本發(fā)明涉及與icos的結(jié)合力得到增大的icos-l(t-細胞可誘導(dǎo)共刺激分子-配體)變異體。

背景技術(shù)：

1、用于癌癥治療的藥品大體分為低分子藥品和高分子藥品，與沒有特異性而副作用相對大的低分子藥品相比，具有特異性的高分子藥品作為治療劑而備受關(guān)注。為了逃避通過免疫細胞的殺傷作用機制，癌細胞在細胞表面表達正常細胞抑制免疫細胞激活時利用的免疫檢查點(immune?checkpoint)蛋白，近來，作為用于治療癌癥的方法，有關(guān)免疫檢查點抑制蛋白的研究正活躍地進行著。據(jù)報告，表現(xiàn)出對免疫檢查點抑制劑的反應(yīng)的患者在治療過程中的副作用少，與以往的抗癌劑相比，對多種癌癥具有優(yōu)秀的治療效果，因此其利用呈爆發(fā)式增長，但仍有一半以上的患者對臨床上得到認可的免疫檢查點抑制劑沒有反應(yīng)，一部分初期反應(yīng)者在治療后仍觀測到重新引起癌癥惡化的耐藥性。對于免疫檢查點抑制劑的耐藥性原因隨患者的腫瘤免疫學(xué)特性的不同而不同，因此，為了有效的治療以及節(jié)減治療費用，需要能夠篩選適合治療的患者的新型生物標記物，據(jù)報告，在許多臨床前及臨床研究病理中，利用免疫刺激藥物的聯(lián)合治療方法提高患者的反應(yīng)率，因此，還需要有效的免疫刺激治療劑。

2、最近，隨著抑制細胞毒性t淋巴細胞相關(guān)蛋白4(ctla-4，cytotoxic?t-lymphocyte-associated?protein?4)、程序性細胞死亡蛋白-1(pd-1，programmed?celldeath?protein?1)等免疫檢查點蛋白的作用的多種抗體治療劑的開發(fā)，它們的臨床需要呈爆發(fā)式增長，因此，預(yù)計免疫檢查點抑制劑市場將在2020年到2027年以平均每年21.8％的增速持續(xù)成長。然而，由于抗體為分子量為150000的巨大分子蛋白質(zhì)，難以侵入癌組織內(nèi)部，因此，具有難以抑制腫瘤微環(huán)境(tumor?micro-environment)內(nèi)部腫瘤細胞與免疫細胞的免疫檢查點蛋白的作用的缺點。為了更為有效的治療，對于大小比抗體小得多且易于侵入癌組織內(nèi)部的蛋白質(zhì)治療劑的需求日益抬頭。

3、]另一方面，作為用于t細胞激活的共刺激受體的可誘導(dǎo)共刺激分子(icos，inducible?co-stimulator)為激活t細胞對外部抗原的反應(yīng)的t細胞特異性共刺激分子，據(jù)報告，與多種癌癥的治療預(yù)后相關(guān)，揭示其不僅能夠用作用于免疫刺激的治療劑，還具有用作用于預(yù)測免疫檢查點抑制劑治療反應(yīng)的生物標記物的可能性。為了觀測存在于腫瘤微環(huán)境中的t細胞，需要利用放射性同位素的實時成像或分離癌組織后通過染色的icos表達與否的檢驗，優(yōu)選地，使用大小比巨大分子的抗體小很多且易于侵入癌組織的小蛋白分子。并且，icos靶向物質(zhì)作為與免疫檢查點抑制劑的聯(lián)合治療劑的功效也得到驗證，從通過促進icos的活性來進一步激活在癌細胞殺滅中起到非常重要的作用的細胞毒性t細胞或通過殺滅表達icos的調(diào)節(jié)t細胞來誘導(dǎo)抗癌功效的兩個層面出發(fā)來進行治療劑的開發(fā)研究。然而，野生型icos-l對icos具有非常低的親和力(平衡解離常數(shù)＝～700nm)，因此具有難以利用的問題。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、技術(shù)問題

2、本發(fā)明的目的在于，提供icos-l變異體。

3、并且，本發(fā)明的目的在于，提供包含上述icos-l變異體的免疫調(diào)節(jié)蛋白。

4、并且，本發(fā)明的目的在于，提供包含上述icos-l變異體的偶聯(lián)物。

5、并且，本發(fā)明的目的在于，提供t細胞激活劑。

6、并且，本發(fā)明的目的在于，提供工程細胞。

7、并且，本發(fā)明的目的在于，提供抗癌輔助劑。

8、并且，本發(fā)明的目的在于，提供用于治療或預(yù)防癌癥的藥物組合物。

9、并且，本發(fā)明的目的在于，提供癌癥診斷用組合物。

10、并且，本發(fā)明的目的在于，提供提供用于診斷癌癥的信息的方法。

11、并且，本發(fā)明的目的在于，提供對免疫檢查點抑制劑的治療反應(yīng)性預(yù)測或預(yù)后診斷方法。

12、并且，本發(fā)明的目的在于，提供icos-l變異體、免疫調(diào)節(jié)蛋白、偶聯(lián)物或工程細胞在預(yù)防或治療癌癥中的用途。

13、同時，本發(fā)明的目的在于，提供癌癥的治療方法。

14、技術(shù)方案

15、為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供與icos的結(jié)合力得到增大的icos-l變異體。

16、并且，本發(fā)明提供包含上述icos-l變異體及免疫球蛋白的fc結(jié)構(gòu)域或其變異體的免疫調(diào)節(jié)蛋白。

17、并且，本發(fā)明提供包含上述icos-l變異體或免疫調(diào)節(jié)蛋白及靶向部分的偶聯(lián)物。

18、并且，本發(fā)明包含上述icos-l變異體、免疫調(diào)節(jié)蛋白或偶聯(lián)物的t細胞激活劑。

19、并且，本發(fā)明提供包含上述icos-l變異體、免疫調(diào)節(jié)蛋白或偶聯(lián)物的工程細胞。

20、并且，本發(fā)明提供包含上述icos-l變異體、免疫調(diào)節(jié)蛋白、偶聯(lián)物或工程細胞的抗癌輔助劑。

21、并且，本發(fā)明提供包含上述icos-l變異體、免疫調(diào)節(jié)蛋白、偶聯(lián)物或工程細胞的用于治療或預(yù)防癌癥的藥物組合物。

22、并且，本發(fā)明提供包含上述icos-l變異體、免疫調(diào)節(jié)蛋白、偶聯(lián)物或工程細胞的癌癥診斷用組合物。

23、并且，本發(fā)明提供提供用于診斷癌癥的信息的方法。

24、并且，本發(fā)明提供對免疫檢查點抑制劑的治療反應(yīng)性預(yù)測或預(yù)后診斷方法。

25、并且，本發(fā)明提供icos-l變異體、免疫調(diào)節(jié)蛋白、偶聯(lián)物或工程細胞在預(yù)防或治療癌癥中的用途。

26、同時，本發(fā)明提供癌癥的治療方法，包括以藥學(xué)上有效的量向患有癌癥的個體給藥icos-l變異體、免疫調(diào)節(jié)蛋白、偶聯(lián)物或工程細胞的步驟。

27、發(fā)明的效果

28、與野生型icos-l及以往的icos-l變異體相比，本發(fā)明的icos-l變異體具有顯著增加的與icos的結(jié)合力(～約100倍)，與作為巨大分子的igg抗體相比，大小顯著小，易于侵入腫瘤微環(huán)境，易于生產(chǎn)，易于通過與多種免疫治療劑的融合來應(yīng)用為治療劑及成像分子，可以在癌癥治療及診斷中有效使用。

技術(shù)特征：

1.一種icos-l變異體，其特征在于，選自由野生型icos-l的氨基酸序列中的第4位、第51位、第52位、第54位、第57位、第74位、第130位及低234位氨基酸組成的組中的一個以上氨基酸被與野生型氨基酸不同的序列取代。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的icos-l變異體，其特征在于，野生型icos-l的氨基酸包含序列1的氨基酸序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的icos-l變異體，其特征在于，包含選自由e4d、q51p、q51h、、n52s、s54n、n57h、l74r、s130c及k234r組成的組中的一種以上氨基酸取代。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的icos-l變異體，其特征在于，包含q51p及n57h的氨基酸取代。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的icos-l變異體，其特征在于，包含q51h、s54n及s130c的氨基酸取代。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的icos-l變異體，其特征在于，包含n52s及k234r的氨基酸取代。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的icos-l變異體，其特征在于，包含e4d及q51p的氨基酸取代。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的icos-l變異體，其特征在于，包含q51p及l(fā)74r的氨基酸取代。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的icos-l變異體，其特征在于，還包含跨膜結(jié)構(gòu)域。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的icos-l變異體，其特征在于，還包含與跨膜結(jié)構(gòu)域連接的細胞質(zhì)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。

11.一種免疫調(diào)節(jié)蛋白，其特征在于，包含權(quán)利要求1所述的icos-l變異體及免疫球蛋白的fc結(jié)構(gòu)域或其變異體。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的免疫調(diào)節(jié)蛋白，其特征在于，fc結(jié)構(gòu)域變異體在野生型人igg1的fc結(jié)構(gòu)域中包含一個以上的氨基酸取代。

13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的免疫調(diào)節(jié)蛋白，其特征在于，fc結(jié)構(gòu)域變異體為與野生型人igg1的fc相比表現(xiàn)出效應(yīng)功能降低的fc結(jié)構(gòu)域變異體。

14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的免疫調(diào)節(jié)蛋白，其特征在于，fc結(jié)構(gòu)域變異體為野生型人igg1的fc結(jié)構(gòu)域中根據(jù)kabat編號系統(tǒng)編號的第234位、第235位或第329位氨基酸被與野生型氨基酸不同的序列取代的fc結(jié)構(gòu)域變異體。

15.根據(jù)權(quán)利要求11所述的免疫調(diào)節(jié)蛋白，其特征在于，fc結(jié)構(gòu)域變異體包含l234a、l235a及p329g的氨基酸取代。

16.一種偶聯(lián)物，其特征在于，包含權(quán)利要求1所述的icos-l變異體或權(quán)利要求11所述的免疫調(diào)節(jié)蛋白及靶向部分。

17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的偶聯(lián)物，其特征在于，靶向部分與免疫細胞表面的分子特異性結(jié)合。

18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的偶聯(lián)物，其特征在于，免疫細胞為抗原呈遞細胞或淋巴細胞。

19.根據(jù)權(quán)利要求16所述的偶聯(lián)物，其特征在于，靶向部分為與腫瘤表面的分子結(jié)合的腫瘤定位部分。

20.根據(jù)權(quán)利要求16所述的偶聯(lián)物，其特征在于，靶向部分為抗體或具有其免疫活性的片段。

21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的偶聯(lián)物，其特征在于，抗體為西妥昔單抗、帕尼單抗、扎魯木單抗、伊諾珠單抗、曲妥珠單抗、ado-曲妥珠單抗、emtansine、托西莫單抗、利妥昔單抗、替伊莫單抗、達利珠單抗、吉妥珠單抗、阿侖單抗、cea掃描fab片段、oc125單克隆抗體、ab75705、b72.3、貝伐珠單抗、阿法替尼、阿西替尼、博舒替尼、卡博替尼、塞瑞替尼、克唑替尼、達拉非尼、達沙替尼、地努妥昔單抗、厄洛替尼、依維莫司、依魯替尼、伊馬替尼、拉帕替尼、樂伐替尼、尼洛替尼、奧拉帕尼、奧拉單抗、帕博西尼、帕唑帕尼、帕妥珠單抗、雷莫蘆單抗、瑞戈非尼、魯索替尼、索拉非尼、舒尼替尼、替西羅莫司、曲美替尼、凡德他尼、維羅非尼、維莫德吉、巴利昔單抗、伊匹單抗、納武單抗、派姆單抗、mpdl3280a、匹迪利珠單抗、amp-224、msb001078c、medi4736、bms-935559、ly3300054、阿替利珠單抗、阿維魯單抗或杜瓦魯單抗。

22.一種t細胞激活劑，其特征在于，包含權(quán)利要求1所述的icos-l變異體、權(quán)利要求11所述的免疫調(diào)節(jié)蛋白或權(quán)利要求16所述的偶聯(lián)物。

23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的t細胞激活劑，其特征在于，t細胞為細胞毒性t細胞或嵌合抗原受體t細胞。

24.一種多核苷酸，其特征在于，包含編碼權(quán)利要求9所述的icos-l變異體的核酸及編碼重組抗原受體的一條以上鏈的一種以上核酸。

25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的多核苷酸，其特征在于，重組抗原受體為嵌合抗原受體或工程t細胞受體。

26.一種工程細胞，其特征在于，包含權(quán)利要求1所述的icos-l變異體、權(quán)利要求11所述的免疫調(diào)節(jié)蛋白或權(quán)利要求16所述的偶聯(lián)物。

27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的工程細胞，其特征在于，還包含嵌合抗原受體或工程t細胞受體。

28.一種抗癌輔助劑，其特征在于，包含權(quán)利要求1所述的icos-l變異體、權(quán)利要求11所述的免疫調(diào)節(jié)蛋白、權(quán)利要求16所述的偶聯(lián)物或權(quán)利要求26所述的工程細胞。

29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的抗癌輔助劑，其特征在于，上述抗癌輔助劑為增進免疫檢查點抑制劑的抗癌效果的免疫抗癌輔助劑。

30.根據(jù)權(quán)利要求28所述的抗癌輔助劑，其特征在于，上述抗癌輔助劑與免疫檢查點抑制劑同時、單獨或依次聯(lián)合給藥。

31.根據(jù)權(quán)利要求29所述的抗癌輔助劑，其特征在于，免疫檢查點抑制劑為抗pd-1抗體、抗pd-l1抗體、抗ctla-4抗體或它們的變異體。

32.一種用于預(yù)防或治療癌癥的藥物組合物，其特征在于，包含權(quán)利要求1所述的icos-l變異體、權(quán)利要求11所述的免疫調(diào)節(jié)蛋白、權(quán)利要求16所述的偶聯(lián)物或權(quán)利要求26所述的工程細胞作為有效成分。

33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的用于預(yù)防或治療癌癥的藥物組合物，其特征在于，癌癥為選自由腦腫瘤、黑色素瘤、骨髓瘤、非小細胞肺癌、口腔癌、肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭頸癌、宮頸癌、卵巢癌、大腸癌、小腸癌、直腸癌、輸卵管癌、肛周癌、子宮內(nèi)膜癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金病、食管癌、淋巴結(jié)癌、膀胱癌、膽囊癌、內(nèi)分泌腺癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴細胞淋巴瘤、腎或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤、脊髓腫瘤、腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤及腦垂體腺瘤組成的組中的一種以上。

34.一種癌癥診斷用組合物，其特征在于，包含權(quán)利要求1所述的icos-l變異體、權(quán)利要求11所述的免疫調(diào)節(jié)蛋白、權(quán)利要求16所述的偶聯(lián)物或權(quán)利要求26所述的工程細胞。

35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的癌癥診斷用組合物，其特征在于，還包含選自由顯色酶、放射性同位素、生色團、發(fā)光物質(zhì)及熒光物質(zhì)組成的組中的一種。

36.一種提供用于診斷癌癥的信息的方法，其特征在于，包括：

37.一種對免疫檢查點抑制劑的治療反應(yīng)性預(yù)測或預(yù)后診斷方法，其特征在于，包括使用權(quán)利要求1所述的icos-l變異體、權(quán)利要求11所述的免疫調(diào)節(jié)蛋白、權(quán)利要求16所述的偶聯(lián)物或權(quán)利要求26所述的工程細胞確認從處理免疫檢查點抑制劑的對象中分離的生物試樣中icos的表達量的步驟。

38.一種權(quán)利要求1所述的icos-l變異體、權(quán)利要求11所述的免疫調(diào)節(jié)蛋白、權(quán)利要求16所述的偶聯(lián)物或權(quán)利要求26所述的工程細胞在預(yù)防或治療癌癥中的用途。

39.一種癌癥的治療方法，其特征在于，包括以藥學(xué)上有效的量向患有癌癥的個體給藥權(quán)利要求1所述的icos-l變異體、權(quán)利要求11所述的免疫調(diào)節(jié)蛋白、權(quán)利要求16所述的偶聯(lián)物或權(quán)利要求26所述的工程細胞的步驟。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及與ICOS的結(jié)合力得到增大的ICOS?L變異體，與野生型ICOS?L及以往的ICOS?L變異體相比，本發(fā)明的ICOS?L變異體具有顯著增加的與ICOS的結(jié)合力(～約100倍)，與作為巨大分子的IgG抗體相比，大小顯著小，易于侵入腫瘤微環(huán)境，易于生產(chǎn)，易于通過與多種免疫治療劑的融合來應(yīng)用為治療劑及成像分子，可以在癌癥治療及診斷中有效使用。

技術(shù)研發(fā)人員：鄭相澤,河志妍
受保護的技術(shù)使用者：高麗大學(xué)校產(chǎn)學(xué)協(xié)力團
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2