本公開涉及改造啟動(dòng)子、包含該改造啟動(dòng)子的表達(dá)載體、包含該表達(dá)載體的微生物、利用了該微生物的物質(zhì)的生產(chǎn)方法、基因組上被導(dǎo)入了該改造啟動(dòng)子的改造藍(lán)細(xì)菌、和改造啟動(dòng)子的制作方法。

背景技術(shù)：

1、為了提高利用了微生物的物質(zhì)的生產(chǎn)性，進(jìn)行了能夠提高編碼使微生物生產(chǎn)的任意物質(zhì)(例如，蛋白質(zhì)等)的基因的表達(dá)量的啟動(dòng)子的開發(fā)。

2、例如，專利文獻(xiàn)1公開了通過改造枯草菌的堿性纖維素酶基因的啟動(dòng)子的堿基序列，從而獲得啟動(dòng)子活性提高、能夠進(jìn)行強(qiáng)的表達(dá)誘導(dǎo)的改造啟動(dòng)子，以及利用應(yīng)用了該改造啟動(dòng)子的微生物的有效的堿性纖維素酶的分泌生產(chǎn)方法。

3、另外，例如，專利文獻(xiàn)2公開了改造氣單胞菌屬(aeromonas)細(xì)菌的r結(jié)構(gòu)體特異性烯脂酰輔酶a水合酶基因的啟動(dòng)子的堿基序列而制作能夠調(diào)節(jié)該基因的表達(dá)的改造啟動(dòng)子，使用應(yīng)用了該改造啟動(dòng)子的微生物有效地生產(chǎn)單體組成比被控制了的聚羥基脂肪酸酯共聚物的方法。

4、現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

5、專利文獻(xiàn)

6、專利文獻(xiàn)1：日本特開2005-278644號(hào)公報(bào)

7、專利文獻(xiàn)2：國(guó)際公開第2015/115619號(hào)

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、發(fā)明要解決的課題

2、然而，根據(jù)物質(zhì)不同，有時(shí)即使應(yīng)用啟動(dòng)子活性高的改造啟動(dòng)子，編碼該物質(zhì)的基因的表達(dá)量也降低，因而需要根據(jù)使微生物生產(chǎn)的物質(zhì)來適當(dāng)調(diào)節(jié)啟動(dòng)子活性，但調(diào)節(jié)較難。

3、因此，本公開提供能夠靈活地調(diào)節(jié)編碼任意物質(zhì)的基因的表達(dá)量的改造啟動(dòng)子、表達(dá)載體、微生物、物質(zhì)的生產(chǎn)方法、改造藍(lán)細(xì)菌、和改造啟動(dòng)子的制作方法。

4、用于解決課題的手段

5、本公開的一個(gè)方案所涉及的改造啟動(dòng)子，是對(duì)slr1841基因的起始密碼子上游的348堿基的堿基序列(序列號(hào)1)、或與序列號(hào)1所示的堿基序列有80％以上同源性的堿基序列，通過(i)將該堿基序列中包含的1個(gè)以上堿基替換成其他堿基、(ii)從該堿基序列中使1個(gè)以上堿基缺失、或(iii)對(duì)該堿基序列插入1個(gè)以上堿基方式進(jìn)行改造而得的啟動(dòng)子。

6、發(fā)明的效果

7、根據(jù)本公開的改造啟動(dòng)子和改造啟動(dòng)子的制造方法，可以提供能夠靈活地調(diào)節(jié)編碼任意物質(zhì)的基因的表達(dá)量的改造啟動(dòng)子。另外，根據(jù)本公開的表達(dá)載體，可以提供能夠在轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞中靈活地調(diào)節(jié)編碼任意物質(zhì)的基因的表達(dá)量的表達(dá)載體。另外，根據(jù)本公開的微生物、物質(zhì)的生產(chǎn)方法和改造藍(lán)細(xì)菌，通過編碼任意物質(zhì)的基因的表達(dá)，可以提供能夠以所期望的效率生產(chǎn)由該基因編碼的物質(zhì)的微生物、物質(zhì)的生產(chǎn)方法和改造藍(lán)細(xì)菌。

技術(shù)特征：

1.一種改造啟動(dòng)子，是對(duì)slr1841基因的起始密碼子上游的348堿基的堿基序列即序列號(hào)1、或與序列號(hào)1所示的所述堿基序列有80％以上同源性的堿基序列，通過選自(i)將該堿基序列中包含的1個(gè)以上堿基替換成其他堿基、(ii)從該堿基序列中使1個(gè)以上堿基缺失、和(iii)在該堿基序列插入1個(gè)以上堿基中的至少1種方式進(jìn)行改造而得的啟動(dòng)子。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的改造啟動(dòng)子，是對(duì)序列號(hào)1所示的所述堿基序列中所述起始密碼子的54堿基～94堿基上游的堿基序列即序列號(hào)2的區(qū)域、或與序列號(hào)2所示的所述堿基序列的區(qū)域相當(dāng)?shù)膮^(qū)域，通過選自(i)將該區(qū)域中包含的1個(gè)以上堿基替換成其他堿基、(ii)使該區(qū)域中包含的1個(gè)以上堿基缺失、和(iii)在該區(qū)域中插入1個(gè)以上堿基中的至少1種方式進(jìn)行改造而得的啟動(dòng)子。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的改造啟動(dòng)子，是對(duì)序列號(hào)1所示的所述堿基序列中所述起始密碼子的62堿基～67堿基上游的堿基序列tacaat的區(qū)域、或與所述堿基序列tacaat的區(qū)域相當(dāng)?shù)膮^(qū)域，通過選自(i)將該區(qū)域中包含的1個(gè)以上堿基替換成其他堿基、(ii)使該區(qū)域中包含的1個(gè)以上堿基缺失、和(iii)在該區(qū)域中插入1個(gè)以上堿基中的至少1種方式進(jìn)行改造而得的啟動(dòng)子。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的改造啟動(dòng)子，是對(duì)序列號(hào)1所示的所述堿基序列中所述起始密碼子的89堿基～94堿基上游的堿基序列ttctcc、或與所述堿基序列ttctcc的區(qū)域相當(dāng)?shù)膮^(qū)域，通過選自(i)將該區(qū)域中包含的1個(gè)以上堿基替換成其他堿基、(ii)使該區(qū)域中包含的1個(gè)以上堿基缺失、和(iii)在該區(qū)域中插入1個(gè)以上堿基中的至少1種方式進(jìn)行改造而得的啟動(dòng)子。

5.一種表達(dá)載體，包含權(quán)利要求1～4的任一項(xiàng)所述的改造啟動(dòng)子。

6.一種微生物，包含權(quán)利要求5所述的表達(dá)載體。

7.一種微生物，在基因組上導(dǎo)入有權(quán)利要求1～4的任一項(xiàng)所述的改造啟動(dòng)子。

8.一種改造藍(lán)細(xì)菌，在基因組上導(dǎo)入有權(quán)利要求1～4的任一項(xiàng)所述的改造啟動(dòng)子。

9.一種物質(zhì)的生產(chǎn)方法，其中，通過培養(yǎng)權(quán)利要求6所述的微生物，從而使所述微生物生產(chǎn)物質(zhì)。

10.一種物質(zhì)的生產(chǎn)方法，其中，通過培養(yǎng)權(quán)利要求7所述的微生物，從而使所述微生物生產(chǎn)物質(zhì)。

11.一種物質(zhì)的生產(chǎn)方法，其中，通過培養(yǎng)權(quán)利要求8所述的改造藍(lán)細(xì)菌，從而使所述改造藍(lán)細(xì)菌生產(chǎn)物質(zhì)。

12.一種改造啟動(dòng)子的制作方法，其中，對(duì)slr1841基因的起始密碼子上游的348堿基的堿基序列即序列號(hào)1、或與序列號(hào)1所示的所述堿基序列有80％以上同源性的堿基序列，通過(i)將該堿基序列中包含的1個(gè)以上堿基替換成其他堿基、(ii)從該堿基序列使1個(gè)以上堿基缺失、和(iii)在該堿基序列插入1個(gè)以上堿基的至少1種方式來制作改造啟動(dòng)子。

技術(shù)總結(jié)
本公開提供能夠靈活地調(diào)節(jié)編碼蛋白質(zhì)的基因的表達(dá)量的改造啟動(dòng)子。本公開的改造啟動(dòng)子是對(duì)slr1841基因的起始密碼子上游的348堿基的堿基序列(序列號(hào)1)、或與序列號(hào)1所示的堿基序列有80％以上同源性的堿基序列，通過選自(i)將該堿基序列中包含的1個(gè)以上堿基替換成其他堿基、(ii)從該堿基序列中使1個(gè)以上堿基缺失、和(iii)對(duì)該堿基序列插入1個(gè)以上堿基中的至少一種方式進(jìn)行改造而得的啟動(dòng)子。

技術(shù)研發(fā)人員：若林萬(wàn)紗也,草間翔子,兒島征司
受保護(hù)的技術(shù)使用者：松下知識(shí)產(chǎn)權(quán)經(jīng)營(yíng)株式會(huì)社
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9