1.一種用于同時量化mir-16-5p、mir-34c-5p、mir-9-3p和mir-9-5p的多重逆轉(zhuǎn)錄引物組合,所述多重逆轉(zhuǎn)錄引物組合包括:
2.一種用于同時量化多種靶mirna的多重逆轉(zhuǎn)錄引物組合,所述多重逆轉(zhuǎn)錄引物組合包括:
3.根據(jù)權利要求2所述的多重逆轉(zhuǎn)錄引物組合,其中所述多種莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物中的每種莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物的長度為約40-65nt。
4.根據(jù)權利要求2所述的多重逆轉(zhuǎn)錄引物組合,其中所述多種莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物中的每種莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物的所述錨定序列的長度為約3-12nt。
5.根據(jù)權利要求2所述的多重逆轉(zhuǎn)錄引物組合,其中所述多種莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物包括具有第一莖環(huán)序列和第一錨定序列的第一莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物;以及
6.根據(jù)權利要求5所述的多重逆轉(zhuǎn)錄引物組合,其中所述第一莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物的所述第一錨定序列與所述多種靶mirna中的第一靶mirna的獨特的3'序列互補,并且所述第二莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物的所述第二錨定序列與所述多種靶mirna中的第二靶mirna的獨特的3'序列互補。
7.根據(jù)權利要求5所述的多重逆轉(zhuǎn)錄引物組合,其中所述多種莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物進一步包括具有第三莖環(huán)序列和第三錨定序列的第三莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物,
8.根據(jù)權利要求7所述的多重逆轉(zhuǎn)錄引物組合,其中所述多種莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物進一步包括具有第四莖環(huán)序列和第四錨定序列的第四莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物,
9.根據(jù)權利要求8所述的多重逆轉(zhuǎn)錄引物組合,其中所述多重逆轉(zhuǎn)錄引物組合具有多特異性,使得所述第一莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物有效地且僅逆轉(zhuǎn)錄所述第一靶mirna,所述第二莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物有效地且僅逆轉(zhuǎn)錄所述第二靶mirna,所述第三莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物有效地且僅逆轉(zhuǎn)錄所述第三靶mirna,并且所述第四莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物有效地且僅逆轉(zhuǎn)錄所述第四靶mirna。
10.根據(jù)權利要求9所述的多重逆轉(zhuǎn)錄引物組合,其中所述第一靶mirna、所述第二靶mirna、所述第三靶mirna和所述第四靶mirna中的每種靶mirna選自由mir-16-5p、mir-34c-5p、mir-9-3p和mir-9-5p組成的組,
11.根據(jù)權利要求8所述的多重逆轉(zhuǎn)錄引物組合,其中所述第一莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物包括seq?id?no.5的核酸序列,所述第二莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物包括seq?id?no.6的核酸序列,所述第三莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物包括seq?id?no.7的核酸序列,并且所述第四莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物包括seqid?no.8的核酸序列。
12.一種用于同時量化多種靶mirna的表達水平的試劑盒,所述試劑盒包括:
13.根據(jù)權利要求12所述的試劑盒,其中
14.根據(jù)權利要求13所述的試劑盒,其中所述第一錨定序列與所述多種靶mirna中的第一靶mirna的3'序列互補,并且所述第二錨定序列與所述多種靶mirna中的第二靶mirna的獨特的3'序列互補。
15.根據(jù)權利要求12所述的試劑盒,其進一步包括:
16.根據(jù)權利要求15所述的試劑盒,其中
17.根據(jù)權利要求16所述的試劑盒,其進一步包括:
18.根據(jù)權利要求17所述的試劑盒,其中
19.一種用于同時量化多種靶mirna的表達水平的試劑盒,所述試劑盒包括:
20.一種同時量化mir-16-5p、mir-34c-5p、mir-9-3p和mir-9-5p的方法,所述方法包括使用根據(jù)權利要求2所述的多重逆轉(zhuǎn)錄引物組合執(zhí)行多重rt-qpcr。
21.一種用于使用mir-16-5p、mir-34c-5p、mir-9-3p和mir-9-5p的定量結(jié)果來確定活受試者的醫(yī)學狀況的方法,所述方法包括: