本文描述的技術涉及用于治療神經疾病或紊亂(例如帕金森病)的方法。政府支持本發(fā)明是在履行與美國政府機構退伍軍人事務部(department?of?veteransaffairs)的合作研究與開發(fā)協(xié)議的過程中產生的，美國政府對本發(fā)明享有某些權利。

背景技術：

1、帕金森病(pd)是一種進行性神經退行性疾病，在10至30年內不可避免地發(fā)展為殘疾和死亡。那些通常旨在緩解已知紋狀體多巴胺缺乏的藥物可以為pd的主要運動體征(即靜止性震顫、僵硬、運動遲緩和姿勢不穩(wěn)定)提供實質性的臨床益處。然而，由于多巴胺替代和其他醫(yī)學療法不影響潛在的神經退行性過程，疾病進展仍繼續(xù)。針對抗帕金森病藥物的臨床反應隨著時間的推移而減弱，隨之而來的是各種與藥物有關的并發(fā)癥，包括運動波動、運動障礙和神經精神表現(xiàn)。

2、深部腦刺激(dbs)是針對特定主要運動體征的合理且有效的對癥治療選擇。然而，dbs的使用受到限制，部分原因是手術植入和設備編程的風險和復雜性，以及與硬件相關的并發(fā)癥和維護。最近，duopa已被批準用于具有嚴重運動波動的晚期患者。duopa是一種左旋多巴/卡比多巴腸腸道凝膠，通過連接到外部便攜式泵的胃造口管施用，從而提供穩(wěn)定的劑量。雖然這規(guī)避了顱內手術，但duopa需要保持造口部位，并且攜帶外部組件不便。由于duopa的氧化，這種療法被批準為16hr/天，因此一些患者在夜間治療不足。

3、研究工作指出了許多可能是pd神經退行性過程基礎的潛在機制。氧化應激、線粒體功能障礙和細胞內蛋白質加工異常是常見的假定機制。實驗性治療研究被設計以糾正此類病理生物學紊亂，從而旨在減緩、預防或逆轉神經退行性過程。諸如gdnf的神經營養(yǎng)因子有可能改變pd的病程，而不僅僅是治療特定的臨床特征。

4、帕金森病是一種進行性多中心的神經退行性疾病，其特征是靜止性震顫、僵硬、運動遲緩和姿勢不穩(wěn)定。大多數(shù)pd是一種特發(fā)性疾病，是僅次于阿爾茨海默病的第二大常見神經退行性紊亂?；颊叱霈F(xiàn)情緒癥狀，包括抑郁和焦慮，以及特征性運動特征和運動干擾。pd目前尚無法治愈；治療選擇限于緩解疾病癥狀。

技術實現(xiàn)思路

1、本文提供的一個方面描述了在有需要的受試者中減緩或抑制帕金森病(pd)進展的方法，所述方法包括向所述受試者引入重組腺相關病毒(raav)，所述重組raav包含可操作地連接至啟動子的編碼膠質細胞源性神經營養(yǎng)因子(gdnf)的核酸，其中，所述受試者殼核體積的至少30％被gdnf基因(有時被稱為轉基因)轉導，并且其中，與引入前相比，在引入后的至少6個月，受試者沒有表現(xiàn)出pd相關癥狀的增加。

2、在本文任一方面的一個實施方式中，所述raav通過系統(tǒng)性引入來引入。

3、在本文任一方面的一個實施方式中，所述raav通過局部引入來引入。

4、在本文任一方面的一個實施方式中，局部引入是直接引入至受試者的殼核。

5、在本文任一方面的一個實施方式中，局部引入包括將raav直接引入至受試者的殼核中的每一個。

6、在本文任一方面的一個實施方式中，局部引入與非侵入性成像同時進行。示例性的非侵入性成像技術包括術中磁共振圖像(imri)引導的對流增強遞送(ced)、超聲、計算機斷層掃描(ct)；功能性磁共振成像(fmri)；正電子發(fā)射斷層掃描(pet)；腦電圖(eeg)；腦磁圖(meg)；功能性近紅外光譜(fnirs)；以及它們的組合。

7、在本文任一方面的一個實施方式中，局部引入包括通過術中磁共振圖像(imri)引導的對流增強遞送(ced)將raav載體總遞送劑量的約一半引入至各殼核。

8、在本文任一方面的一個實施方式中，局部引入進一步包括與aav載體基本上同時引入mri造影劑。

9、在本文任一方面的一個實施方式中，mri造影劑是釓特醇。

10、在本文任一方面的一個實施方式中，mri造影劑與raav在同一組合物中引入受試者。在本文任一方面的一個實施方式中，mri造影劑與raav在不同的組合物中引入受試者。

11、在本文任一方面的一個實施方式中，raav通過系統(tǒng)性(例如靜脈內)引入來引入。

12、在本文任一方面的一個實施方式中，通過磁共振成像評估殼核的轉導和/或覆蓋。在本文任一方面的一個實施方式中，受試者殼核體積的至少40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多被gdnf基因轉導。

13、在本文任一方面的一個實施方式中，與引入前相比，在引入后緊接著的至少12個月，受試者沒有表現(xiàn)出pd相關癥狀的顯著增加。

14、在本文任一方面的一個實施方式中，與引入前相比，在引入后緊接著的至少6個月或更長，受試者表現(xiàn)出pd相關癥狀的減輕。

15、在本文任一方面的一個實施方式中，與引入前相比，在引入后緊接著的至少12個月或更長，受試者表現(xiàn)出pd相關癥狀的減輕。

16、在本文任一方面的一個實施方式中，在引入之前，受試者的初始運動障礙病學會-統(tǒng)一帕金森病評定量表(mds-updrs)評分小于32。

17、在本文任一方面的一個實施方式中，減緩或抑制受試者的帕金森病的進展的特征在于，在引入后緊接著的6個月的第二mds-updrs評分基本上不高于初始mds-updss評分。

18、在本文任一方面的一個實施方式中，減緩或抑制受試者的帕金森病的進展的特征在于，在引入后緊接著的約12個月的第二mds-updrs評分基本上不高于初始mds-updrs評分。

19、在本文任一方面的一個實施方式中，在引入之前，受試者的初始mds-updrs評分大于或等于32。

20、在本文任一方面的一個實施方式中，與引入前相比，在引入后緊接著的至少6個月，受試者表現(xiàn)出初始mds-updrs評分的下降。

21、在本文任一方面的一個實施方式中，減緩或抑制受試者的帕金森病的進展的特征在于，在引入后緊接著的約6個月，第二mds-updrs評分比初始mds-updrs評分低至少約20％。

22、在本文任一方面的一個實施方式中，減緩或抑制受試者的帕金森病的進展的特征在于，在引入后緊接著的約12個月，第二mds-updrs評分比初始mds-updrs評分低至少約30％。

23、在本文任一方面的一個實施方式中，所述方法進一步包括，在引入之前確定受試者的初始mds-updrs評分。

24、在本文任一方面的一個實施方式中，所述方法進一步包括，在引入之前接收提供關于受試者的初始mds-updrs評分的測定結果。

25、在本文任一方面的一個實施方式中，減緩或抑制受試者的pd的進展的特征在于，引入后初始mds-updrs評分的降低。

26、在本文任一方面的一個實施方式中，所述降低為在引入后6個月初始mds-updrs評分的至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多降低。

27、在本文任一方面的一個實施方式中，所述降低為在引入后12個月初始mds-updrs評分的至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多降低。

28、在本文任一方面的一個實施方式中，減緩或抑制受試者的pd的進展的特征在于，引入后初始mds-updrs評分穩(wěn)定。

29、在本文任一方面的一個實施方式中，穩(wěn)定的特征在于初始mds-updrs評分的增加或減少不超過10％。在本文任一方面的一個實施方式中，穩(wěn)定發(fā)生至少6個月或更久。

30、在本文任一方面的一個實施方式中，受試者受pd輕度影響。在本文任一方面的一個實施方案中，受pd輕度影響的受試者在引入raav之前的初始mds-updrs評分小于32，并且在所述引入之前不到5年被診斷出患有pd。

31、在本文任一方面的一個實施方式中，所述方法一步包括在引入之前，診斷受試者為受pd輕度影響。

32、在本文任一方面的一個實施方式中，所述方法進一步包括，在引入之前接收診斷受試者為受pd輕度影響的測定結果。

33、在本文任一方面的一個實施方式中，受試者受pd中度影響。在本文任一個方面的一種實施方式中，受pd中度影響的受試者在引入raav之前的初始mds-updrs評分等于或大于32，并且在引入之前不到4年被診斷為pd。

34、在本文任一方面的一個實施方式中，所述方法進一步包括，在引入之前診斷受試者為受pd中度影響。

35、在本文任一方面的一個實施方式中，所述方法進一步包括，在引入之前接收診斷受試者為受pd中度影響的測定結果。

36、在本文任一方面的一個實施方式中，所述啟動子是巨細胞病毒(cmv)啟動子。

37、在本文任一方面的一個實施方式中，所述啟動子是神經系統(tǒng)(ns)或中樞神經系統(tǒng)(cns)特異性啟動子。在本文任一方面的一個實施方式中，ns特異性啟動子選自表1中的ns特異性啟動子。在本文任一方面的一個實施方式中，cns特異性啟動子選自表2中的cns特異性啟動子。

38、在本文任一方面的一個實施方式中，所述核酸包含seq?id?no：1的序列，或與seqid?no：1至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多相同的功能變體。

39、在本文任一方面的一個實施方式中，所述raav是aav1、aav2、aav3、aav3b、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9、aav10、aav11、aav12、rh10或其合理單倍體(rationalhaploid)。在本文任一方面的一個實施方式中，所述raav是aav2。

40、在本文任一方面的一個實施方式中，所述raav表現(xiàn)出腦特異性趨向性。在本文任一方面的一個實施方式中，所述raav包含增加其腦特異性趨向性的修飾。在本文任一方面的一個實施方式中，與未修飾的aav相比，腦特異性趨向性增加了至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多。

41、在本文任一方面的一個實施方式中，以5×1012vg至約1.5×1013vg范圍內的總劑量引入raav。

42、在本文任一方面的一個實施方式中，將總劑量的約一半施用于受試者的各殼核。

43、在本文任一方面的一個實施方式中，以約1μl/min至約30μl/min的流速進行引入。

44、在本文任一方面的一個實施方式中，raav以液體組合物引入，所述液體組合物包含所述raav和藥學上可接受的運載體。

45、在本文任一方面的一個實施方式中，所述液體組合物的raav濃度為約3×1012vg/ml至約4×1012vg/ml。

46、在本文任一方面的一個實施方式中，在引入raav之前，向受試者施用至少一種抗pd治療劑。

47、在本文任一方面的一個實施方式中，在引入raav之前和之后，向受試者施用至少一種抗pd治療劑。在本文任一方面的一個實施方式中，所述至少一種抗pd治療劑選自于由如下所組成的組：左旋多巴、息寧(sinemet)、rytary、達靈復(stalevo)、金剛烷胺、普拉克索、羅替戈汀、羅匹尼羅、阿樸嗎啡、恩他卡朋。

48、在本文任一方面的一個實施方式中，受試者在引入后保持或減少至少一種抗pd治療劑的劑量。在本文任一方面的一個實施方式中，所述至少一種抗pd治療劑的劑量減少至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％或更多。

49、本文提供的另一方面描述了減緩或抑制有需要的受試者中的帕金森病(pd)進展的方法，所述方法包括向受試者的殼核局部引入重組腺相關病毒(raav)載體，所述重組腺相關病毒載體包含與啟動子可操作地連接的編碼膠質細胞源性神經營養(yǎng)因子(gdnf)的核酸，其中，所述受試者的殼核體積的至少30％被gdnf基因轉導。

50、本文提供的另一方面描述了減緩或抑制有需要的受試者中的pd進展的方法，所述方法包括用膠質細胞源性神經營養(yǎng)因子(gdnf)基因轉導大于或等于受試者殼核的約30％體積，其中，在轉導后至少6個月，受試者沒有表現(xiàn)出pd相關癥狀的明顯增加。在本文任一方面的一個實施方式中，通過向受試者的每個殼核施用包含gdnf基因的raav來進行轉導。

51、本文提供的另一方面描述了降低或穩(wěn)定患有帕金森病(pd)的受試者的初始運動障礙病學會-統(tǒng)一帕金森病評定量表部分(mds-updrs)評分的方法，所述方法包括向受試者的殼核施用重組腺相關病毒(raav)，所述重組raav包含與啟動子可操作地連接的編碼膠質細胞源性神經營養(yǎng)因子(gdnf)的核酸，其中，在施用后6個月，受試者的第二mds-updrs評分與施用前受試者的初始mds-updrs評分相比減少或穩(wěn)定。

52、在本文任一方面的一個實施方式中，所述方法進一步包括在施用之前從受試者獲得或接收初始mds-updrs評分的步驟。在本文任一方面的一個實施方式中，與初始mds-updrs評分相比，施用后12個月的第二mds-updrs評分減少了至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多。

53、在本文任一方面的一個實施方式中，穩(wěn)定是初始mds-updrs評分的增加或減少不超過10％。

54、本文提供的另一方面描述了治療受帕金森病(pd)輕度影響的受試者的方法，所述方法包括向受試者的每個殼核施用重組腺相關病毒(raav)，所述重組raav包含與啟動子可操作地連接的編碼膠質細胞源性神經營養(yǎng)因子(gdnf)的核酸，其中，受試者殼核的至少30％被gdnf轉導，并且其中在施用后6個月，所述受試者具有與初始mds-updrs評分相比穩(wěn)定的第二mds-updrs評分。

55、在本文任一方面的一個實施方式中，在施用后12個月，所述受試者具有與施用前的初始mds-updss評分相比穩(wěn)定的mds-updrs評分。

56、本文提供的另一方面描述了治療受帕金森病(pd)中度影響的受試者的方法，所述方法包括向受試者的每個殼核施用重組腺相關病毒(aav)，所述重組aav包含與啟動子可操作地連接的編碼膠質細胞源性神經營養(yǎng)因子(gdnf)的核酸，其中，受試者殼核的至少30％被轉基因轉導，并且其中，在施用后6個月，所述受試者的第二mds-updrs評分比初始mds-updrs評分低至少約20％。在本文任一方面的一個實施方式中，所述降低是與所述初始mds-updrs評分相比至少30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多。

57、本文提供的另一方面描述了減緩或抑制有需要的受試者中的帕金森病(pd)進展的方法，所述方法包括向受試者的每個殼核局部引入重組腺相關病毒(raav)載體，所述重組腺相關病毒載體包含與啟動子可操作地連接的編碼膠質細胞源性神經營養(yǎng)因子(gdnf)的核酸；以及與raav基本上同時向受試者的每個殼核局部引入mri造影劑，其中，受試者殼核體積的至少30％被核酸轉導，并且其中，在引入后緊接著的至少6個月，受試者沒有表現(xiàn)出與引入前相比pd相關癥狀的明顯增加。

58、本文提供的另一方面描述了減緩或抑制有需要的受試者中的帕金森病(pd)進展的方法，所述方法包括向受試者引入重組腺相關病毒(raav)，所述重組raav包含與啟動子可操作地連接的編碼膠質細胞源性神經營養(yǎng)因子(gdnf)的核酸，其中，受試者殼核體積的至少30％被gdnf基因轉導，并且其中，在引入后緊接著的至少6個月，受試者沒有表現(xiàn)出與引入前相比pd相關癥狀的明顯增加。

59、本文提供的另一方面描述了用于減緩或抑制受試者中的帕金森病(pd)進展的組合物，所述組合物包含重組腺相關病毒(raav)以及藥學上可接受的載體，所述重組raav包含含有與啟動子可操作地連接的膠質細胞源性神經營養(yǎng)因子(gdnf)基因的基因組。

60、在本文任一方面的一個實施方式中，所述組合物的raav濃度為3×1012vg/ml至4×1012vg/ml。

61、在本文任一方面的一個實施方式中，所述組合物包含濃度為3.3×1012vg/ml的raav。

62、本文提供的另一方面描述了用于減緩或抑制受試者中的帕金森病(pd)進展的制劑，所述制劑包含濃度為3×1012vg/ml藥學上可接受的載體至4×1012vg/ml藥學上可接受的載體的腺相關病毒(aav)，其中，所述raav包含含有與啟動子可操作地連接的膠質細胞源性神經營養(yǎng)因子(gdnf)基因的基因組。