓊脂糖凝膠、瓊脂糖磁珠等)，其在mcherry標(biāo)簽蛋白的純化中顯示了優(yōu)異的性能，該特性可以用于開發(fā)mcherry標(biāo)簽蛋白親和純化試劑，從而用于帶有mcherry標(biāo)簽蛋白、mcherry抗原、帶有mcherry標(biāo)簽的融合蛋白、mcherry互作蛋白或帶有mcherry標(biāo)簽的特異性蛋白-dna復(fù)合體的分離、純化。

24、(3)本發(fā)明提供的納米抗體可以通過生物學(xué)方法大量培養(yǎng)表達(dá)純化生產(chǎn)，避免了使用小鼠腹水純化等繁瑣生產(chǎn)步驟，大大降低了生產(chǎn)成本，并且可以多次重復(fù)使用，多次重復(fù)使用仍具有較高的回收率，應(yīng)用前景廣闊。

25、(4)本發(fā)明提供的納米抗體具有較強(qiáng)的熱穩(wěn)定性，在溫度70℃，依然具有較強(qiáng)的生物活性。