本文件涉及腺相關(guān)病毒(adeno-associated?virus,aav)載體。例如，本文件提供了用于制備和使用aav載體(例如，aav2載體)的方法和材料，所述載體具有(a)將核酸遞送至中心凹視錐的能力，(b)提高的將核酸遞送至視網(wǎng)膜細(xì)胞的效率，(c)將核酸遞送至視網(wǎng)膜細(xì)胞并驅(qū)動視網(wǎng)膜細(xì)胞內(nèi)核酸的高表達(dá)水平的能力，(d)跨視網(wǎng)膜區(qū)域(例如，跨至少兩個視網(wǎng)膜區(qū)域)將核酸遞送至視網(wǎng)膜細(xì)胞的能力，(e)將核酸遞送至眼睛的旁中心凹(parafovea)區(qū)域的視網(wǎng)膜細(xì)胞的能力，(f)將核酸遞送至眼睛內(nèi)的兩種或更多種不同視網(wǎng)膜細(xì)胞類型的能力，(g)將核酸遞送至視網(wǎng)膜色素上皮(retinal?pigment?epithelial，rpe)細(xì)胞的能力，(h)提高的將核酸遞送至視網(wǎng)膜的感光細(xì)胞的效率，(i)提高的將核酸遞送至視網(wǎng)膜的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的效率，(j)提高的將核酸遞送至視網(wǎng)膜的雙極細(xì)胞的效率，(k)提高的將核酸遞送至off-視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(off-retinal?ganglion?cells)的效率，和/或(l)提高的封裝效率和將核酸遞送至細(xì)胞(例如，視網(wǎng)膜細(xì)胞)的能力。

背景技術(shù)：

1、病毒載體(諸如aav載體)是體內(nèi)核酸遞送的有效媒介物，并且其在臨床中的使用正在擴(kuò)增。改良的aav載體和用于制備有效aav載體制劑的aav生產(chǎn)技術(shù)應(yīng)進(jìn)一步擴(kuò)增aav載體在實(shí)驗(yàn)室和臨床中的使用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本文件提供了aav載體(例如，aav2載體)。例如，本文件提供了含有衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)，所述衣殼多肽包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列。本文所述的含有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)，可具有在體內(nèi)感染視網(wǎng)膜細(xì)胞(例如，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、感光細(xì)胞和雙極細(xì)胞)并向感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。本文件還提供了用于制備和使用具有將核酸遞送至視網(wǎng)膜細(xì)胞的能力的aav載體(例如，aav2載體)的方法和材料。

2、如本文所述，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)感染視網(wǎng)膜細(xì)胞(例如，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、感光細(xì)胞和雙極細(xì)胞)并向感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有這樣的能力：在哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)的視網(wǎng)膜細(xì)胞(例如，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、感光細(xì)胞和雙極細(xì)胞)中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平大于(例如，至少大2％、至少大2.5％、至少大5％、至少大7.5％、至少大10％、至少大25％、至少大50％、至少大75％或至少大100％)由具有由seq?id?no:1的氨基酸序列組成的aav衣殼多肽的比較性aav載體(例如，野生型aav2載體)在對照哺乳動物(例如，對照人或?qū)φ辗侨遂`長類動物)的視網(wǎng)膜細(xì)胞中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平。在一些情況下，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)，可用于代替7m8?aav2載體(dalkara等人,sci.transl.med.,5(189):189ra76(2013)和bennett等人,j.struct.biol.,209(2):107433(2020))或代替k912?aav2載體(等人,elife,10:e64175(2021))將核酸遞送至視網(wǎng)膜細(xì)胞(例如，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、感光細(xì)胞和雙極細(xì)胞)。

3、在另一方面，本文件提供了aav載體(例如，aav2載體)。例如，本文件提供了含有衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)，所述衣殼多肽包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列。本文所述的含有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)感染中心凹視錐并向感染的中心凹視錐遞送外源核酸使得感染的中心凹視錐表達(dá)外源核酸的能力。本文件還供了用于制備和使用具有將核酸遞送至中心凹視錐的能力的aav載體(例如，aav2載體)的方法和材料。

4、如本文所述，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)感染中心凹視錐并向感染的中心凹視錐遞送外源核酸使得感染的中心凹視錐表達(dá)外源核酸的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有感染存在于哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)的中心凹中的視錐細(xì)胞并在其中驅(qū)動外源核酸的mrna表達(dá)的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有這樣的能力：在哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)的中心凹視錐中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平大于(例如，至少大10％、至少大25％、至少大50％、至少大75％或至少大100％)由具有由seq?id?no:1的氨基酸序列組成的aav衣殼多肽的比較性aav載體(例如，野生型aav2載體)在對照哺乳動物(例如，對照人或?qū)φ辗侨遂`長類動物)的中心凹視錐中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平。在一些情況下，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可用于代替7m8aav2載體(dalkara等人,sci.transl.med.,5(189):189ra76(2013)和bennett等人,j.struct.biol.,209(2):107433(2020))或代替k912?aav2載體(等人,elife,10:e64175(2021))將核酸遞送至中心凹視錐。

5、在另一方面，本文件提供了含有衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)，所述衣殼多肽包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列。本文所述的含有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)感染視網(wǎng)膜細(xì)胞(例如，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、感光細(xì)胞和雙極細(xì)胞)并向感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞以高水平表達(dá)外源核酸的能力。本文件還提供了用于制備和使用具有將核酸遞送至視網(wǎng)膜細(xì)胞并在視網(wǎng)膜細(xì)胞內(nèi)驅(qū)動核酸的高表達(dá)水平的能力的aav載體(例如，aav2載體)的方法和材料。

6、如本文所述，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)感染視網(wǎng)膜細(xì)胞(例如，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、感光細(xì)胞和雙極細(xì)胞)并向感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞以高水平表達(dá)外源核酸的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有感染哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)眼睛中至少2％(例如，至少2.5％、至少5％、至少7.5％、至少10％或至少25％)的視網(wǎng)膜細(xì)胞(例如，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、感光細(xì)胞和雙極細(xì)胞)并在其中驅(qū)動外源核酸的mrna表達(dá)的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有這樣的能力：在哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)的視網(wǎng)膜細(xì)胞(例如，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、感光細(xì)胞和雙極細(xì)胞)中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平大于(例如，至少大2％、至少大2.5％、至少大5％、至少大7.5％、至少大10％、至少大25％、至少大50％、至少大75％或至少大100％)由具有由seq?id?no:1的氨基酸序列組成的aav衣殼多肽的比較性aav載體(例如，野生型aav2載體)在對照哺乳動物(例如，對照人或?qū)φ辗侨遂`長類動物)的視網(wǎng)膜細(xì)胞中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平。在一些情況下，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可用于代替7m8aav2載體(dalkara等人,sci.transl.med.,5(189):189ra76(2013)和bennett等人,j.struct.biol.,209(2):107433(2020))或代替k912?aav2載體(等人,elife,10:e64175(2021))將核酸遞送至視網(wǎng)膜細(xì)胞(例如，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、感光細(xì)胞和雙極細(xì)胞)。

7、在另一方面，本文件提供了含有衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)，所述衣殼多肽包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列。本文所述的含有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)跨視網(wǎng)膜區(qū)域(例如，跨至少兩個視網(wǎng)膜區(qū)域)感染視網(wǎng)膜細(xì)胞(例如，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、感光細(xì)胞和雙極細(xì)胞)并向感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。本文件還提供了用于制備和使用具有跨視網(wǎng)膜區(qū)域向視網(wǎng)膜細(xì)胞遞送核酸并驅(qū)動遞送的核酸在視網(wǎng)膜細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的能力的aav載體(例如，aav2載體)的方法和材料。例如，本文所述的aav載體(例如，aav2載體)可將核酸遞送至中心凹區(qū)域中至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的視網(wǎng)膜細(xì)胞、旁中心凹區(qū)域中至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的視網(wǎng)膜細(xì)胞、血管弓(vascular?arcade)區(qū)域中至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的視網(wǎng)膜細(xì)胞和/或周邊區(qū)域中至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的視網(wǎng)膜細(xì)胞。

8、如本文所述，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)跨視網(wǎng)膜區(qū)域(例如，跨至少兩個視網(wǎng)膜區(qū)域)感染視網(wǎng)膜細(xì)胞(例如，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、感光細(xì)胞和雙極細(xì)胞)并向感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有感染哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)眼睛的中心凹區(qū)域中的至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的視網(wǎng)膜細(xì)胞、旁中心凹區(qū)域中的至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的視網(wǎng)膜細(xì)胞、血管弓區(qū)域中的至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的視網(wǎng)膜細(xì)胞和/或周邊區(qū)域中的至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的視網(wǎng)膜細(xì)胞并在其中驅(qū)動外源核酸的mrna表達(dá)的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有這樣的能力：在哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)眼睛的中心凹區(qū)域、旁中心凹區(qū)域、血管弓區(qū)域和/或周邊區(qū)域的視網(wǎng)膜細(xì)胞中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平大于由具有由seq?id?no:1的氨基酸序列組成的aav衣殼多肽的比較性aav載體(例如，野生型aav2載體)在對照哺乳動物(例如，對照人或?qū)φ辗侨遂`長類動物)的那些區(qū)域的視網(wǎng)膜細(xì)胞中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平。在一些情況下，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可用于代替7m8?aav2載體(dalkara等人,sci.transl.med.,5(189):189ra76(2013)和bennett等人,j.struct.biol.,209(2):107433(2020))或代替k912?aav2載體(等人,elife,10:e64175(2021))將核酸遞送至視網(wǎng)膜細(xì)胞(例如，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、感光細(xì)胞和雙極細(xì)胞)。

9、在另一方面，本文件提供了含有衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)，所述衣殼多肽包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列。本文所述的含有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)感染眼睛的旁中心凹區(qū)域的視網(wǎng)膜細(xì)胞并向旁中心凹區(qū)域中感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。本文件還提供了用于制備和使用具有將核酸遞送至眼睛的旁中心凹區(qū)域的視網(wǎng)膜細(xì)胞的能力的aav載體(例如，aav2載體)的方法和材料。

10、如本文所述，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)感染眼睛的旁中心凹區(qū)域的視網(wǎng)膜細(xì)胞并向感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有感染存在于哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)眼睛的旁中心凹區(qū)域中的至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的視網(wǎng)膜細(xì)胞并在其中驅(qū)動外源核酸的mrna表達(dá)的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有這樣的能力：在哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)眼睛的旁中心凹區(qū)域的視網(wǎng)膜細(xì)胞中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平大于(例如，至少大10％、至少大25％、至少大50％、至少大75％或至少大100％)由具有由seq?id?no:1的氨基酸序列組成的aav衣殼多肽的比較性aav載體(例如，野生型aav2載體)在對照哺乳動物(例如，對照人或?qū)φ辗侨遂`長類動物)眼睛的旁中心凹區(qū)域的視網(wǎng)膜細(xì)胞中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平。在一些情況下，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可用于代替7m8?aav2載體(dalkara等人,sci.transl.med.,5(189):189ra76(2013)和bennett等人,j.struct.biol.,209(2):107433(2020))或代替k912?aav2載體(等人,elife,10:e64175(2021))將核酸遞送至眼睛的旁中心凹區(qū)域的視網(wǎng)膜細(xì)胞(例如，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、感光細(xì)胞和雙極細(xì)胞)。

11、在另一方面，本文件提供了含有衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)，所述衣殼多肽包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列。本文所述的含有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)感染眼睛內(nèi)的兩種或更多種(例如，兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種、五種或更多種、六種或更多種或七種或更多種)不同視網(wǎng)膜細(xì)胞類型并向感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。本文件還提供了用于制備和使用具有將核酸遞送至眼睛內(nèi)的兩種或更多種(例如，兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種、五種或更多種、六種或更多種或七種或更多種)不同視網(wǎng)膜細(xì)胞類型并驅(qū)動所遞送的核酸在那些視網(wǎng)膜細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的能力的aav載體(例如，aav2載體)的方法和材料。例如，本文所述的aav載體(例如，aav2載體)可將核酸遞送至眼睛的兩種、三種、四種、五種、六種或七種以下視網(wǎng)膜細(xì)胞類型：視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、無長突細(xì)胞、水平細(xì)胞、雙極細(xì)胞、穆勒(muller)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、感光細(xì)胞和視網(wǎng)膜色素上皮(rpe)細(xì)胞。在一些情況下，本文所述的aav載體(例如，aav2載體)可在玻璃體內(nèi)施用后將核酸遞送至哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)眼睛的至少一些(例如，至少2％、至少2.5％、至少5％、至少10％或至少25％)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、無長突細(xì)胞、水平細(xì)胞、雙極細(xì)胞、穆勒神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、感光細(xì)胞和rpe細(xì)胞。

12、如本文所述，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)感染眼睛內(nèi)的兩種或更多種(例如，兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種、五種或更多種、六種或更多種或七種或更多種)不同視網(wǎng)膜細(xì)胞類型并向感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的視網(wǎng)膜細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有例如在玻璃體內(nèi)施用后感染哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)眼睛的至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的無長突細(xì)胞、至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的水平細(xì)胞、至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的雙極細(xì)胞、至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的穆勒神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的感光細(xì)胞和/或至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的rpe細(xì)胞并在其中驅(qū)動外源核酸的mrna表達(dá)的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有這樣的能力：在哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)眼睛的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、無長突細(xì)胞、水平細(xì)胞、雙極細(xì)胞、穆勒神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、感光細(xì)胞和/或rpe細(xì)胞中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平大于(例如，至少大10％、至少大25％、至少大50％、至少大75％或至少大100％)由具有由seq?id?no:1的氨基酸序列組成的aav衣殼多肽的比較性aav載體(例如，野生型aav2載體)在對照哺乳動物(例如，對照人或?qū)φ辗侨遂`長類動物)的那些視網(wǎng)膜細(xì)胞中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平。在一些情況下，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可用于代替7m8?aav2載體(dalkara等人,sci.transl.med.,5(189):189ra76(2013)和bennett等人,j.struct.biol.,209(2):107433(2020))或代替k912aav2載體(等人,elife,10:e64175(2021))將核酸遞送至哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)眼睛內(nèi)的兩種或更多種(例如，兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種、五種或更多種、六種或更多種或七種或更多種)不同視網(wǎng)膜細(xì)胞類型。

13、在另一方面，本文件提供了含有衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)，所述衣殼多肽包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列。本文所述的含有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)感染rpe細(xì)胞并向感染的rpe細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的rpe細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。本文件還提供了用于制備和使用具有向rpe細(xì)胞遞送核酸并驅(qū)動所遞送的核酸在rpe細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的能力的aav載體(例如，aav2載體)的方法和材料。例如，在例如玻璃體內(nèi)施用之后，本文所述的aav載體(例如，aav2載體)可將核酸遞送至哺乳動物眼睛的至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的rpe細(xì)胞。

14、如本文所述，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)感染rpe細(xì)胞并向感染的rpe細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的rpe細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有感染哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)眼睛的至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的rpe細(xì)胞并在其中驅(qū)動外源核酸的mrna表達(dá)的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有這樣的能力：在哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)眼睛的rpe細(xì)胞中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平大于(例如，至少大10％、至少大25％、至少大50％、至少大75％或至少大100％)由具有由seq?id?no:1的氨基酸序列組成的aav衣殼多肽的比較性aav載體(例如，野生型aav2載體)在對照哺乳動物(例如，對照人或?qū)φ辗侨遂`長類動物)的rpe細(xì)胞中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平。在一些情況下，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可用于代替7m8?aav2載體(dalkara等人,sci.transl.med.,5(189):189ra76(2013)和bennett等人,j.struct.biol.,209(2):107433(2020))或代替k912?aav2載體(等人,elife,10:e64175(2021))將核酸遞送至rpe細(xì)胞。

15、在另一方面，本文件提供了含有衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)，所述衣殼多肽包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列。本文所述的含有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)感染視網(wǎng)膜的感光細(xì)胞并向感染的感光細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的感光細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。本文件還提供了用于制備和使用具有將核酸遞送至視網(wǎng)膜的感光細(xì)胞的能力的aav載體(例如，aav2載體)的方法和材料。

16、如本文所述，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)感染視網(wǎng)膜的感光細(xì)胞并向感染的感光細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的感光細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有感染哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)眼睛的至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的感光細(xì)胞并在其中驅(qū)動外源核酸的mrna表達(dá)的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有這樣的能力：在哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)視網(wǎng)膜的感光細(xì)胞中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平大于(例如，至少大10％、至少大25％、至少大50％、至少大75％或至少大100％)由具有由seq?id?no:1的氨基酸序列組成的aav衣殼多肽的比較性aav載體(例如，野生型aav2載體)在對照哺乳動物(例如，對照人或?qū)φ辗侨遂`長類動物)視網(wǎng)膜的感光細(xì)胞中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平。在一些情況下，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可用于代替7m8?aav2載體(dalkara等人,sci.transl.med.,5(189):189ra76(2013)和bennett等人,j.struct.biol.,209(2):107433(2020))或代替k912?aav2載體(等人,elife,10:e64175(2021))將核酸遞送至視網(wǎng)膜的感光細(xì)胞。

17、在另一方面，本文件提供了含有衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)，所述衣殼多肽包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列。本文所述的含有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)感染視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞并向感染的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。本文件還提供了用于制備和使用具有將核酸遞送至視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的能力的aav載體(例如，aav2載體)的方法和材料。

18、如本文所述，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)感染視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞并向感染的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有感染哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)眼睛的至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞并在其中驅(qū)動外源核酸的mrna表達(dá)的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有這樣的能力：在哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平大于(例如，至少大10％、至少大25％、至少大50％、至少大75％或至少大100％)由具有由seq?id?no:1的氨基酸序列組成的aav衣殼多肽的比較性aav載體(例如，野生型aav2載體)在對照哺乳動物(例如，對照人或?qū)φ辗侨遂`長類動物)眼睛的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平。在一些情況下，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可用于代替7m8?aav2載體(dalkara等人,sci.transl.med.,5(189):189ra76(2013)和bennett等人,j.struct.biol.,209(2):107433(2020))或代替k912?aav2載體(等人,elife,10:e64175(2021))將核酸遞送至視網(wǎng)膜的感光細(xì)胞。

19、在另一方面，本文件提供了含有衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)，所述衣殼多肽包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列。本文所述的含有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)感染視網(wǎng)膜的雙極細(xì)胞并向感染的雙極細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的雙極細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。本文件還提供了用于制備和使用具有將核酸遞送至視網(wǎng)膜的雙極細(xì)胞的能力的aav載體(例如，aav2載體)的方法和材料。

20、如本文所述，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)感染視網(wǎng)膜的雙極細(xì)胞并向感染的雙極細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的雙極細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有感染哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)視網(wǎng)膜的至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的雙極細(xì)胞并在其中驅(qū)動外源核酸的mrna表達(dá)的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有這樣的能力：在哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)視網(wǎng)膜的雙極細(xì)胞中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平大于(例如，至少大10％、至少大25％、至少大50％、至少大75％或至少大100％)由具有由seq?id?no:1的氨基酸序列組成的aav衣殼多肽的比較性aav載體(例如，野生型aav2載體)在對照哺乳動物(例如，對照人或?qū)φ辗侨遂`長類動物)視網(wǎng)膜的雙極細(xì)胞中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平。在一些情況下，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可用于代替7m8?aav2載體(dalkara等人,sci.transl.med.,5(189):189ra76(2013)和bennett等人,j.struct.biol.,209(2):107433(2020))或代替k912?aav2載體(等人,elife,10:e64175(2021))將核酸遞送至視網(wǎng)膜的感光細(xì)胞。

21、在另一方面，本文件提供了含有衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)，所述衣殼多肽包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列。本文所述的含有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)感染off-視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞并向感染的off-視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的off-視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。本文件還提供了用于制備和使用具有將核酸遞送至off-視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的能力的aav載體(例如，aav2載體)的方法和材料。

22、如本文所述，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有在體內(nèi)感染off-視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞并向感染的off-視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的off-視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有感染哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)的至少約2％(例如，至少約2.5％、至少約5％、至少約7.5％、至少約10％或至少約25％)的off-視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞并在其中驅(qū)動外源核酸的mrna表達(dá)的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)可具有這樣的能力：在哺乳動物(例如，人或非人靈長類動物)的off-視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平大于(例如，至少大10％、至少大25％、至少大50％、至少大75％或至少大100％)由具有由seq?id?no:1的氨基酸序列組成的aav衣殼多肽的比較性aav載體(例如，野生型aav2載體)在對照哺乳動物(例如，對照人或?qū)φ辗侨遂`長類動物)的off-視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中所驅(qū)動的外源核酸的mrna表達(dá)水平。在一些情況下，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可用于代替7m8?aav2載體(dalkara等人,sci.transl.med.,5(189):189ra76(2013)和bennett等人,j.struct.biol.,209(2):107433(2020))或代替k912?aav2載體(等人,elife,10:e64175(2021))將核酸遞送至視網(wǎng)膜的感光細(xì)胞。

23、在另一方面，本文件提供了含有衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)，所述衣殼多肽包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列。本文所述的含有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有提高的封裝效率、在體內(nèi)或體外感染細(xì)胞(例如，視網(wǎng)膜細(xì)胞)的能力，以及向感染的細(xì)胞遞送外源核酸使得感染的細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。本文件還提供了用于制備和使用具有提高的封裝效率、在體內(nèi)或體外向細(xì)胞(例如，視網(wǎng)膜細(xì)胞)遞送核酸的能力，以及驅(qū)動所遞送的核酸在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的能力的aav載體(例如，aav2載體)的方法和材料。例如，本文所述的aav載體(例如，aav2載體)的封裝效率可大于具有由seq?id?no:1的氨基酸序列組成的aav衣殼多肽的比較性aav載體(例如，野生型aav2載體)的封裝效率。

24、如本文所述，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)可具有提高的封裝效率(例如，封裝效率大于具有由seq?id?no:1的氨基酸序列組成的aav衣殼多肽的比較性aav載體(例如，野生型aav2載體)的封裝效率)、在體內(nèi)或體外感染細(xì)胞(例如，視網(wǎng)膜細(xì)胞)的能力，以及向感染的細(xì)胞驅(qū)動外源核酸使得感染的細(xì)胞表達(dá)外源核酸的能力。在一些情況下，本文所提供的aav載體(例如，aav2載體)的封裝效率可大于(例如，至少大10％、至少大25％、至少大50％、至少大75％或至少大100％)具有由seq?id?no:1的氨基酸序列組成的aav衣殼多肽的比較性aav載體(例如，野生型aav2載體)的封裝效率。在一些情況下，本文所提供的具有包含表1所示的氨基酸序列(或其變體)或式a所示的氨基酸序列的aav衣殼多肽的aav載體(例如，aav2載體)的封裝效率可大于7m8aav2載體(dalkara等人,sci.transl.med.,5(189):189ra76(2013)和bennett等人,j.struct.biol.,209(2):107433(2020))或k912?aav2載體(等人,elife,10:e64175(2021))的封裝效率。

25、一般來說，本文件的一個方面提供了一種包含aav衣殼多肽的腺相關(guān)病毒(aav)載體(例如，aav2載體)，其中衣殼多肽包含seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列位于seq?id?no:1的氨基酸位置587與588之間(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了seq?id?no:5的氨基酸序列位于seq?id?no:1的氨基酸位置587與588之間(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了用seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列置換seq?id?no:1的位置585至590(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)的氨基酸。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了用seq?id?no:2的氨基酸序列置換seq?id?no:1的位置585至590(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)的氨基酸。載體可以是aav2載體。當(dāng)向人(或非人靈長類動物)的眼睛玻璃體內(nèi)施用至少1x107個載體的滴度時，載體可感染大于2.5％的視網(wǎng)膜細(xì)胞。載體可包含編碼rna或多肽的外源核酸。外源核酸可編碼rna。rna可以是sirna或微rna。外源核酸可編碼多肽。多肽可以是abca4多肽、crb1多肽、nphp5多肽或nr2e3多肽。與包含由seqid?no:1所示的氨基酸序列組成的衣殼多肽的比較性aav載體的表達(dá)水平相比，載體可在視網(wǎng)膜細(xì)胞中表達(dá)更多的核酸。

26、在另一方面，本文件提供了一種包含seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列的aav衣殼多肽。多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列位于seq?id?no:1的氨基酸位置587與588之間(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)。多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了seq?id?no:5的氨基酸序列位于seq?idno:1的氨基酸位置587與588之間(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)。多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了用seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列置換seq?id?no:1的位置585至590(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)的氨基酸。多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了用seq?id?no:2的氨基酸序列置換seq?id?no:1的位置585至590(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置，例如seq?id?no:10)的氨基酸。在一些情況下，衣殼多肽可包含seqid?no:11-26中任一個的氨基酸序列或由其組成。當(dāng)向人(或非人靈長類動物)的眼睛玻璃體內(nèi)施用至少1x107個載體的滴度時，包含多肽的aav載體可感染大于2.5％的視網(wǎng)膜細(xì)胞。與包含由seq?id?no:1所示的氨基酸序列組成的衣殼多肽的比較性aav載體的表達(dá)水平相比，包含多肽的aav載體可在視網(wǎng)膜細(xì)胞中表達(dá)更多的核酸。

27、在另一方面，本文件提供了一種編碼包含aav衣殼多肽的腺相關(guān)病毒(aav)載體的核酸分子，其中衣殼多肽包含seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列。衣殼多肽可包含seqid?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或與seq?idno:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列位于seq?id?no:1的氨基酸位置587與588之間(或替代序列例如seq?id?no:10的適當(dāng)氨基酸位置)。在一些情況下，衣殼多肽可包含seq?id?no:11-26中任一個的氨基酸序列或由其組成。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了seq?id?no:5的氨基酸序列位于seq?id?no:1的氨基酸位置587與588之間(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了用seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列置換seq?id?no:1的位置585至590(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)的氨基酸。在一些情況下，衣殼多肽可包含seq?id?no:27-42中任一個的氨基酸序列或由其組成。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了用seq?id?no:2的氨基酸序列置換seq?id?no:1的位置585至590(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)的氨基酸。載體可以是aav2載體。當(dāng)向人(或非人靈長類動物)的眼睛玻璃體內(nèi)施用至少1x107個載體的滴度時，載體可感染大于2.5％的視網(wǎng)膜細(xì)胞。載體可包含編碼rna或多肽的外源核酸。外源核酸可編碼rna。rna可以是sirna或微rna。外源核酸可編碼多肽。多肽可以是abca4多肽、crb1多肽、nphp5多肽或nr2e3多肽。與包含由seq?idno:1所示的氨基酸序列組成的衣殼多肽的比較性aav載體的表達(dá)水平相比，所述載體可在視網(wǎng)膜細(xì)胞中表達(dá)更多的核酸。核酸分子可以是dna。

28、在另一方面，本文件提供了一種編碼包含seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列的aav衣殼多肽的核酸分子。多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或與seq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列位于seq?id?no:1的氨基酸位置587與588之間(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)。多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了seq?id?no:5的氨基酸序列位于seq?id?no:1的氨基酸位置587與588之間(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)。多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了用seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列置換seq?id?no:1的位置585至590(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)的氨基酸。衣殼多肽可包含seq?id?no:11-42中任一個的氨基酸序列或由其組成。多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了用seq?id?no:2的氨基酸序列置換seq?id?no:1的位置585至590(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)的氨基酸。當(dāng)向人(或非人靈長類動物)的眼睛玻璃體內(nèi)施用至少1x107個載體的滴度時，包含多肽的aav載體可感染大于2.5％的視網(wǎng)膜細(xì)胞。與包含由seqid?no:1所示的氨基酸序列組成的衣殼多肽的比較性aav載體的表達(dá)水平相比，包含多肽的aav載體可在視網(wǎng)膜細(xì)胞中表達(dá)更多的核酸。核酸分子可以是dna。

29、在另一方面，本文件提供了一種包含前述兩個段落中任一個的核酸分子的宿主細(xì)胞。宿主細(xì)胞可表達(dá)載體。宿主細(xì)胞可表達(dá)多肽。

30、在另一方面，本文件提供了一種包含含有aav衣殼多肽的aav載體的宿主細(xì)胞，其中衣殼多肽包含seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?idno:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列位于seq?id?no:1的氨基酸位置587與588之間(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了seq?id?no:5的氨基酸序列位于seq?id?no:1的氨基酸位置587與588之間(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?idno:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了用seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列置換seq?id?no:1的位置585至590(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)的氨基酸。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了用seqid?no:2的氨基酸序列置換seq?id?no:1的位置585至590(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)的氨基酸。衣殼多肽可包含seq?id?no:11-42中任一個的氨基酸序列或由其組成。載體可以是aav2載體。當(dāng)向人(或非人靈長類動物)的眼睛玻璃體內(nèi)施用至少1x107個載體的滴度時，載體可感染大于2.5％的視網(wǎng)膜細(xì)胞。載體可包含編碼rna或多肽的外源核酸。外源核酸可編碼rna。rna可以是sirna或微rna。外源核酸可編碼多肽。多肽可以是abca4多肽、crb1多肽、nphp5多肽或nr2e3多肽。與包含由seq?id?no:1所示的氨基酸序列組成的衣殼多肽的比較性aav載體的表達(dá)水平相比，所述載體可在視網(wǎng)膜細(xì)胞中表達(dá)更多的核酸。宿主細(xì)胞可以是視網(wǎng)膜細(xì)胞。

31、在另一方面，本文件提供了一種包含含有seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列的aav衣殼多肽的宿主細(xì)胞。多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或與seq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列位于seq?id?no:1的氨基酸位置587與588之間(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)。多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了seq?id?no:5的氨基酸序列位于seq?id?no:1的氨基酸位置587與588之間(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)。多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了用seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列置換seq?id?no:1的位置585至590(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)的氨基酸。多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了用seq?id?no:2的氨基酸序列置換seq?id?no:1的位置585至590(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)的氨基酸。衣殼多肽可包含seq?id?no:11-42中任一個的氨基酸序列或由其組成。當(dāng)向人(或非人靈長類動物)的眼睛玻璃體內(nèi)施用至少1x107個載體的滴度時，包含多肽的aav載體可感染大于2.5％的視網(wǎng)膜細(xì)胞。與包含由seq?id?no:1所示的氨基酸序列組成的衣殼多肽的比較性aav載體的表達(dá)水平相比，包含多肽的aav載體可在視網(wǎng)膜細(xì)胞中表達(dá)更多的核酸。宿主細(xì)胞可以是視網(wǎng)膜細(xì)胞。

32、在另一方面，本文件提供了一種包含含有aav衣殼多肽的aav載體的組合物，其中衣殼多肽包含seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或與seq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列位于seq?id?no:1的氨基酸位置587與588之間(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了seq?id?no:5的氨基酸序列位于seq?id?no:1的氨基酸位置587與588之間(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了用seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列置換seq?id?no:1的位置585至590(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)的氨基酸。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了用seqid?no:2的氨基酸序列置換seq?id?no:1的位置585至590(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)的氨基酸。衣殼多肽可包含seq?id?no:11-42中任一個的氨基酸序列或由其組成。載體可以是aav2載體。當(dāng)向人(或非人靈長類動物)的眼睛玻璃體內(nèi)施用至少1x107個載體的滴度時，載體可感染大于2.5％的視網(wǎng)膜細(xì)胞。載體可包含編碼rna或多肽的外源核酸。外源核酸可編碼rna。rna可以是sirna或微rna。外源核酸可編碼多肽。多肽可以是abca4多肽、crb1多肽、nphp5多肽或nr2e3多肽。與包含由seq?id?no:1所示的氨基酸序列組成的衣殼多肽的比較性aav載體的表達(dá)水平相比，所述載體可在視網(wǎng)膜細(xì)胞中表達(dá)更多的核酸。組合物可包含約1x107至約1x1014個載體。組合物可包含磷酸鹽緩沖鹽水、漢克氏平衡鹽溶液(hank’sbalanced?salt?solution)或普朗尼克(pluronic)f68。

33、在另一方面，本文件提供了一種用于將外源核酸序列遞送至哺乳動物內(nèi)的視網(wǎng)膜細(xì)胞的方法。所述方法包括(或基本上由以下組成或由以下組成)使視網(wǎng)膜細(xì)胞與包含aav衣殼多肽和外源核酸序列的aav載體接觸，其中衣殼多肽包含seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列，其中aav載體感染視網(wǎng)膜細(xì)胞，從而將外源核酸序列遞送至視網(wǎng)膜細(xì)胞。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或與seq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列位于seq?id?no:1的氨基酸位置587與588之間(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了seq?id?no:5的氨基酸序列位于seq?id?no:1的氨基酸位置587與588之間(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了用seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列置換seq?id?no:1的位置585至590(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)的氨基酸。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了用seq?id?no:2的氨基酸序列置換seq?id?no:1的位置585至590(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)的氨基酸。衣殼多肽可包含seq?id?no:11-42中任一個的氨基酸序列或由其組成。哺乳動物可以是人(或非人靈長類動物)。載體可以是aav2載體。當(dāng)向人(或非人靈長類動物)的眼睛玻璃體內(nèi)施用至少1x107個載體的滴度時，載體可感染大于2.5％的視網(wǎng)膜細(xì)胞。外源核酸序列可編碼rna或多肽。外源核酸可編碼rna。rna可以是sirna或微rna。外源核酸可編碼多肽。多肽可以是abca4多肽、crb1多肽、nphp5多肽或nr2e3多肽。與包含由seq?id?no:1所示的氨基酸序列組成的衣殼多肽的比較性aav載體在視網(wǎng)膜細(xì)胞中的表達(dá)水平相比，所述載體可在視網(wǎng)膜細(xì)胞中表達(dá)更多的外源核酸序列。所述方法可包括向哺乳動物玻璃體內(nèi)施用包含載體的組合物，從而使視網(wǎng)膜細(xì)胞與載體接觸。組合物可包含約1x107至約1x1014個載體。

34、在另一方面，本文件提供了一種用于治療視網(wǎng)膜疾患的方法。所述方法包括(或基本上由以下組成或由以下組成)使患有視網(wǎng)膜疾患的哺乳動物的視網(wǎng)膜細(xì)胞與包含aav衣殼多肽和外源核酸序列的aav載體接觸，其中衣殼多肽包含seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列，其中aav載體感染視網(wǎng)膜細(xì)胞并驅(qū)動外源核酸序列在視網(wǎng)膜細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)，從而治療視網(wǎng)膜疾患。哺乳動物可以是人(或非人靈長類動物)。視網(wǎng)膜疾患可選自由以下組成的組：lca、oca1、視網(wǎng)膜色素變性、視桿/視錐營養(yǎng)不良、視錐營養(yǎng)不良、斯特格氏病(stargardt?disease)、尤塞氏綜合征、xlrp和xlrs。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或與seq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了seq?id?no:2-5中任一個的氨基酸序列位于seq?id?no:1的氨基酸位置587與588之間(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了seq?id?no:5的氨基酸序列位于seq?id?no:1的氨基酸位置587與588之間(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了用seqid?no:2-5中任一個的氨基酸序列置換seq?id?no:1的位置585至590(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)的氨基酸。衣殼多肽可包含seq?id?no:1的氨基酸序列(或?yàn)閟eq?id?no:10中所示的氨基酸序列的替代序列，或?yàn)榕cseq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的替代序列)，除了用seq?idno:2的氨基酸序列置換seq?id?no:1的位置585至590(或替代序列的適當(dāng)氨基酸位置)的氨基酸。衣殼多肽可包含seq?id?no:11-42中任一個的氨基酸序列或由其組成。載體可以是aav2載體。當(dāng)向哺乳動物的眼睛玻璃體內(nèi)施用至少1x107個載體的滴度時，載體可感染大于2.5％的視網(wǎng)膜細(xì)胞。外源核酸序列可編碼rna。rna可以是sirna或微rna。外源核酸可編碼多肽。多肽可以是abca4多肽、crb1多肽、nphp5多肽和nr2e3多肽。與包含由seq?id?no:1所示的氨基酸序列組成的衣殼多肽的比較性aav載體在視網(wǎng)膜細(xì)胞中的表達(dá)水平相比，所述載體可在視網(wǎng)膜細(xì)胞中表達(dá)更多的外源核酸序列。所述方法可包括向哺乳動物玻璃體內(nèi)施用包含載體的組合物，從而使視網(wǎng)膜細(xì)胞與載體接觸。組合物可包含約1x107至約1x1014個載體。

35、除非另有定義，否則本文中所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語均具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員通常所理解的相同含義。盡管與本文所述的那些相似或等效的方法和材料可用于實(shí)踐本發(fā)明，但在下文描述適合的方法和方法。本文所提及的所有公布、專利申請、專利和其他參考文獻(xiàn)以引用方式整體并入本文。如有沖突，以本說明書(包括定義)為準(zhǔn)。此外，材料、方法和實(shí)例僅是說明性的并且不旨在為限制性的。

36、本發(fā)明的一個或多個實(shí)施方案的細(xì)節(jié)在以下附圖中闡述。本發(fā)明的其他特征、目的和優(yōu)點(diǎn)將由描述和權(quán)利要求顯而易見。