背景技術(shù)：

1、鐮刀菌屬赤霉病(fhb)是一種小麥、大麥和其它小谷物的瘡痂病，由鐮刀菌的復(fù)合物引起。禾谷鐮刀菌(fusarium?graminearum)是此復(fù)合物中分布最廣以及經(jīng)濟(jì)影響最大的種之一，因?yàn)槠淠軌虍a(chǎn)生高水平的霉菌毒素。感染了鐮刀菌屬可能導(dǎo)致顯著的產(chǎn)率損失和谷物品質(zhì)下降，以及在動物和人類攝入后還會產(chǎn)生霉菌毒素(ireta和gilchrist,1994；baht等人,1989；luo,1988；snidjers,1989；marasas等人,1988)。特別重要的不僅是真菌感染對小麥和/或大麥葉球造成的壞死性損害，更具體地是相關(guān)的霉菌毒素(例如，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol)或“don”)污染，這通常會導(dǎo)致谷物質(zhì)量下降，從而影響定價和到終端市場的分銷(foroud等人,2019)。據(jù)估計(jì)，1993年美國因fhb造成的損失超過10億美元，并且1994年的損失為5億美元。據(jù)估計(jì)，最近，1993-2001年間美國因流行病fhb出現(xiàn)造成的損失為76.7億美元(mielniczuk和-bednarz,2020)。據(jù)估計(jì)，在中國，在流行病年份，fhb可能會影響至多700萬公頃的土地，并且可能損失250萬噸谷物。據(jù)報(bào)道，中國、印度和日本都有人類因攝入霉菌毒素而患病，而據(jù)報(bào)道，世界許多地方都有動物因攝入霉菌毒素而患病(dubin等人,1997)。

2、在開花期通過花藥發(fā)生感染，隨后通過在小花的其它部位定殖，然后進(jìn)入葉軸的脈管和髓，并從那里向葉球上下擴(kuò)散(trail等人綜述,2005)。fhb復(fù)合物中的許多鐮刀菌會產(chǎn)生單端孢霉烯毒素。例如，禾谷鐮刀菌和黃色鐮刀菌(f.culmorum)可能產(chǎn)生脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(don)和雪腐鐮刀菌烯醇(niv)，并且擬枝孢鐮刀菌(f.sporotrichioides)可能產(chǎn)生t-2毒素。已經(jīng)描述了許多鐮刀菌都能生物合成其它霉菌毒素，如伏馬菌素和玉米烯酮(zea)(desjardins,2006)，所述鐮刀菌包括產(chǎn)生zea的禾谷鐮刀菌和黃色鐮刀菌兩者(mielniczuk和-bednarz,2020)。單端孢霉烯生物合成途徑的第一關(guān)鍵步驟是由tri5編碼的單端孢霉烯合酶催化的焦磷酸法呢酯向單端孢霉烯的轉(zhuǎn)化(hohn和beremand,1989)。tri5和基因簇中的其它基因的表達(dá)與單端孢霉烯在植物體內(nèi)和體外培養(yǎng)物兩者中的產(chǎn)生相關(guān)(brown等人,2004；kimura等人,2003)。

3、除了單端孢霉烯在疾病過程中的作用之外，其在谷物中的存在對人類和動物健康也有重要影響。在歐洲和美國，谷物中的這些毒素的濃度正受到越來越嚴(yán)格的審查，目前已準(zhǔn)備對谷物和食品中的單端孢霉烯(如don)的污染實(shí)行法律限制(anonymous,2005；vanegmond等人,2007)。在哺乳動物系統(tǒng)中，don已被證明是一種強(qiáng)大的轉(zhuǎn)化抑制劑，并且導(dǎo)致農(nóng)場動物(如豬)出現(xiàn)急性癥狀(如嘔吐和拒食)，以及生長遲緩、卵巢功能減退和免疫抑制等慢性癥狀(bennett和klich,2003；rocha等人,2005)。

4、為了解決這些問題，本發(fā)明尤其涉及局部施加雙鏈rna(“dsrna”)，所述dsrna靶向與don產(chǎn)生途徑相關(guān)的真菌基因以進(jìn)行rna干擾，并且由此減少或消除在用于人類或動物食用的植物或植物部分中引起鐮刀菌屬赤霉病的禾谷鐮刀菌或其它真菌病原體的don產(chǎn)生。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、rna干擾(rnai)技術(shù)已被證明是一種通過內(nèi)部生物過程使害蟲和病原體的基因表達(dá)沉默的高度選擇性生物處理。啟動rnai的雙鏈rna(dsrna)的外源性施加已用于有效控制某些植物害蟲和病原體種。本公開涉及一種使用dsrna來減少或消除鐮刀菌屬的真菌病原體禾谷鐮刀菌或其它真菌病原體的don產(chǎn)生和/或控制所述鐮刀菌屬的禾谷鐮刀菌或其它真菌病原體的方法。在特定實(shí)施例中，描述了通過使用施用于植物的外源性dsrna施加，通過引起死亡、生長抑制、毒力或致病性的降低或繁殖/生殖能力(孢子形成)的降低來控制don產(chǎn)生和/或控制真菌病原體的方法和組合物，所述植物感染或可感染產(chǎn)生don或以其它方式與引起赤霉病的鐮刀菌復(fù)合物相關(guān)的鐮刀菌屬的禾谷鐮刀菌或另一成員。此類植物可以包括例如玉米和小谷物，如小麥、大麥、亞麻、蕎麥、黑麥和燕麥。

2、本文所描述的組合物和方法包括重組多核苷酸分子，如單鏈或雙鏈dna或rna分子，本文稱為“觸發(fā)物”，可用于減少或消除禾谷鐮刀菌或相關(guān)種的don產(chǎn)生；或重組dna構(gòu)建體，其用于制備此類rna分子或用于制備表達(dá)此類rna分子的轉(zhuǎn)基因植物。在一些實(shí)施例中，多核苷酸觸發(fā)物作為局部施加的藥劑提供，以用于控制或防止禾谷鐮刀菌在植物上的don產(chǎn)生和/或引起禾谷鐮刀菌的死亡、生長抑制、毒力或致病性的降低或繁殖/生殖能力(孢子形成)的降低。在一些實(shí)施例中，植物是玉米或小谷物(例如，小麥、大麥、燕麥、亞麻、黑麥或蕎麥)，其對禾谷鐮刀菌感染具有增加的抗性和/或?qū)坦如牭毒a(chǎn)生的don的效應(yīng)具有增加的抗性，如提供了表達(dá)多核苷酸觸發(fā)物的轉(zhuǎn)基因植物(包括種子和可繁殖部分)。在一些實(shí)施例中，提供了已經(jīng)用包含多核苷酸觸發(fā)物的組合物局部處理的植物(包括種子或可繁殖部分)(例如，已經(jīng)用dsrna分子的溶液噴霧的植物)。還提供了局部施加到禾谷鐮刀菌或感染或可能感染了禾谷鐮刀菌的植物、植物部分或種子的含多核苷酸的組合物。

3、若干實(shí)施例涉及通過多核苷酸觸發(fā)物抑制禾谷鐮刀菌中的靶基因。此類靶基因可以包括與don產(chǎn)生途徑相關(guān)的鐮刀菌的任何基因。本文提供了此類靶基因的本文稱為“靶基因序列組”或“靶基因序列”的核苷酸序列，所述核苷酸序列涉及seq?id?no:1-16、65-70和87-151。本發(fā)明的某些實(shí)施例涉及被設(shè)計(jì)成與靶基因的rna轉(zhuǎn)錄物雜交以產(chǎn)生rnai的多核苷酸(例如，dsrna)。還提供了本文稱為“觸發(fā)物序列組”或“觸發(fā)物序列”的核苷酸序列，所述核苷酸序列涉及seq?id?no:17-32、75-78。本文進(jìn)一步提供了“rna觸發(fā)物序列組”或“rna觸發(fā)物序列”，其涉及seq?id?no:33-48、79-82和153-225。本文還提供了針對rna觸發(fā)物序列組的反向補(bǔ)體，稱為“rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體組”或“rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體”，所述反向補(bǔ)體涉及seq?id?no:49-64、83-86和227-299。rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體組是rna觸發(fā)物序列組中5'至3'讀段的序列的完美補(bǔ)體。根據(jù)靶基因序列的對應(yīng)mrna轉(zhuǎn)錄物設(shè)計(jì)rna觸發(fā)物序列組，以影響此類轉(zhuǎn)錄物上的rnai，從而防止或減少相關(guān)蛋白質(zhì)的翻譯。通過減少相關(guān)蛋白質(zhì)的翻譯，本發(fā)明的觸發(fā)物序列破壞了鐮刀菌屬中的don途徑，從而減少鐮刀菌屬的don產(chǎn)生。本文所提供的表1和2將各種靶基因序列與其對應(yīng)觸發(fā)物序列、rna觸發(fā)物序列和rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體序列匹配。seq?id?no與seq?id列表中提供的序列有關(guān)。值得注意的是，隨本文提交的seq?id列表表明seq?id?no:33-64、79-86、153-225和227-299是dna，這是由于新st26格式的限制。出于本公開的目的，seq?id?no:33-64、79-86、153-225和227-299是rna序列，其中指示的胸腺嘧啶是尿嘧啶。seq?id?no:75-78是seq?id?no:79-82的dna版本。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解，通過用胸腺嘧啶替代任何尿嘧啶，本文的rna序列中的任一者都可以被讀取為dna序列，針對此類rna序列的dna模板將包含給定rna序列的dna堿基補(bǔ)體，與引用的靶基因dna序列具有同一性的rna序列將用尿嘧啶替代胸腺嘧啶，并且與引用的靶基因dna序列具有互補(bǔ)性的rna將包含給定dna序列的rna堿基補(bǔ)體。

4、一方面，一種用于減少或消除植物上的鐮刀菌屬的種(例如，禾谷鐮刀菌)的don產(chǎn)生的方法，所述方法包括使鐮刀菌與多核苷酸接觸，所述多核苷酸包含18個或更多個連續(xù)核苷酸的至少一個區(qū)段，所述連續(xù)核苷酸具有與dna、或其dna補(bǔ)體、或表1或表2中鑒定的任何基因或其同源物的對應(yīng)片段具有約95％至約100％同一性(例如，將包括具有100％同一性的序列的21個連續(xù)核苷酸的區(qū)段)的序列，所述dna具有選自由靶基因序列組組成的組的序列。在一實(shí)施例中，用于減少或消除植物上的禾谷鐮刀菌的don產(chǎn)生的方法包括使禾谷鐮刀菌與多核苷酸接觸，所述多核苷酸包含與靶基因或由靶基因轉(zhuǎn)錄的rna的至少18個連續(xù)核苷酸互補(bǔ)的核苷酸序列，所述靶基因具有選自由靶基因序列組組成的組的核苷酸序列。在一些實(shí)施例中，多核苷酸包含與選自由rna觸發(fā)物序列組或rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體組組成的組的序列的至少18個連續(xù)核苷酸互補(bǔ)或約95％至約100％相同的序列。在一些實(shí)施例中，18個或更多個連續(xù)核苷酸是21個或更多個連續(xù)核苷酸、50個或更多個連續(xù)核苷酸、150個或更多個連續(xù)核苷酸、200個或更多個連續(xù)核苷酸、250個或更多個連續(xù)核苷酸、300個或更多個連續(xù)核苷酸、350個或更多個連續(xù)核苷酸、400個或更多個連續(xù)核苷酸、450個或更多個連續(xù)核苷酸、500個或更多個連續(xù)核苷酸、550個或更多個連續(xù)核苷酸或600個或更多個連續(xù)核苷酸。在一些實(shí)施例中，多核苷酸被設(shè)計(jì)成與由靶基因編碼的mrna具有互補(bǔ)性。在一些實(shí)施例中，多核苷酸是雙鏈rna(dsrna)。在一些實(shí)施例中，多核苷酸包含一個或多個選自rna觸發(fā)物序列組或rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體組的核苷酸序列。在一些實(shí)施例中，與多核苷酸的接觸是通過將多核苷酸或含有多核苷酸的組合物或溶液(例如，通過噴霧或撒粉或浸泡)直接局部施加到禾谷鐮刀菌或與禾谷鐮刀菌接觸的表面或基質(zhì)(例如，植物或土壤)來實(shí)現(xiàn)的。在一些實(shí)施例中，多核苷酸或含有多核苷酸的組合物或溶液的局部施加是通過將多核苷酸或含有多核苷酸的組合物或溶液噴霧到感染或可能感染了禾谷鐮刀菌的葉、葉球、莖、穗、種子、根或其它植物部分上來實(shí)現(xiàn)的。在一些實(shí)施例中，與多核苷酸的接觸是通過提供表達(dá)減少或消除禾谷鐮刀菌的don產(chǎn)生的序列的轉(zhuǎn)基因植物來實(shí)現(xiàn)的。在一些實(shí)施例中，多核苷酸包含兩個或更多個靶向與don產(chǎn)生相關(guān)的兩個或更多個靶基因的區(qū)，包括靶向禾谷鐮刀菌中的一個或多個don基因和/或靶向產(chǎn)生don的鐮刀菌屬的另一種中的此類don基因的一種或多種同源物，由此減少禾谷鐮刀菌的don產(chǎn)生，以及減少鐮刀菌屬的一個或多個另外的種的don產(chǎn)生。在一些情況下，禾谷鐮刀菌的基因靶標(biāo)區(qū)與存在于鐮刀菌屬的一個或多個另外的種(如黃色鐮刀菌)中的同源物區(qū)之間的同一性百分比將足夠高以使得多核苷酸中的相同區(qū)將在所述一個或多個種中引起rnai，由此減少所述一個或多個種的don產(chǎn)生。

5、若干實(shí)施例涉及一種用于通過使禾谷鐮刀菌暴露于包含一種或多種調(diào)配物或遞送藥劑和多核苷酸的組合物來減少或消除禾谷鐮刀菌的don產(chǎn)生的方法，所述多核苷酸產(chǎn)生針對表1或表2中所公開的基因靶標(biāo)中的一者或多者或具有選自由靶基因序列組組成的組的序列的基因靶標(biāo)或其dna補(bǔ)體的rnai，并且其中藥劑在接觸或攝入(例如，內(nèi)部吸收/轉(zhuǎn)染)禾谷鐮刀菌時起作用，以抑制禾谷鐮刀菌內(nèi)的生物功能，由此減少或消除禾谷鐮刀菌的don產(chǎn)生和/或以其它方式控制禾谷鐮刀菌。在一些實(shí)施例中，多核苷酸包含一個或多個選自rna觸發(fā)物序列組或rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體的核苷酸序列，或者多核苷酸包含一個或多個與一個或多個選自rna觸發(fā)物序列組或rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體組的核苷酸序列約95％至約100％相同的核苷酸序列。在一些實(shí)施例中，多核苷酸是rna，并且在一些實(shí)施例中，rna是雙鏈rna。

6、在一些實(shí)施例中，所述藥劑包含以下：

7、(a)有效量的多核苷酸，所述多核苷酸包含至少18個、19個、20個、21個、25個、50個、100個、150個、200個、250個、300個、350個、400個、450個、500個、550個、或600個連續(xù)核苷酸，所述連續(xù)核苷酸與靶基因或由所述靶基因轉(zhuǎn)錄的rna的區(qū)段互補(bǔ)，或與其包含至少約85％、至少約90％、至少約95％、至少約98％、約100％或100％序列同一性，所述靶基因具有選自由靶基因序列組成的組的核苷酸序列；

8、(b)有效量的至少一個多核苷酸，所述至少一個多核苷酸包含至少一個沉默元件，所述至少一個沉默元件與靶基因或由所述靶基因轉(zhuǎn)錄的rna的至少18個、19個、20個、21個、25個、50個、100個、150個、200個、250個、300個、350個、400個、450個、500個、550個、或600個連續(xù)核苷酸互補(bǔ)，或與其包含至少約85％、至少約90％、至少約或95％序列同一性，其中所述靶基因具有選自由所述靶基因序列組成的組的核苷酸序列；

9、(c)有效量的至少一個rna，所述至少一個rna包含至少一個區(qū)段，所述至少一個區(qū)段與靶基因或由所述靶基因轉(zhuǎn)錄的rna的區(qū)段的至少18個、19個、20個、21個、25個、50個、100個、150個、200個、250個、300個、350個、400個、450個、500個、550個、或600個連續(xù)核苷酸互補(bǔ)，或與其包含至少約85％、至少約90％、至少約95％、至少約98％、約100％或100％序列同一性，所述靶基因具有選自由所述靶基因序列組成的組的核苷酸序列；或者

10、(d)rna分子，所述rna分子在轉(zhuǎn)染到禾谷鐮刀菌或與所述禾谷鐮刀菌接觸時減少或消除所述禾谷鐮刀菌中的don產(chǎn)生，其中所述rna分子包含至少18個、19個、20個、21個、25個、50個、100個、150個、200個、250個、300個、350個、400個、450個、500個、550個、或600個連續(xù)核苷酸，所述連續(xù)核苷酸與靶基因或由所述靶基因轉(zhuǎn)錄的rna的區(qū)段互補(bǔ)，或與其包含至少約85％、至少約90％、至少約95％、至少約98％、或約100％或100％序列同一性，所述靶基因具有選自由所述靶基因序列組成的組的核苷酸序列；或者(e)雙鏈rna分子，所述雙鏈rna分子在轉(zhuǎn)染到或接觸到禾谷鐮刀菌時減少或消除所述禾谷鐮刀菌中的don產(chǎn)生，其中所述雙鏈rna分子的至少一條鏈包含至少18個、19個、20個、21個、25個、50個、100個、150個、200個、250個、300個、350個、400個、450個、500個、550個、或600個連續(xù)核苷酸，所述連續(xù)核苷酸與靶基因或由所述靶基因轉(zhuǎn)錄的rna的區(qū)段基本上互補(bǔ)，或與其包含至少85％、90％、95％、98％或100％序列同一性，其中所述靶基因具有選自由所述靶基因序列組成的組的核苷酸序列；或者

11、(f)有效量的至少一個雙鏈rna，所述至少一個雙鏈rna包含至少一條鏈，所述至少一條鏈包含選自由以下組成的組的序列，或與其具有至少約85％、至少約90％、至少約95％、至少約98％、約100％或100％序列同一性的序列：rna觸發(fā)物序列和rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體；或者

12、(g)有效量的多核苷酸，所述多核苷酸包含選自由以下組成的組的核苷酸序列，或與其具有至少約85％、至少約90％、至少約95％、至少約98％、或約100％序列同一性的序列的至少18個、19個、20個、21個、25個、50個、100個、150個、200個、250個、300個、350個、400個、450個、500個、550個或600個連續(xù)核苷酸：rna觸發(fā)物序列和rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體；或者

13、(h)有效量的至少一個rna，所述至少一個rna包含至少一個區(qū)段，所述至少一個區(qū)段與選自由以下組成的組的核苷酸序列的至少18個、19個、20個、21個、25個、50個、100個、150個、200個、250個、300個、350個、400個、450個、500個、550個或600個連續(xù)核苷酸互補(bǔ)，或與其包含至少約85％、至少約90％、至少約95％、至少約98％、約100％或100％序列同一性：rna觸發(fā)物序列和rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體；或者

14、(i)rna分子，所述rna分子在轉(zhuǎn)染到所述禾谷鐮刀菌或與所述禾谷鐮刀菌接觸時減少或消除所述禾谷鐮刀菌的don產(chǎn)生，其中所述rna分子包含至少18個、19個、20個、21個、25個、50個、100個、150個、200個、250個、300個、350個、400個、450個、500個、550個、或600個連續(xù)核苷酸，所述連續(xù)核苷酸與選自由以下組成的組的核苷酸序列的區(qū)段基本上互補(bǔ)，或與其包含至少至少約85％、至少約90％、至少約95％、至少約98％、約100％或100％序列同一性：所述靶基因序列、rna觸發(fā)物序列和rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體；或者

15、(j)雙鏈rna分子，所述雙鏈rna分子在轉(zhuǎn)染到或接觸到禾谷鐮刀菌時減少或消除所述禾谷鐮刀菌的don產(chǎn)生，其中所述雙鏈rna分子的至少一條鏈包含至少18個、19個、20個、21個、25個、50個、100個、150個、200個、250個、300個、350個、400個、450個、500個、550個、或600個連續(xù)核苷酸，所述連續(xù)核苷酸與選自由以下組成的組的核苷酸序列的區(qū)段互補(bǔ)，或與其包含至少約85％、至少約90％、至少約95％、至少約98％、約100％或100％序列同一性：rna觸發(fā)物序列和rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體；

16、(k)雙鏈rna分子，所述雙鏈rna分子在轉(zhuǎn)染到或接觸到禾谷鐮刀菌時減少或消除所述禾谷鐮刀菌的don產(chǎn)生，其中所述雙鏈rna分子的至少一條鏈與選自由以下組成的組的核苷酸序列包含至少約85％、至少約90％、至少約95％、至少約98％、約100％或100％序列同一性：rna觸發(fā)物序列和rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體。

17、在某些實(shí)施例中，含有多核苷酸的組合物被調(diào)配用于施加到植物田地，例如呈可噴霧溶液或乳液、罐混合物或粉末的形式。在一些實(shí)施例中，藥劑是以生物方式產(chǎn)生的，例如呈微生物發(fā)酵產(chǎn)物的形式或在轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞中表達(dá)。本領(lǐng)域已知用于調(diào)配施加到植物田地的多核苷酸的各種方法和組合物，并且本發(fā)明的多核苷酸可以被調(diào)配在任何合適的組合物中。實(shí)例是在于2022年11月10日公開為wo2022/0235895的pct/us/2022/027816中描述的組合物，所述文獻(xiàn)通過引用整體并入本文。

18、任何合適的編碼靶向本文所描述的靶基因的rnai分子的dna均可以用于本文所描述的組合物和方法中。dna可以是單鏈dna(ssdna)或雙鏈dna(dsdna)。在一些實(shí)施例中，dna包含一個或多個dna表達(dá)盒，其在轉(zhuǎn)錄時產(chǎn)生單鏈rna(ssrna)分子(例如，保持單鏈或折疊成rna發(fā)夾)或互補(bǔ)的ssrna分子，其粘接以產(chǎn)生雙鏈rna(dsrna)分子。

19、本領(lǐng)域已知用于制備rna的各種方法，并且本發(fā)明的rna可以通過本領(lǐng)域已知的任何合適的方法制備。產(chǎn)生rna的方法的實(shí)例包括但不限于體外轉(zhuǎn)錄(ivt)、化學(xué)合成、微生物發(fā)酵或無細(xì)胞方法，如于2019年5月16日公開的美國專利第10,858,385號(公開第us2019/0144489號)和于2017年10月12日公開的us專利第10,954,541號(公開第us2017/0292138號)中所描述的方法，所述文獻(xiàn)中的每個文獻(xiàn)通過引用并入本文。用于本發(fā)明的內(nèi)源性遞送的rnai分子的實(shí)例包括但不限于以下中描述的那些：于2020年5月14日公開的美國專利第11,142,768號(公開第us2020/0149044號)、于2020年3月26日公開的美國專利第11,185,079號(公開第us2020/0093138號)、于2021年11月18日公開的pct/us/2021/032334(國際公開第wo?2021/231791號)，所有所述專利均通過引用并入本文。

20、若干實(shí)施例涉及一種提供對禾谷鐮刀菌的don產(chǎn)生具有增加的抗性的植物的方法，所述方法包含將包含至少一個多核苷酸的組合物局部施加到植物，所述至少一個多核苷酸通過針對don產(chǎn)生途徑ty)中的基因的rnai防止或減少don產(chǎn)生，所述至少一個多核苷酸包括表1或表2中鑒定的基因、或其dna補(bǔ)體，或具有選自由靶基因序列組組成的組的序列。在一實(shí)施例中，提供對禾谷鐮刀菌感染具有增加的抗性的植物的方法包含將包含至少一個多核苷酸的組合物局部施加到植物，所述至少一個多核苷酸包含與靶基因或由靶基因轉(zhuǎn)錄的rna的至少18個連續(xù)核苷酸互補(bǔ)的核苷酸序列，所述靶基因具有選自由靶基因序列組成的組的核苷酸序列。在一些實(shí)施例中，所述至少一個多核苷酸包含選自由rna觸發(fā)物序列或rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體組成的組的序列，或者包含與rna觸發(fā)物序列或rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體至少約75％、或至少約80％、或至少約85％、或至少約90％、或至少約95％、或至少約98％、或約100％或100％相同的核苷酸序列。在一些實(shí)施例中，多核苷酸是dsrna，其包含一個或多個選自rna觸發(fā)物序列的序列和選自rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體的對應(yīng)序列。在一實(shí)施例中，提供對禾谷鐮刀菌的don產(chǎn)生具有增加的抗性的植物的方法包含以使有效量的多核苷酸轉(zhuǎn)染到感染植物的禾谷鐮刀菌中或與所述禾谷鐮刀菌接觸的方式將包含至少一個多核苷酸的組合物局部施加到植物，所述多核苷酸包含至少18個連續(xù)核苷酸，所述連續(xù)核苷酸與靶基因或由靶基因轉(zhuǎn)錄的rna的一部分互補(bǔ)，所述靶基因具有選自由靶基因序列組組成的組的核苷酸序列。在一些實(shí)施例中，多核苷酸包括一個或多個選自rna觸發(fā)物序列組或rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體組的核苷酸序列，或包含與rna觸發(fā)物序列或rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體至少約75％、或至少約80％、或至少約85％、或至少約90％、或至少約95％或至少約98％相同的核苷酸序列。在一些實(shí)施例中，多核苷酸是dsrna，其包含一個或多個選自rna觸發(fā)物序列的序列和選自rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體的對應(yīng)序列。在一些實(shí)施例中，多核苷酸是dsrna。若干實(shí)施例涉及包含多核苷酸的組合物，所述包含多核苷酸的組合物被調(diào)配用于施加到植物田地，例如呈可噴霧溶液或乳液、罐混合物或粉末的形式。

21、若干實(shí)施例涉及一種用于減少或消除禾谷鐮刀菌的don產(chǎn)生的組合物，所述組合物包含有效量的至少一個多核苷酸分子，所述至少一個多核苷酸分子包含18個或更多個連續(xù)核苷酸的至少一個區(qū)段，所述連續(xù)核苷酸與dna或其dna補(bǔ)體的對應(yīng)片段基本上相同或互補(bǔ)(例如，具有與其具有100％同一性或互補(bǔ)性的序列的21個連續(xù)核苷酸的區(qū)段)，所述dna具有選自由靶基因序列組組成的組的序列。在一些實(shí)施例中，多核苷酸分子包含至少18個連續(xù)核苷酸，所述連續(xù)核苷酸與靶基因或由靶基因轉(zhuǎn)錄的rna的一部分互補(bǔ)，所述靶基因具有選自由靶基因序列組組成的組的核苷酸序列。在一些實(shí)施例中，多核苷酸包含一個或多個選自rna觸發(fā)物序列組或rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體觸發(fā)物的核苷酸序列，或包含與選自rna觸發(fā)物序列或rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體的核苷酸序列互補(bǔ)或至少約75％、或至少約80％、或至少約85％、或至少約90％、或至少約95％、或至少約98％、或約100％或100％相同的核苷酸序列。在一些實(shí)施例中，多核苷酸是dsrna，其包含一個或多個選自rna觸發(fā)物序列的序列和選自rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體的對應(yīng)序列。在一些實(shí)施例中，多核苷酸分子是重組多核苷酸。在一些實(shí)施例中，多核苷酸分子是rna。在一些實(shí)施例中，多核苷酸分子是dsrna。相關(guān)實(shí)施例包括包含多核苷酸分子的組合物，所述包含多核苷酸分子的組合物被調(diào)配用于施加到植物田地，例如呈可噴霧溶液或乳液、罐混合物或粉末的形式，并且任選地包含一種或多種另外的組分，如載劑、表面活性劑、有機(jī)硅酮、有機(jī)硅酮表面活性劑、多核苷酸除草分子、非多核苷酸除草分子、多核苷酸殺害蟲劑、非多核苷酸殺害蟲劑、多核苷酸殺真菌劑、非多核苷酸殺真菌劑、多核苷酸殺蟲劑、非多核苷酸殺蟲劑、安全劑和病原體生長調(diào)節(jié)劑。

22、若干實(shí)施例涉及一種提供對禾谷鐮刀菌的don產(chǎn)生具有增加的抗性的植物的方法，所述方法包含在植物中表達(dá)至少一個多核苷酸，所述至少一個多核苷酸包含18個或更多個連續(xù)核苷酸的至少一個區(qū)段，所述連續(xù)核苷酸與dna或其dna補(bǔ)體的對應(yīng)片段基本上相同或互補(bǔ)(例如，具有與其具有100％同一性或互補(bǔ)性的序列的21個連續(xù)核苷酸的區(qū)段)，所述dna具有選自由靶基因序列組組成的組的序列。在一些實(shí)施例中，多核苷酸包括一個或多個選自觸發(fā)物序列組、rna觸發(fā)物序列組或rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體組的核苷酸序列，或包含與選自rna觸發(fā)物序列或rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體的序列至少約75％、或至少約80％、或至少約85％、或至少約90％、或至少約95％或至少約98％相同的核苷酸序列。在一些實(shí)施例中，多核苷酸是dsrna，其包含一個或多個選自rna觸發(fā)物序列的序列和選自rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體的對應(yīng)序列。

23、若干實(shí)施例涉及一種重組dna構(gòu)建體，所述重組dna構(gòu)建體包含可操作地連接到dna元件的異源啟動子，所述dna元件包含用于產(chǎn)生本文所描述的rna的序列，所述rna可用于防止或減少鐮刀菌屬的種的don產(chǎn)生。在一些實(shí)施例中，dna元件編碼雙鏈rna。在一些實(shí)施例中，雙鏈rna包含一個或多個選自rna觸發(fā)物序列組或rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體的核苷酸序列。相關(guān)實(shí)施例包括一種植物染色體或質(zhì)體或重組植物病毒載體或重組桿狀病毒載體，其包含重組dna構(gòu)建體，或包含不含異源啟動子的dna元件。

24、若干實(shí)施例涉及一種轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，所述轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞在其基因組中具有編碼rna的重組dna，所述rna抑制與rna接觸或用所述rna轉(zhuǎn)染的禾谷鐮刀菌中的靶基因的表達(dá)，從而消除或減少禾谷鐮刀菌的don產(chǎn)生。在一些實(shí)施例中，靶基因是表1或表2中鑒定的靶基因。具體實(shí)施例是一種轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，所述轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞在其基因組中具有編碼rna的重組dna，所述rna用于使一個或多個選自靶基因序列組的靶基因沉默。在一些實(shí)施例中，rna包含一個或多個選自rna觸發(fā)物序列組或rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體組的核苷酸序列，或包含與選自rna觸發(fā)物序列或rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體的序列至少約75％、或至少約80％、或至少約85％、或至少約90％、或至少約95％、或至少約98％、或約100％或100％相同的核苷酸序列。

25、若干實(shí)施例涉及一種分離的重組rna分子，當(dāng)用禾谷鐮刀菌轉(zhuǎn)染或與所述禾谷鐮刀菌接觸時，所述重組rna分子減少或消除禾谷鐮刀菌的don產(chǎn)生，其中所述重組rna分子包含18個或更多個連續(xù)核苷酸的至少一個區(qū)段，所述連續(xù)核苷酸與dna或其dna補(bǔ)體的對應(yīng)片段基本上互補(bǔ)(例如，具有與其具有100％互補(bǔ)性的序列的21個連續(xù)核苷酸的區(qū)段)，所述dna具有選自由靶基因序列組組成的組的序列。在一些實(shí)施例中，重組rna分子是雙鏈rna。具體實(shí)施例包括一種分離的重組雙鏈rna分子，所述重組雙鏈rna分子的鏈具有選自由rna觸發(fā)物序列組、rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體組或其組合組成的組的序列。其它實(shí)施例涉及一種分離的重組雙鏈rna分子，其包含具有選自由以下組成的組的序列的第一鏈和與第一鏈互補(bǔ)的第二鏈：seq?id?no:48、64、80-82、84-86、182、188、194、213、220、256、262、268、287和294

26、若干實(shí)施例涉及一種提供對禾谷鐮刀菌的don產(chǎn)生具有增加的抗性的植物的方法，所述方法包含向植物提供至少一個多核苷酸，所述至少一個多核苷酸包含18個或更多個連續(xù)核苷酸的至少一個區(qū)段，所述連續(xù)核苷酸與選自靶基因序列組的靶基因的對應(yīng)片段基本上相同或互補(bǔ)(例如，具有與其具有100％同一性或互補(bǔ)性的序列的21個連續(xù)核苷酸的區(qū)段)。在一實(shí)施例中，提供具有禾谷鐮刀菌的don產(chǎn)生的植物的方法包括向植物提供至少一個多核苷酸，所述至少一個多核苷酸包含至少一個區(qū)段，所述至少一個區(qū)段與靶基因或由靶基因轉(zhuǎn)錄的rna的至少18個連續(xù)核苷酸相同或互補(bǔ)，其中靶基因選自由表1或表2中鑒定的基因組成的組。在一些實(shí)施例中，多核苷酸包含一個或多個選自rna觸發(fā)物序列組或rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體組的核苷酸序列，或包含與rna觸發(fā)物序列或rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體至少約75％、或至少約80％、或至少約85％、或至少約90％、或至少約95％或至少約98％相同的核苷酸序列。在一些實(shí)施例中，多核苷酸是dsrna。在一些實(shí)施例中，dsrna包含：第一鏈，所述第一鏈包含選自rna觸發(fā)物序列的一個或多個序列；以及第二鏈，所述第二鏈包含一個或多個選自rna觸發(fā)物序列反向補(bǔ)體的對應(yīng)序列。

27、若干實(shí)施例涉及一種通過使禾谷鐮刀菌與多核苷酸接觸來減少或消除禾谷鐮刀菌的don產(chǎn)生的方法，所述多核苷酸包含18個或更多個連續(xù)核苷酸的至少一個區(qū)段，所述連續(xù)核苷酸與選自表1或表2中鑒定的基因的靶基因的dna序列的一部分的等效長度的對應(yīng)片段基本上相同或互補(bǔ)(例如，與其具有100％同一性或互補(bǔ)性的序列的21個連續(xù)核苷酸的區(qū)段)。在一些實(shí)施例中，多核苷酸是雙鏈rna。

28、若干實(shí)施例涉及包含至少一個如本文所描述的多核苷酸的人造組合物。在一些實(shí)施例中，提供了可用于局部施加到需要保護(hù)免受禾谷鐮刀菌的don產(chǎn)生影響的植物或物質(zhì)的調(diào)配物。在一些實(shí)施例中，提供了可用于制備轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因植物的重組構(gòu)建體和載體。在一些實(shí)施例中，用于處理植物、植物種子或可繁殖部分的調(diào)配物和涂層。在一些實(shí)施例中，提供了由此類用如本文所描述的多核苷酸處理或含有所述多核苷酸的植物、種子或可繁殖部分產(chǎn)生的商業(yè)產(chǎn)品和食品(特別是具有可檢測量的如本文所描述的多核苷酸的商業(yè)產(chǎn)品和食品)。若干實(shí)施例涉及多克隆或單克隆抗體，其結(jié)合由選自靶基因序列組的序列或序列的片段編碼的蛋白質(zhì)。另一方面涉及多克隆或單克隆抗體，其結(jié)合由選自rna觸發(fā)物序列組或其補(bǔ)體的序列或序列的片段編碼的蛋白質(zhì)。此類抗體是通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的常規(guī)方法制備的。

29、本發(fā)明的其它方面和具體實(shí)施例在以下詳細(xì)描述中公開。