本公開大體上涉及農(nóng)業(yè)、植物生物技術(shù)和分子生物學(xué)領(lǐng)域。更具體地說，本公開涉及用于在轉(zhuǎn)基因甜菜植物中提供除草劑耐受性的組合物和方法。更具體地說，提供了甜菜品系bv_csm63713的重組d?na分子。還提供了包含甜菜品系bv_csm63713的轉(zhuǎn)基因甜菜植物、植物部分、種子、細胞和農(nóng)產(chǎn)品，以及使用包含甜菜品系bv_csm63713的轉(zhuǎn)基因甜菜植物、植物部分、種子、細胞和農(nóng)產(chǎn)品的方法；檢測甜菜品系bv_csm63713的方法；以及控制雜草的方法。包含甜菜品系bv_csm63713的轉(zhuǎn)基因甜菜植物、植物部分、種子和細胞表現(xiàn)出對以下各物的耐受性：苯甲酸生長素，例如麥草畏(dicamba)；5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(epsps)抑制劑，例如草甘膦(glyphosate)；以及谷氨酰胺合成酶抑制劑，例如草銨膦(glufosinate)。

背景技術(shù)：

1、甜菜(beta?vulgaris)在許多國家是重要的經(jīng)濟作物，并且除草劑在作物生產(chǎn)中控制雜草的重要作用已得到充分證實。雜草會與農(nóng)作物爭奪空間、養(yǎng)分、水和光照，并且可能會污染收成，因此，控制雜草對于獲得成功的作物產(chǎn)量至關(guān)重要。事實證明，生物技術(shù)方法在通過表達異源基因(轉(zhuǎn)基因)生產(chǎn)對特定除草劑具有耐受性的轉(zhuǎn)基因甜菜中極為有用。轉(zhuǎn)基因除草劑耐受性使得能夠在作物生長環(huán)境中使用除草劑，而不會對作物造成損傷或?qū)ψ魑镌斐傻膿p傷極小(例如損傷小于約10％)。甜菜的轉(zhuǎn)基因性狀已被用于賦予對草甘膦的耐受性，并且被廣泛用于商業(yè)甜菜生產(chǎn)的雜草控制。轉(zhuǎn)基因草甘膦耐受性是通過在甜菜基因組中插入產(chǎn)生草甘膦靶的變體(即，酶5-烯醇丙酮-3-磷酸莽草酸合酶(epsps))的能力產(chǎn)生的。這一變體對草甘膦具有耐受性，并且是來自農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)菌株cp4的cp4-epsps。

2、除草劑耐受性狀可以單獨使用，或與其他性狀(諸如對另一種除草劑的耐受性)組合。對于提供雜草控制選擇，除草劑耐受性狀的組合是理想的，這將增加栽培者的靈活性并能夠使用多種除草劑作用模式來控制具有挑戰(zhàn)性的雜草。在基因組中組合多種所需性狀可以通過以下方式實現(xiàn)：通過在各自具有所需性狀的兩個親本之間進行雜交，并鑒別具有所需性狀組合的子代植物，或者通過用一個或多個提供額外所需性狀的基因，經(jīng)由隨機整合或經(jīng)由一個或多個提供額外所需性狀的基因的靶向整合再轉(zhuǎn)化包含一個或多個所需性狀的轉(zhuǎn)基因植物?；蛘?，可以通過將多個基因以單個dna分子形式插入基因組中的一個位置或基因座中來實現(xiàn)多種所需性狀的組合。在甜菜中的單一基因座處組合多種除草劑耐受性狀將提供有用的雜草控制手段，使得在后續(xù)繁育成具有一系列不同的優(yōu)良種質(zhì)的雜交植物的過程中維持起來更加簡單且成本更低。

3、轉(zhuǎn)基因在轉(zhuǎn)基因植物、部分、種子或細胞中的表達且因此其有效性可能受到許多因素的影響，例如轉(zhuǎn)基因表達盒中使用的調(diào)控元件、這些調(diào)控元件的組合和/或相互作用、轉(zhuǎn)基因插入位點的染色體位置、在轉(zhuǎn)基因插入位點處或附近的基因組的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)，以及靠近轉(zhuǎn)基因插入位點的任何內(nèi)源性順式和/或反式調(diào)控元件或基因的存在或接近性。此外，當轉(zhuǎn)基因插入物包含多個表達盒，且每個表達盒都有賦予不同性狀的不同轉(zhuǎn)基因時，轉(zhuǎn)基因植物中性狀的表現(xiàn)會變得更加復(fù)雜。這些差異或因素可能導(dǎo)致同一表達盒中不同轉(zhuǎn)基因插入品系之間轉(zhuǎn)基因表達水平或者轉(zhuǎn)基因表達的空間或時間模式的變化。此外，不同的轉(zhuǎn)基因品系在這些品系的分子質(zhì)量方面也會有所不同。例如，轉(zhuǎn)基因品系可在一個或多個染色體位置處含有兩個或更多個轉(zhuǎn)基因插入物拷貝，或者轉(zhuǎn)基因插入物可以相對于預(yù)定插入物為截短的或含有載體骨架序列，或者轉(zhuǎn)基因可以被插入到內(nèi)源基因或重復(fù)區(qū)域中。這些特征可能會導(dǎo)致不期望的后果，例如基因沉默、轉(zhuǎn)基因的模式和/或表達的改變、內(nèi)源基因的模式和/或表達的改變。不同品系間也可能存在不期望的表型或農(nóng)藝差異。

4、即使在靶序列插入的情況下，在轉(zhuǎn)基因品系的亞群中也觀察到獨立但基因上相同的靶序列插入(tsi)品系之間轉(zhuǎn)基因表達水平的變化(verkest等人,2019)。這種表達變化和沉默的發(fā)生與轉(zhuǎn)基因序列無關(guān)，并且可以歸于dna甲基化，而dna甲基化又與不同的dna甲基化機制相關(guān)聯(lián)。在單純的tsi品系亞群中觀察到轉(zhuǎn)基因表達的顯著變化的事實表明，即使是在整合品系成為靶時，為了鑒別幾代中具有穩(wěn)定的感興趣基因表達的tsi品系，仍然需要進行選擇，類似于有關(guān)隨機整合品系的實踐。

5、在商業(yè)上有用的多基因轉(zhuǎn)基因品系要求轉(zhuǎn)基因插入物中的每個轉(zhuǎn)基因以成功獲得該性狀所需的方式表達，并且涉及嚴格縝密的測試、評估和選擇。一旦選擇了一種耐受性狀，就設(shè)計出各個表達盒并在體外和/或植物體內(nèi)進行測試，以選出每種性狀的最佳表達盒。這些測試包括針對轉(zhuǎn)基因的期望空間和時間表達測試不同調(diào)控元件(例如啟動子、內(nèi)含子、前導(dǎo)序列和3’utr)和不同調(diào)控元件的組合，以及檢查是否將轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物(蛋白質(zhì))靶向亞細胞區(qū)室，例如葉綠體。接著，將針對每種性狀選擇的表達盒組合于一個構(gòu)建體中，并且對所述構(gòu)建體進行測試以確保所有表達盒一起良好地發(fā)揮作用且每個轉(zhuǎn)基因都得到正確表達。然后，使用選定的表達盒組合進行轉(zhuǎn)化，以產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因植物。由于用包含一個或多個轉(zhuǎn)基因盒的t-dna構(gòu)建體進行農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化在植物基因組中可插入一個或多個轉(zhuǎn)基因的位置方面具有很大的可變性和隨機性，故每個轉(zhuǎn)基因品系都是獨特的，且轉(zhuǎn)基因dna隨機且獨特地插入不同的植物基因組位置。因此，所選擇的表達盒組合被用于產(chǎn)生數(shù)百個獨特的多基因轉(zhuǎn)基因品系，每個品系都是外來dna隨機插入不同植物基因組位置中的結(jié)果。

6、由于這些原因，來自同一轉(zhuǎn)化構(gòu)建體的不同轉(zhuǎn)化品系的性能可能會有所不同，并且需要鑒別賦予最有利性狀或特征而沒有其他潛在的異常類型或問題的轉(zhuǎn)化品系，以選擇用于商業(yè)用途的優(yōu)質(zhì)品系。因此，必須產(chǎn)生大量獨立轉(zhuǎn)化品系并進行分析，以選擇具有優(yōu)質(zhì)商業(yè)特性的品系，這將是一項重大的項目，涉及在許多不同的轉(zhuǎn)化品系中進行分析和選擇。

7、為了產(chǎn)生用于商業(yè)用途的多基因品系，需要嚴格縝密的分子表征、溫室測試以及在多個地點和多種條件下對不同種質(zhì)進行多年田間試驗，由此允許獲得大量的農(nóng)藝、表型和分子數(shù)據(jù)。然后，對所得數(shù)據(jù)進行分析以選出適于商業(yè)目的的品系。商業(yè)多基因品系在被鑒別為具有期望的轉(zhuǎn)基因表達、分子特征、功效和田間表現(xiàn)后，就可以使用植物育種方法將其作為具有多種除草劑耐受性狀的單一基因座滲入到其他甜菜基因背景中。由此產(chǎn)生的甜菜品種含有新性狀以及其他期望的品質(zhì)，例如天然性狀、疾病耐受性狀、高產(chǎn)種質(zhì)和/或一種或多種其他轉(zhuǎn)基因除草劑耐受性狀。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本文提供了重組dna分子。此類重組dna分子的實例包括選自由以下組成的組的序列：seq?id?no:10；seq?id?no:1；seq?id?no:2；seq?id?no:3；seq?id?no:4；seq?id?no:5；seq?id?no:6；seq?id?no:7；seq?id?no:8，和seq?id?no:9；具有與seq?id?no:10的全長或seq?id?no:9的全長至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％或至少99.9％相同的核苷酸序列的多核苷酸；以及前述任一者的完整互補序列。在一些實施方案中，重組dna分子源自于包含甜菜品系bv_csm63713的植物、種子、植物部分、植物細胞、子代植物或商品產(chǎn)品，包含所述品系的種子的代表性樣品已以atcc登錄號pta-127098保藏。在一些實施方案中，重組dna分子被包含在含甜菜品系bv_csm63713的植物、種子、植物部分、植物細胞或子代植物中，包含所述品系的種子的代表性樣品已以atcc登錄號pta-127098保藏。重組dna分子可通過將異源核酸分子插入甜菜植物或甜菜細胞的基因組dna而形成。重組dna分子可包含用于診斷甜菜品系bv_csm63713的存在的擴增子。

2、提供了充當dna探針的dna分子。此類dna分子的實例是包含長度足以充當dna探針的多核苷酸區(qū)段的dna分子，它在嚴格雜交條件下與樣品中的甜菜品系bv_csm63713?dna特異性雜交。檢測到dna分子在嚴格雜交條件下雜交將診斷樣品中存在甜菜品系bv_csm63713。

3、還提供了一種dna分子，該dna分子包含長度足以充當dna探針的多核苷酸區(qū)段，該多核苷酸區(qū)段特異性檢測樣品中的以下至少一者：在側(cè)接甜菜基因組dna與甜菜品系bv_csm63713的轉(zhuǎn)基因插入物之間的5’接合序列；在甜菜品系bv_csm63713的轉(zhuǎn)基因插入物與側(cè)接甜菜基因組dna之間的3’接合序列；seq?id?no:9；以及seq?id?no:9的片段，所述片段包含seq?id?no:9的足夠長度的連續(xù)核苷酸以將該序列鑒別為bv_csm63713的轉(zhuǎn)基因插入物的片段。

4、dna探針可以包含seq?id?no:36?；蛘撸洚攄na探針的dna分子可包含選自由以下組成的組的核苷酸序列：seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3、seq?id?no:4、seq?idno:5、se?q?id?no:6、seq?id?no:7、seq?id?no:8、seq?id?no:9、seq?id?no:10及前述任一者的互補序列。所述樣品可以源自于甜菜植物、種子、植物部分、植物細胞、子代植物或商品產(chǎn)品。

5、提供了dna分子對。所述dna分子對包含第一dna分子和第二dna分子。第一dna分子和第二dna分子包含seq?id?no:10的片段或其互補序列，并且當與包含甜菜品系bv_csm63713的dna一起用于擴增反應(yīng)中時充當dna引物，以產(chǎn)生用于診斷樣品中的甜菜品系bv_csm63713的擴增子。例如，第一dna分子和第二dna分子可以包含seq?id?no:14和seq?idno:18；seq?id?no:15和seq?id?no:18；seq?id?no:19和seq?id?no:23；seq?id?no:20和seqid?no:23；seq?id?no:25和seq?id?no:26；seq?id?no:31和seq?id?no:26；seq?id?no:33和seq?id?no:29；seq?id?no:28和seq?id?no:29；或seq?id?no:34和seq?id?no:35。擴增子可包含選自由以下組成的組的核苷酸序列：seq?id?no:1；seq?id?no:2；seq?id?no:3；seq?idno:4；seq?id?no:5；seq?id?no:6；seq?id?no:7；seq?id?no:8；seq?id?no:9；seq?id?no:10；以及seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3、seq?id?no:4、seq?id?no:5、seq?id?no:6、seq?id?no:7、seq?id?no:8中任一者的片段，其中所述片段是至少10個核苷酸長并包含seq?id?no:10的核苷酸1,000–1,001或12,722–12,723。

6、提供了用于檢測源自于甜菜種子、植物、植物部分、植物細胞、子代植物或商品產(chǎn)品的樣品中甜菜品系bv_csm63713的存在的方法。在此類方法的第一個實例中，所述方法包括：a)使樣品與本文所描述的充當探針的任何dna分子接觸；b)使樣品和充當探針的dna分子經(jīng)歷嚴格雜交條件；以及c)檢測充當探針的dna分子與樣品中dna分子的雜交。充當探針的dna分子與樣品中dna分子雜交將診斷樣品中甜菜品系bv_csm63713的存在。

7、提供了檢測源自于甜菜種子、植物、植物部分、植物細胞、子代植物或商品產(chǎn)品的樣品中甜菜品系bv_csm63713的存在的另一種方法。所述方法包括：使樣品與本文所描述的任何dna分子對接觸；b)進行足以產(chǎn)生dna擴增子的擴增反應(yīng)；以及c)檢測dna擴增子的存在。dna擴增子包含以下至少一者：側(cè)接甜菜基因組dna與甜菜品系bv_csm63713的轉(zhuǎn)基因插入物之間的5’接合序列；側(cè)接甜菜基因組dna與甜菜品系bv_csm63713的轉(zhuǎn)基因插入物之間的3’接合序列；seq?id?no:9；以及seq?id?no:9的片段，所述片段包含seq?id?no:9的足夠長度的連續(xù)核苷酸以將所述序列鑒別為bv_csm63713的轉(zhuǎn)基因插入物的片段。dna擴增子的存在表明樣品中甜菜品系bv_csm63713的存在。dna擴增子可以是至少10個核苷酸長、至少11個核苷酸長、至少12個核苷酸長、至少13個核苷酸長、至少14個核苷酸長、至少15個核苷酸長、至少16個核苷酸長、至少17個核苷酸長、至少18個核苷酸長、至少19個核苷酸長、至少20個核苷酸長、至少25個核苷酸長、至少30個核苷酸長、至少35個核苷酸長、至少40個核苷酸長、至少45個核苷酸長、至少50個核苷酸長、至少60個核苷酸長、至少70個核苷酸長、至少80個核苷酸長、至少90個核苷酸長或至少100個核苷酸長。dna擴增子可包含選自由以下組成的組的核苷酸序列：seq?id?no:10；seq?id?no:9；seq?id?no:8；seq?id?no:7；seq?idno:6；seq?id?no:5；seq?id?no:4；seq?id?no:3；seq?id?no:2，和seq?id?no:1；以及seq?idno:10、seq?id?no:8、seq?id?no:7、seq?id?no:6、seq?id?no:5、seq?id?no:4、seq?id?no:3、seq?id?no:2和seq?id?no:1中任一者的片段，所述片段是至少10個核苷酸長并包含seqid?no:10的核苷酸1,000-1,001或12,722-12,723。

8、提供了檢測源自于甜菜種子、植物、植物部分、植物細胞、子代植物或商品產(chǎn)品的dna樣品中甜菜品系bv_csm63713的存在的另一種方法。所述方法包括：a)使樣品與本文所描述的充當探針的任何dna分子接觸；以及b)進行測序反應(yīng)以產(chǎn)生靶序列。所述靶序列包含選自由以下組成的組的核苷酸序列：seq?id?no:1；seq?id?no:2；seq?id?no:3；seq?id?no:4；seq?id?no:5；seq?id?no:6；seq?id?no:7；seq?id?no:8；seq?id?no:9；seq?id?no:10；其中任一者的完整互補序列；以及seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3、seq?id?no:4、seq?id?no:5、seq?id?no:6、seq?id?no:7、seq?id?no:8和seq?id?no:10中任一者的片段，所述片段是至少10個核苷酸長并包含seq?id?no:10的核苷酸1,000-1,001或12,722-12,723。

9、提供了檢測源自于甜菜種子、植物、植物部分、植物細胞、子代植物或商品產(chǎn)品的樣品中甜菜品系bv_csm63713的存在的另一種方法。所述方法包括：a)使樣品與至少一種抗體接觸，所述至少一種抗體對甜菜品系bv_csm63713編碼的至少一種蛋白質(zhì)具有特異性；以及b)檢測所述抗體與樣品中蛋白質(zhì)的結(jié)合。抗體與蛋白質(zhì)結(jié)合表明樣品中甜菜品系bv_csm63713的存在。

10、提供了用于檢測樣品中甜菜品系bv_csm63713的存在的dna檢測試劑盒。這種dna檢測試劑盒的一個實例是包含本文所描述的任何dna引物對的試劑盒。dna檢測試劑盒的另一個實例是包含本文所描述的充當探針的任何dna分子的試劑盒。

11、還提供了用于檢測樣品中甜菜品系bv_csm63713的存在的蛋白質(zhì)檢測試劑盒。這種試劑盒的一個實例是包含至少一種抗體的試劑盒，所述至少一種抗體對甜菜品系bv_csm63713編碼的至少一種蛋白質(zhì)具有特異性。檢測到所述至少一種抗體與樣品中由甜菜品系bv_csm63713編碼的至少一種蛋白質(zhì)結(jié)合將診斷樣品中存在甜菜品系bv_csm63713。

12、提供了一種甜菜種子、植物、植物部分或植物細胞。所述甜菜種子、植物、植物部分或植物細胞包含重組dna分子，所述重組dna分子包含選自由以下組成的組的序列：seq?idno:1；seq?id?no:2；seq?id?no:3；seq?id?no:4；seq?id?no:5；seq?id?no:6；seq?id?no:7；seq?id?no:8；seq?id?no:9，和seq?id?no:10；具有與seq?id?no:10的全長或seq?id?no:9的全長至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％或至少99.9％相同的序列的多核苷酸；以及前述任一者的完整互補序列。所述甜菜種子、植物、植物部分或植物細胞可以表達至少一種除草劑耐受性基因，所述基因選自由以下組成的組：膦絲菌素(phosphinothricin)n-乙酰轉(zhuǎn)移酶(pat)、麥草畏單加氧酶(dmo)、5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(epsps)及其任何組合。所述甜菜種子、植物、植物部分或植物細胞可以對至少一種除草劑具有耐受性，所述除草劑選自以下由以下組成的組：草銨膦、麥草畏、草甘膦及其任何組合。所述甜菜植物、植物種子、植物部分或植物細胞可包含甜菜品系bv_csm63713，包含所述品系的種子的代表性樣品已以atcc登錄號pta-127098保藏。所述甜菜植物、植物種子、植物部分或植物細胞還可定義為包含甜菜品系bv_csm63713的甜菜植物的任一代的子代植物，或由其得到的甜菜植物部分、植物種子或植物細胞。

13、還提供了甜菜植物、植物部分、植物種子和植物細胞。所述甜菜植物、植物部分、植物種子和植物細胞包含甜菜品系bv_csm63713，包含甜菜品系bv_csm63713的種子的代表性樣品已以atcc登錄號pta-127098保藏。

14、本文所描述的任何甜菜植物部分可包含根、甜菜、小孢子、花粉、花藥、胚珠、子房、花、胚、莖、葉、原生質(zhì)體或愈傷組織。

15、提供了用于控制或防止一個區(qū)域內(nèi)的雜草的方法。這種方法的一個實例包括在所述區(qū)域中種植包含品系bv_csm63713的甜菜，并施用有效量的至少一種除草劑，以控制所述區(qū)域中的雜草，同時不會對所述甜菜造成損傷或?qū)λ鎏鸩说膿p傷小于約10％，所述除草劑選自由以下組成的組：麥草畏、草甘膦、草銨膦及其任何組合。施用有效量的至少一種除草劑可包括在生長季內(nèi)施用至少兩種或更多種除草劑，所述除草劑選自由以下組成的組：麥草畏、草甘膦、草銨膦及其任何組合。在生長季中，麥草畏的有效量可以是約0.5磅酸當量/英畝(lb?ae/acre)至約2磅酸當量/英畝。在生長季中，草銨膦的有效量可以是約0.4磅活性成分/英畝(lb?ai/acre)至約2.16磅活性成分/英畝。在生長季中，草甘膦的有效量可以是約0.75磅酸當量/英畝至約2.25磅酸當量/英畝。

16、提供了用于控制一個區(qū)域內(nèi)包含甜菜品系bv_csm63713的自生甜菜的方法。這種方法的一個實例包括施用除草有效量的至少一種除麥草畏、草甘膦或草銨膦或之外的除草劑，其中所述除草劑的施用將防止包含甜菜品系bv_csm63713的甜菜的生長。所述除麥草畏、草甘膦或草銨膦之外的除草劑可以選自由以下組成的組：百草枯(paraquat)、烯草酮(clethodim)、二氯吡啶酸(clopyralid)、甜菜安(desmedipham)、氟胺磺隆(triflusulfuron)、2,4-二氯苯氧基乙酸(2,4-d)，以及乙酰乳酸合酶(als)抑制劑，例如磺酰脲類(sus)、咪唑啉酮類、三唑并嘧啶類、嘧啶氧苯甲酸酯類和磺酰胺基羰基三唑啉酮類。

17、提供了獲得對草甘膦、麥草畏、草銨膦或其任何組合具有耐受性的甜菜植物的種子或甜菜植物的方法。在這種方法的一個實例中，所述方法包括：a)獲得子代種子或由其生長的植物的群體，其中至少一者包含甜菜品系bv_csm63713；以及b)鑒別包含甜菜品系bv_csm63713的至少一第一子代種子或由其生長的植物。鑒別包含甜菜品系bv_csm63713的子代種子或由其生長的植物可以包括：a)使所述子代種子或植物生長以產(chǎn)生子代植物；b)用有效量的至少一種除草劑處理所述子代植物，所述除草劑選自由以下組成的組：草甘膦、麥草畏、草銨膦及其任何組合；以及c)選擇對所述至少一種除草劑具有耐受性的子代植物，所述至少一種除草劑選自由以下組成的組：草甘膦、麥草畏、草銨膦及其任何組合。替代地或另外，鑒別包含甜菜品系bv_csm63713的子代種子或由其生長的植物可包括檢測源自于子代種子或由其生長的植物的樣品中甜菜品系bv_csm63713的存在。替代地或另外，鑒別包含甜菜品系bv_csm63713的子代種子或由其生長的植物可以包括檢測源自于子代種子或由其生長的植物的樣品中由甜菜品系bv_csm63713編碼的至少一種蛋白質(zhì)的存在。

18、提供了確定包含甜菜品系bv_csm63713的甜菜植物、植物部分、植物種子或植物細胞的接合性的方法。這種方法的一個實例包括：a)使包含源自于甜菜植物、植物部分、植物種子或植物細胞的dna的樣品與引物集接觸，所述引物集能夠產(chǎn)生用于診斷甜菜品系bv_csm63713的存在的第一擴增子和用于診斷不含甜菜豆品系bv_csm63713的野生型甜菜基因組dna的第二擴增子；b)進行核酸擴增反應(yīng)；以及c)檢測第一擴增子和第二擴增子。兩個擴增子的存在表明，樣品對于甜菜品系bv_csm63713是雜合的，而僅存在第一擴增子表明，樣品對于甜菜品系bv_csm63713是純合的?？梢允褂玫囊锛氖纠詫嵗前韵滦蛄械囊锛簊eq?id?no:24、seq?id?no:25和seq?id?no:26；seq?id?no:30、seq?id?no:31和seq?id?no:26；seq?id?no:27、seq?id?no:28和seq?id?no:29；以及seq?id?no:32、seq?idno:33和seq?id?no:29。

19、提供了確定包含甜菜品系bv_csm63713的甜菜植物、植物部分、植物種子或植物細胞的接合性的另一種方法。所述方法包括：a)使包含源自于甜菜植物、植物部分、植物種子或植物細胞的dna的樣品與探針集接觸，所述探針集包含與甜菜品系bv_csm63713特異性雜交的至少一第一探針，以及與甜菜基因組dna特異性雜交且不與甜菜品系bv_csm63713雜交的至少一第二探針，所述甜菜基因組dna因插入甜菜品系bv_csm63713的異源dna而被破壞；以及b)使探針集與樣品在嚴格雜交條件下雜交。僅檢測到第一探針在雜交條件下雜交將診斷甜菜植物、植物部分、種子或植物細胞對于甜菜品系bv_csm63713是純合的。檢測到第一探針和第二探針在雜交條件下均雜交將診斷甜菜植物、植物部分、種子或植物細胞對于甜菜品系bv_csm63713是雜合的。

20、提供了dna構(gòu)建體。此類dna構(gòu)建體的一個實例是包含第一表達盒、第二表達盒和第三表達盒的dna構(gòu)建體。第一表達盒以可操作的連接包含：i)來自擬南芥(arabidopsisthaliana)的葉綠素a-b結(jié)合蛋白(cab1)啟動子和前導(dǎo)序列；ii)膦絲菌素n-乙酰轉(zhuǎn)移酶(pat)編碼序列；以及iii)來自蒺藜苜蓿(medicago?truncatula)的小熱休克蛋白(hsp20)3’utr。第二表達盒以可操作的連接包含：i)來自甜瓜(cucumis?melo)的泛素(ubq1)啟動子、前導(dǎo)序列和內(nèi)含子；ii)來自豌豆(pisum?sativum)的核酮糖二磷酸羧化酶小亞基(rbcs)葉綠體轉(zhuǎn)運肽編碼序列；iii)麥草畏單加氧酶編碼序列(dmo)；以及iv)來自蒺藜苜蓿的推定蛋白質(zhì)3’utr。第三表達盒以可操作的連接包含：i)來自大麗菊花葉病毒(dahliamosaic?virus)的包涵體基質(zhì)蛋白增強子；ii)來自甜瓜的s-腺苷-l-甲硫氨酸合成酶(sams2)啟動子、前導(dǎo)序列和內(nèi)含子；iii)來自擬南芥的5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶葉綠體轉(zhuǎn)運肽(epsps)編碼序列；iv)5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(epsps)編碼序列；以及v)來自蒺藜苜蓿的假定蛋白質(zhì)3’utr。例如，dna構(gòu)建體可以包含seq?id?no:9。

21、提供了包含本文所描述的任何dna構(gòu)建體的甜菜植物、植物種子、植物部分或植物細胞。

22、提供了一種提高甜菜植物對至少一種除草劑的耐受性的方法，所述除草劑選自由以下組成的組：草甘膦、麥草畏、草銨膦及其任何組合。所述方法包括：a)將本文所描述的任何dna構(gòu)建體插入甜菜細胞的基因組中；b)由所述甜菜細胞產(chǎn)生甜菜植物；以及c)選擇包含dna構(gòu)建體的甜菜植物。所述選擇可以包括用有效量的至少一種除草劑處理甜菜細胞或植物，所述除草劑選自由以下組成的組：草甘膦、麥草畏、草銨膦及其任何組合。

23、還提供了在單個基因組位置處對具有三種不同除草劑作用模式的除草劑具有耐受性的甜菜植物、植物種子、植物部分或植物細胞。甜菜植物、植物種子、植物部分或植物細胞可包含本文所描述的任何dna構(gòu)建體。

24、提供了對至少一種除草劑具有耐受性的甜菜種子、植物、植物部分或植物細胞，所述除草劑選自以下組成的組：草銨膦、麥草畏、草甘膦及其任何組合。甜菜種子、植物、植物部分或植物細胞包含本文所提供的任何dna構(gòu)建體。

25、任何甜菜種子、植物、植物部分或細胞均可通過本文所提供的提高甜菜植物對至少一種除草劑的耐受性的任何方法獲得，所述除草劑選自由以下組成的組：草銨膦、麥草畏、草甘膦及其任何組合。

26、提供了一種產(chǎn)生包含甜菜品系bv_csm63713的子代甜菜植物的方法。所述方法包括：a)使包含甜菜品系bv_csm63713的第一甜菜植物與其自身或第二甜菜植物進行有性雜交；b)收集雜交產(chǎn)生的一個或多個種子；c)使一個或多個種子生長以產(chǎn)生一株或多株子代植物；以及d)選擇包含甜菜品系bv_csm63713的至少一第一子代植物或種子。還提供了由所述方法產(chǎn)生的包含甜菜品系bv_csm63713的自交型和雜交型甜菜植物和種子。

27、還提供了無生命的甜菜植物材料和不可再生的甜菜植物材料。所述材料可以包含本文所描述的任何重組dna分子或任何dna構(gòu)建體。

28、還提供了包含甜菜品系bv_csm63713的無生命甜菜植物材料或不可再生的甜菜植物材料，包含甜菜品系bv_csm63713的種子的代表性樣品已以atcc登錄號pta-127098保藏。

29、還提供了商品產(chǎn)品。此類商品產(chǎn)品的一個實例是包含本文所描述的任何重組dna分子或任何dna構(gòu)建體的商品產(chǎn)品。所述商品產(chǎn)品可以由包含甜菜品系bv_csm63713的轉(zhuǎn)基因甜菜植物、植物部分、植物種子或植物細胞產(chǎn)生。所述商品產(chǎn)品可以包括例如完整或加工過的種子、無活力的種子、加工過的植物部分、加工過的植物組織、脫水植物組織、脫水植物部分、冷凍植物組織、冷凍植物部分、加工用于動物飼料的植物部分、纖維、紙漿、紙漿顆粒、紙漿碎片、尾料、果汁、糖漿、糖蜜、提取物、萃余液、甜菜堿、分離糖蜜可溶物(separatormolasses?soluble，sms)或任何其他供人類消費的食品、有活力的種子、有活力的植物部分(如根和葉)或有活力的植物細胞。

30、提供了一種生產(chǎn)商品產(chǎn)品的方法。所述方法包括：a)獲得包含甜菜品系bv_csm63713的轉(zhuǎn)基因甜菜植物、植物部分或植物種子；以及b)由所述轉(zhuǎn)基因甜菜植物、植物部分或植物種子生產(chǎn)商品產(chǎn)品。

31、提供了一種控制、防止或減少除草劑耐受性雜草的發(fā)育的方法。所述方法包括在作物生長環(huán)境中栽培包含轉(zhuǎn)基因的甜菜植物，所述轉(zhuǎn)基因在單個基因組位置處提供對具有三種不同除草劑作用模式的除草劑的耐受性。所述三種不同除草劑作用模式可選自由以下組成的組：抑制谷氨酰胺合成酶、苯甲酸生長素和抑制epsps。

32、還提供了一種用于控制、防止或減少除草劑耐受性雜草的發(fā)育的方法。所述方法包括：a)在作物生長環(huán)境中栽培甜菜植物，所述甜菜植物包含本文所描述的任何dna構(gòu)建體，用于在單個基因組位置處提供對具有三種不同除草劑作用模式的除草劑的耐受性；以及b)向作物生長環(huán)境施用至少一種除草劑，所述除草劑選自由以下組成的組：麥草畏、草銨膦及其任何組合，其中甜菜植物對所述至少一種除草劑具有耐受性。

33、提供了一種減少供甜菜育種的基因座的方法，所述方法是通過在單個基因組位置處插入轉(zhuǎn)基因以提供對三種不同類別的除草劑的耐受性實現(xiàn)。轉(zhuǎn)基因可以作為單分子連接的轉(zhuǎn)基因插入物插入。單分子連接的轉(zhuǎn)基因插入物可以針對每種除草劑作用模式的至少一種除草劑提供商業(yè)水平的耐受性。

34、還提供了甜菜植物、植物細胞、植物部分和植物種子。還提供了包含整合于4號染色體中的重組dna構(gòu)建體的甜菜植物、植物細胞、植物部分和植物種子。所述重組dna構(gòu)建體賦予對至少一種除草劑的耐受性，所述除草劑選自由以下組成的組：草銨膦、麥草畏、草甘膦及其任何組合。重組dna構(gòu)建體整合于所述染色體中側(cè)接seq?id?no:11和seq?id?no:12的位置中。