本公開內(nèi)容提供了特異性結(jié)合表皮生長因子受體變體iii(egfrviii)的抗原結(jié)合劑，諸如抗體或其抗原結(jié)合片段、嵌合抗原受體(car)、雙特異性t-細(xì)胞銜接物(bite)等。本公開內(nèi)容的egfrviii-特異性抗體或其抗原結(jié)合片段、car或bite可以用于例如治療癌癥。本公開內(nèi)容特別涵蓋靶向表達(dá)egfrviii的細(xì)胞的抗體藥物綴合物。

背景技術(shù)：

1、表皮生長因子受體變體iii(egfrviii)在25-64％的多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤(glioblastoma?multiforme，gbm)中擴(kuò)增、高度表達(dá)和存在。應(yīng)當(dāng)指出，不同的檢測方法會產(chǎn)生不一致的結(jié)果，但是已經(jīng)使用多種互補(bǔ)技術(shù)在乳腺癌以及頭和頸鱗狀細(xì)胞癌(hnscc)的子集中檢測到了egfrviii?mrna和蛋白表達(dá)(綜述見gan等人2013)。與在上皮、間質(zhì)和神經(jīng)元起源的組織中表達(dá)并在正常細(xì)胞過程(諸如增殖、分化和發(fā)育)中起主要作用的野生型(wt)表皮生長因子受體(egfr)不同，egfrviii不在正常組織上表達(dá)。

2、egfrviii變體源自egfr基因的外顯子2-7的框架內(nèi)缺失，所述缺失導(dǎo)致編碼細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的267個氨基酸殘基的序列的除去。新形成的剪接連接點編碼甘氨酸殘基，其在野生型人egfr中沒有對應(yīng)物，且因此形成新表位。此外，眾多研究表明，正常組織缺乏egfrviii。因此，egfrviii含有可用于抗體靶向療法的新的腫瘤特異性細(xì)胞表面表位。但是，與人類序列的其余部分相比，egfrviii新表位的免疫原性不是很強(qiáng)，并且迄今為止產(chǎn)生的許多抗體尚未證實特異性地識別egfrviii(綜述見gan等人2013)。

3、在極少數(shù)情況下，已經(jīng)描述了針對egfrviii新表位的單克隆抗體(mab)，包括抗體13.1.2(美國專利號7,736,644)，該抗體也由amgen開發(fā)為抗體藥物綴合物(adc)(amg?595:hamblett?k.j,等人,molecular?cancer?therapeutics,第14(7)卷,第1614-24頁,2015)。美國專利號9,562,102也描述了由abbvie開發(fā)的806抗體(abt-806、abt-414)，其結(jié)合egfrviii以及在過表達(dá)egfr的腫瘤細(xì)胞上的擴(kuò)增的egfr的子集(cleary,jm等人,investnew?drugs,33(3),第671-8頁,2015；reilly,eb.,molecular?cancer?therapeutics,第14(5)卷,第1141-51頁,2015)。盡管在臨床前模型中該抗體已被證實優(yōu)先結(jié)合腫瘤egfr，但該抗體與在人類皮膚中存在的野生型egfr的結(jié)合已被證明是abt-806在某些患者中表現(xiàn)出的皮膚毒性的原因(cleary等人2015)。

4、特異性地靶向在表達(dá)egfr的細(xì)胞中不存在或不可接近的egfrviii的表位的抗體或其抗原結(jié)合片段將有益于癌癥患者的治療。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供了特異性結(jié)合表皮生長因子受體變體iii(egfrviii)的抗原結(jié)合劑，諸如抗體或其抗原結(jié)合片段、嵌合抗原受體(car)、雙特異性t-細(xì)胞銜接物(bispecific?t-cell?engagers，bite)等。

2、如下文更詳細(xì)地描述的，一些抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段可以結(jié)合在癌細(xì)胞(例如，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞)的表面處的egfrviii。在某些實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段不會顯著結(jié)合在癌細(xì)胞(例如，u87mg-egfr?wt)上表達(dá)的egfr。

3、本公開內(nèi)容的抗體或其抗原結(jié)合片段可以被癌細(xì)胞內(nèi)化，且因此可以在其一個方面用于遞送貨物分子。本公開內(nèi)容特別涵蓋綴合至治療部分的抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段。本文描述的抗-egfrviii抗體可以用于抑制表達(dá)egfrviii的腫瘤細(xì)胞的生長。

4、在本公開內(nèi)容的某些實施方案中，所述抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段可以能夠結(jié)合在天然的egfrviii(例如，天然的重組egfrviii)和變性的egfrviii(例如，變性的重組egfrviii)中存在的表位。

5、通常，本公開內(nèi)容的抗體或其抗原結(jié)合片段可以能夠結(jié)合肽，所述肽包含由egfrviii的氨基酸殘基1-76(seq?id?no:119)組成的egfrviii片段。所述抗體或其抗原結(jié)合片段的子集能夠結(jié)合egfrviii的氨基酸殘基1-18(seq?id?no:125)，且抗體的另一個子集能夠結(jié)合egfrviii的氨基酸殘基15-37(seq?id?no:6)。

6、更具體地，本公開內(nèi)容提供了可以能夠結(jié)合在圖4a和/或4b中說明的egfrviii片段中的一種或多種的抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段。

7、本公開內(nèi)容涵蓋的抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段的實施方案包括，例如：

8、-能夠結(jié)合肽的抗體，所述肽包含由egfrviii的氨基酸殘基1-18(seq?id?no:125)組成的egfrviii片段；

9、-能夠結(jié)合肽的抗體，所述肽包含由egfrviii的氨基酸殘基3-18(seq?id?no:129)組成的egfrviii片段；

10、-能夠結(jié)合肽的抗體，所述肽包含由egfrviii的氨基酸殘基15-37(seq?id?no:6)組成的egfrviii片段；或

11、-能夠結(jié)合肽的抗體，所述肽包含由egfrviii的氨基酸殘基19-37(seq?id?no:142)組成的egfrviii片段。

12、本公開內(nèi)容涵蓋的一些特定抗-efgrviii抗體或其抗原結(jié)合片段包括不需要egfrviii的氨基酸殘基1-2的存在即可結(jié)合的那些。特別涵蓋能夠結(jié)合以下中的一種或多種egfrviii片段的抗-efgrviii抗體或其抗原結(jié)合片段：片段19-76(seq?id?no:138)、片段19-62(seq?id?no:139)、片段19-49(seq?id?no:140)、片段19-45(seq?id?no:141)、片段28-45(seq?id?no:143)、片段28-37(seq?id?no:144)、片段19-37(seq?id?no:142)、片段3-45(seq?id?no:127)、片段3-49(seq?id?no:126)、片段3-37(seq?id?no:128)、片段6-49(seq?id?no:130)、片段6-45(seq?id?no:131)、片段6-37(seq?id?no:132)、片段10-49(seqid?no:133)、片段10-45(seq?id?no:134)、片段10-37(seq?id?no:135)、片段15-49(seq?idno:136)、片段15-45(seq?id?no:137)或片段15-37(seq?id?no:6)。

13、本文提供的抗-egfrviii抗體或抗原結(jié)合片段包括能夠結(jié)合肽的抗體或抗原結(jié)合片段，所述肽包含由egfrviii的氨基酸殘基3-37(seq?id?no:128)組成的egfrviii片段，例如，所述抗體為f260-5g6(在本文中也稱作5g6)、f263-1a8(在本文中也稱作1a8)、f263-4b3(在本文中也稱作4b3)、f263-4e11(在本文中也稱作4e11)、f263-5d8(在本文中也稱作5d8)和f265-9c9(在本文中也稱作9c9)抗體。

14、本文提供的其它抗-egfrviii抗體或抗原結(jié)合片段包括能夠結(jié)合肽的抗體或抗原結(jié)合片段，所述肽包含由egfrviii的氨基酸殘基1-33(seq?id?no:124)組成的egfrviii片段。

15、本公開內(nèi)容的示例性抗體或其抗原結(jié)合片段包括特異性結(jié)合egfrviii(seq?idno:5)且能夠結(jié)合egfrviii片段的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述egfrviii片段選自：

16、a.由egfrviii的氨基酸殘基15-37(seq?id?no:6)組成的片段；

17、b.由egfrviii的氨基酸殘基1-76(seq?id?no:119)組成的片段；

18、c.由egfrviii的氨基酸殘基1-62(seq?id?no:120)組成的片段；

19、d.由egfrviii的氨基酸殘基1-49(seq?id?no:121)組成的片段；

20、e.由egfrviii的氨基酸殘基1-45(seq?id?no:122)組成的片段；

21、f.由egfrviii的氨基酸殘基1-37(seq?id?no:123)組成的片段；

22、g.由egfrviii的氨基酸殘基3-49(seq?id?no:126)組成的片段；

23、h.由egfrviii的氨基酸殘基3-45(seq?id?no:127)組成的片段；

24、i.由egfrviii的氨基酸殘基3-37(seq?id?no:128)組成的片段；

25、j.由egfrviii的氨基酸殘基6-49(seq?id?no:130)組成的片段；

26、k.由egfrviii的氨基酸殘基6-45(seq?id?no:131)組成的片段；

27、l.由egfrviii的氨基酸殘基6-37(seq?id?no:132)組成的片段；

28、m.由egfrviii的氨基酸殘基10-49(seq?id?no:133)組成的片段；

29、n.由egfrviii的氨基酸殘基10-45(seq?id?no:134)組成的片段；

30、o.由egfrviii的氨基酸殘基10-37(seq?id?no:135)組成的片段；

31、p.由egfrviii的氨基酸殘基15-49(seq?id?no:136)組成的片段；

32、q.由egfrviii的氨基酸殘基15-45(seq?id?no:137)組成的片段；

33、r.由egfrviii的氨基酸殘基19-76(seq?id?no:138)組成的片段；

34、s.由egfrviii的氨基酸殘基19-62(seq?id?no:139)組成的片段；

35、t.由egfrviii的氨基酸殘基19-49(seq?id?no:140)組成的片段；

36、u.由egfrviii的氨基酸殘基19-45(seq?id?no:141)組成的片段；

37、v.由egfrviii的氨基酸殘基19-37(seq?id?no:142)組成的片段；和

38、w.以上其片段的任意組合，

39、其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段不能結(jié)合包含seq?id?no:149所示的氨基酸序列或由其組成的肽。

40、本公開內(nèi)容的抗體或其抗原結(jié)合片段可以能夠結(jié)合肽，所述肽包含選自seq?idno:145、seq?id?no:146、seq?id?no:147、seq?id?no:148、seq?id?no:150、seq?id?no:151、seq?id?no:152、seq?id?no:153、seq?id?no:155、seq?id?no:156、seq?id?no:157、seq?idno:162、seq?id?no:164、seq?id?no:165和它們的組合的氨基酸序列或由其組成。

41、所述抗體或其抗原結(jié)合片段也可以能夠結(jié)合肽，所述肽包含seq?id?no:160所示的氨基酸序列或由其組成。

42、本公開內(nèi)容的其它示例性實施方案包括特異性結(jié)合egfrviii(seq?idno:5)且能夠結(jié)合egfrviii片段的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述egfrviii片段選自：

43、a.由egfrviii的氨基酸殘基15-37(seq?id?no:6)組成的片段；

44、b.由egfrviii的氨基酸殘基1-76(seq?id?no:119)組成的片段；

45、c.由egfrviii的氨基酸殘基1-49(seq?id?no:121)組成的片段；

46、d.由egfrviii的氨基酸殘基1-37(seq?id?no:123)組成的片段；

47、e.由egfrviii的氨基酸殘基3-37(seq?id?no:128)組成的片段；和

48、f.以上其片段的任意組合，

49、其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段不能結(jié)合包含seq?id?no:149所示的氨基酸序列或由其組成的肽。

50、本公開內(nèi)容的抗體或其抗原結(jié)合片段可以能夠結(jié)合肽，所述肽包含選自seq?idno:145、seq?id?no:146、seq?id?no:147、seq?id?no:151、seq?id?no:152、seq?id?no:153、seq?id?no:155、seq?id?no:156、seq?id?no:157、seq?id?no:158、seq?id?no:160、seq?idno:161、seq?id?no:162、seq?id?no:164、seq?id?no:165和它們的組合的氨基酸序列或由其組成。所述抗體或其抗原結(jié)合片段也可以能夠結(jié)合肽，所述肽包含seq?id?no:154所示的氨基酸序列或由其組成。所述抗體或其抗原結(jié)合片段也可以能夠結(jié)合肽，所述肽包含seqid?no:159所示的氨基酸序列或由其組成。

51、本公開內(nèi)容的其它示例性實施方案包括特異性結(jié)合egfrviii(seq?id?no:5)且能夠結(jié)合egfrviii片段的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述egfrviii片段選自：

52、a.由egfrviii的氨基酸殘基15-37(seq?id?no:6)組成的片段；

53、b.由egfrviii的氨基酸殘基1-76(seq?id?no:119)組成的片段；

54、c.由egfrviii的氨基酸殘基1-62(seq?id?no:120)組成的片段；

55、d.由egfrviii的氨基酸殘基1-49(seq?id?no:121)組成的片段；

56、e.由egfrviii的氨基酸殘基1-45(seq?id?no:122)組成的片段；

57、f.由egfrviii的氨基酸殘基1-37(seq?id?no:123)組成的片段；

58、g.由egfrviii的氨基酸殘基3-49(seq?id?no:126)組成的片段；

59、h.由egfrviii的氨基酸殘基3-45(seq?id?no:127)組成的片段；

60、i.由egfrviii的氨基酸殘基3-37(seq?id?no:128)組成的片段；

61、j.由egfrviii的氨基酸殘基6-49(seq?id?no:130)組成的片段；

62、k.由egfrviii的氨基酸殘基6-45(seq?id?no:131)組成的片段；

63、l.由egfrviii的氨基酸殘基6-37(seq?id?no:132)組成的片段；

64、m.由egfrviii的氨基酸殘基10-49(seq?id?no:133)組成的片段；

65、n.由egfrviii的氨基酸殘基10-45(seq?id?no:134)組成的片段；

66、o.由egfrviii的氨基酸殘基10-37(seq?id?no:135)組成的片段；

67、p.由egfrviii的氨基酸殘基15-49(seq?id?no:136)組成的片段；

68、q.由egfrviii的氨基酸殘基15-45(seq?id?no:137)組成的片段；和

69、r.以上其片段的任意組合。

70、所述抗體或其抗原結(jié)合片段也可以結(jié)合：

71、a.由egfrviii的氨基酸殘基19-49(seq?id?no:140)組成的片段；

72、b.由egfrviii的氨基酸殘基19-37(seq?id?no:142)組成的片段；

73、c.由egfrviii的氨基酸殘基28-45(seq?id?no:143)組成的片段；

74、d.由egfrviii的氨基酸殘基28-37(seq?id?no:144)組成的片段；或

75、以上其片段的任意組合。

76、所述抗體或其抗原結(jié)合片段也可以能夠結(jié)合肽，所述肽包含選自seq?id?no:145、seq?id?no:147、seq?id?no:148、seq?id?no:150、seq?id?no:151、seq?id?no:152、seq?idno:153、seq?id?no:155、seq?id?no:156、seq?id?no:157、seq?id?no:165和它們的組合的氨基酸序列或由其組成。所述抗體或其抗原結(jié)合片段也可以能夠結(jié)合肽，所述肽包含seqid?no:149所示的氨基酸序列或由其組成。

77、還提供了能夠結(jié)合表位的抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段，所述表位包含或涉及所述肽中的氨基酸殘基cys20。這些包括例如結(jié)合egfrviii和/或包含egfrviii片段(該片段由seq?id?no:6所示的氨基酸序列組成)的肽、但不能結(jié)合包含氨基酸序列scvraagadsyemeedgvrkckk(seq?id?no:149)或由其組成的肽的抗-egfrviii抗體或抗原結(jié)合片段。這樣的抗體或抗原結(jié)合片段涵蓋，例如，4b3、5d8和4e11抗體。

78、本公開內(nèi)容還特別涵蓋能夠結(jié)合表位的抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段，所述表位包含或涉及所述肽中的氨基酸殘基cys35。這些包括例如結(jié)合egfrviii和/或包含egfrviii片段(該片段由seq?id?no:6所示的氨基酸序列組成)的肽、但不能結(jié)合包含氨基酸序列scvracgadsyemeedgvrkakk(seq?id?no:163)或由其組成的肽的抗-egfrviii抗體或抗原結(jié)合片段。這樣的抗體或抗原結(jié)合片段涵蓋，例如，4b3、5d8、9c9和4e11抗體。

79、本公開內(nèi)容進(jìn)一步涵蓋能夠結(jié)合肽中的表位的抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段，所述表位包含或涉及所述肽中的氨基酸殘基cys20和cys35。這些包括例如結(jié)合egfrviii和/或包含seq?id?no:6所示的egfrviii片段或由其組成的肽、但不能結(jié)合包含選自scvraagadsyemeedgvrkckk(seq?id?no:149)或scvracgadsyemeedgvrkakk(seq?id?no:163)的氨基酸序列或由其組成的肽的抗-egfrviii抗體或抗原結(jié)合片段。這樣的抗體或抗原結(jié)合片段涵蓋，例如，4b3、5d8和4e11抗體。

80、除了氨基酸殘基cys20和/或cys35以外，抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段所結(jié)合的或參與其結(jié)合的表位可以進(jìn)一步包括glu26、asp30、gly31和/或arg33。所述表位還可以進(jìn)一步包括asp23和/或val32。

81、例如，本公開內(nèi)容涵蓋的抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段包括結(jié)合表位的那些，所述表位包含或涉及：

82、-cys20、glu26、asp30、gly31、arg33和cys35，或

83、-cys20、asp23、glu26、asp30、gly31、val32、arg33和cys35。

84、除了氨基酸殘基cys20和/或cys35以外，抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段所結(jié)合的或參與其結(jié)合的表位可以進(jìn)一步包括arg18和/或gly21。所述表位還可以進(jìn)一步包括glu26和/或gly31。

85、例如，本公開內(nèi)容涵蓋的抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段包括結(jié)合表位的那些，所述表位包含或涉及：

86、-arg18、cys20、gly21和cys35，或

87、-arg18、cys20、gly21、glu26、gly31和cys35。

88、本公開內(nèi)容涵蓋的另外抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段包括結(jié)合表位的那些，所述表位包含或涉及：

89、-cys16、glu26、gly31、val32、arg33、lys34、cys35和lys36，或

90、-cys16、cys20、glu26、asp30、gly31、val32、arg33、lys34、cys35和lys36。

91、本公開內(nèi)容的實施方案特別包括這樣的抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段：它們能夠與4e11抗體或其抗原結(jié)合片段競爭，或能夠與包含4e11抗體的cdr的抗體或其抗原結(jié)合片段競爭。

92、本公開內(nèi)容的其它實施方案包括這樣的抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段：它們能夠與5g6抗體或其抗原結(jié)合片段競爭，或能夠與包含5g6抗體的cdr的抗體或其抗原結(jié)合片段競爭。

93、本公開內(nèi)容的其它實施方案包括這樣的抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段：它們能夠與9c9抗體或其抗原結(jié)合片段競爭，或能夠與包含9c9抗體的cdr的抗體或其抗原結(jié)合片段競爭。

94、本公開內(nèi)容涵蓋的一個特定實施方案涉及包含4e11抗體的cdr的抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段。

95、本公開內(nèi)容提供了包含選自以下的序列的抗-egfrviii抗體或抗原結(jié)合片段：

96、-包含4e11抗體的cdrl1(seq?id?no:38)、cdrl2(seq?id?no:39)、cdrl3(seq?idno:40)、cdrh1(seq?id?no:43)、cdrh2(seq?id?no:44)和cdrh3(seq?id?no:45)的抗體或其片段；

97、-包含5g6抗體的cdrl1(seq?id?no:8)、cdrl2(seq?id?no:9)、cdr?l3(seq?id?no:10)、cdrh1(seq?id?no:13)、cdrh2(seq?id?no:14)和cdrh3(seq?id?no:15)的抗體或其片段；

98、-包含1a8抗體的cdrl1(seq?id?no:18)、cdrl2(seq?id?no:19)、cdrl3(seq?idno:20)、cdrh1(seq?id?no:23)、cdrh2(seq?id?no:24)和cdrh3(seq?id?no:25)的抗體或其片段；

99、-包含4b3抗體的cdrl1(seq?id?no:28)、cdrl2(seq?id?no:29)、cdrl3(seq?idno:30)、cdrh1(seq?id?no:33)、cdrh2(seq?id?no:34)和cdrh3(seq?id?no:35)的抗體或其片段；

100、-包含5d8抗體的cdrl1(seq?id?no:48)、cdrl2(seq?id?no:49)、cdrl3(seq?idno:50)、cdrh1(seq?id?no:53)、cdrh2(seq?id?no:54)和cdrh3(seq?id?no:55)的抗體或其片段；

101、-包含9c9抗體的cdrl1(seq?id?no:58)、cdrl2(seq?id?no:59)、cdrl3(seq?idno:60)、cdrh1(seq?id?no:63)、cdrh2(seq?id?no:64)、cdrh3(seq?id?no:65)的抗體或其片段；和

102、-包含f266-11b1(在本文中被稱作11b1)、f266-11c8(在本文中被稱作11c8)、f266-11h5(在本文中被稱作11h5)和/或f266-11h3(在本文中被稱作11h3)抗體的cdrl1(seq?id?no:68或73)、cdrl2(seq?id?no:69或74)、cdrl3(seq?id?no:70或75)、cdrh1(seqid?no:78)、cdrh2(seq?id?no:79)和cdrh3(seq?id?no:80)的抗體或其片段。

103、本公開內(nèi)容涵蓋的實施方案涉及包含5g6抗體的cdr的抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段。

104、本公開內(nèi)容涵蓋的另一個實施方案涉及包含1a8抗體的cdr的抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段。

105、本公開內(nèi)容涵蓋的另一個實施方案涉及包含4b3抗體的cdr的抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段。

106、本公開內(nèi)容涵蓋的另一個實施方案涉及包含5d8抗體的cdr的抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段。

107、本公開內(nèi)容涵蓋的另一個實施方案涉及包含9c9抗體的cdr的抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段。

108、本公開內(nèi)容涵蓋的另一個實施方案涉及包含11b1或11c8抗體的cdr的抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段。

109、本公開內(nèi)容提供了選自以下的抗-egfrviii抗體或抗原結(jié)合片段：

110、-包含由cdrl1(seq?id?no:8)、cdrl2(seq?id?no:9)、cdrl3(seq?id?no:10)、cdrh1(seq?id?no:13)、cdrh2(seq?id?no:14)、cdrh3(seq?id?no:15)組成的cdr序列的抗體或其抗原結(jié)合片段；

111、-包含由cdrl1(seq?id?no:18)、cdrl2(seq?id?no:19)、cdrl3(seq?id?no:20)、cdrh1(seq?id?no:23)、cdrh2(seq?id?no:24)、cdrh3(seq?id?no:25)組成的cdr序列的抗體或其抗原結(jié)合片段；

112、-包含由cdrl1(seq?id?no:28)、cdrl2(seq?id?no:29)、cdrl3(seq?id?no:30)、cdrh1(seq?id?no:33)、cdrh2(seq?id?no:34)、cdrh3(seq?id?no:35)組成的cdr序列的抗體或其抗原結(jié)合片段；

113、-包含由cdrl1(seq?id?no:38)、cdrl2(seq?id?no:39)、cdrl3(seq?id?no:40)、cdrh1(seq?id?no:43)、cdrh2(seq?id?no:44)、cdrh3(seq?id?no:45)組成的cdr序列的抗體或其抗原結(jié)合片段；

114、-包含由cdrl1(seq?id?no:48)、cdrl2(seq?id?no:49)、cdrl3(seq?id?no:50)、cdrh1(seq?id?no:53)、cdrh2(seq?id?no:54)、cdrh3(seq?id?no:55)組成的cdr序列的抗體或其抗原結(jié)合片段；

115、-包含由cdrl1(seq?id?no:58)、cdrl2(seq?id?no:59)、cdrl3(seq?id?no:60)、cdrh1(seq?id?no:63)、cdrh2(seq?id?no:64)、cdrh3(seq?id?no:65)組成的cdr序列的抗體或其抗原結(jié)合片段；

116、-包含由cdrl1(seq?id?no:68)、cdrl2(seq?id?no:69)、cdrl3(seq?id?no:70)、cdrh1(seq?id?no:78)、cdrh2(seq?id?no:79)、cdrh3(seq?id?no:80)組成的cdr序列的抗體或其片段；和

117、-包含由cdrl1(seq?id?no:73)、cdrl2(seq?id?no:74)、cdrl3(seq?id?no:75)、cdrh1(seq?id?no:78)、cdrh2(seq?id?no:79)、cdrh3(seq?id?no:80)組成的cdr序列的抗體或其抗原結(jié)合片段。

118、在某些實施方案中，本公開內(nèi)容提供了抗原結(jié)合劑，諸如抗體或其抗原結(jié)合片段、car、bite等，它們特異性結(jié)合egfrviii且可以包含例如：

119、a.輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含具有seq?id?no:8所示的氨基酸序列的cdrl1、具有seq?id?no:9所示的氨基酸序列的cdrl2和具有seq?id?no:10所示的氨基酸序列的cdrl3；所述重鏈可變區(qū)可以包含具有seq?id?no:13所示的氨基酸序列的cdrh1、具有seq?id?no:14所示的氨基酸序列的cdrh2和具有seq?id?no:15所示的氨基酸序列的cdrh3；

120、b.輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含具有seq?id?no:18所示的氨基酸序列的cdrl1、具有seq?id?no:19所示的氨基酸序列的cdrl2和具有seq?id?no:20所示的氨基酸序列的cdrl3；所述重鏈可變區(qū)可以包含具有seq?id?no:23所示的氨基酸序列的cdrh1、具有seq?id?no:24所示的氨基酸序列的cdrh2和具有seq?id?no:25所示的氨基酸序列的cdrh3；

121、c.輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含具有seq?id?no:28所示的氨基酸序列的cdrl1、具有seq?id?no:29所示的氨基酸序列的cdrl2和具有seq?id?no:30所示的氨基酸序列的cdrl3；所述重鏈可變區(qū)可以包含具有seq?id?no:33所示的氨基酸序列的cdrh1、具有seq?id?no:34所示的氨基酸序列的cdrh2和具有seq?id?no:35所示的氨基酸序列的cdrh3；

122、d.輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含具有seq?id?no:38所示的氨基酸序列的cdrl1、具有seq?id?no:39所示的氨基酸序列的cdrl2和具有seq?id?no:40所示的氨基酸序列的cdrl3；所述重鏈可變區(qū)可以包含具有seq?id?no:43所示的氨基酸序列的cdrh1、具有seq?id?no:44所示的氨基酸序列的cdrh2和具有seq?id?no:45所示的氨基酸序列的cdrh3；

123、e.輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含具有seq?id?no:48所示的氨基酸序列的cdrl1、具有seq?id?no:49所示的氨基酸序列的cdrl2和具有seq?id?no:50所示的氨基酸序列的cdrl3；所述重鏈可變區(qū)可以包含具有seq?id?no:53所示的氨基酸序列的cdrh1、具有seq?id?no:54所示的氨基酸序列的cdrh2和具有seq?id?no:55所示的氨基酸序列的cdrh3；

124、f.輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含具有seq?id?no:58所示的氨基酸序列的cdrl1、具有seq?id?no:59所示的氨基酸序列的cdrl2和具有seq?id?no:60所示的氨基酸序列的cdrl3；所述重鏈可變區(qū)可以包含具有seq?id?no:63所示的氨基酸序列的cdrh1、具有seq?id?no:64所示的氨基酸序列的cdrh2和具有seq?id?no:65所示的氨基酸序列的cdrh3；

125、g.輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含具有seq?id?no:68所示的氨基酸序列的cdrl1、具有seq?id?no:69所示的氨基酸序列的cdrl2和具有seq?id?no:70所示的氨基酸序列的cdrl3；所述重鏈可變區(qū)可以包含具有seq?id?no:78所示的氨基酸序列的cdrh1、具有seq?id?no:79所示的氨基酸序列的cdrh2和具有seq?id?no:80所示的氨基酸序列的cdrh3；或

126、h.輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含具有seq?id?no:73所示的氨基酸序列的cdrl1、具有seq?id?no:74所示的氨基酸序列的cdrl2和具有seq?id?no:75所示的氨基酸序列的cdrl3；所述重鏈可變區(qū)可以包含具有seq?id?no:78所示的氨基酸序列的cdrh1、具有seq?id?no:79所示的氨基酸序列的cdrh2和具有seq?id?no:80所示的氨基酸序列的cdrh3。

127、本公開內(nèi)容在另外的實施方案中提供了特異性結(jié)合egfrviii的抗原結(jié)合劑，諸如抗體或其抗原結(jié)合片段、car、bite等，它們可以包含：

128、a.輕鏈可變區(qū)和/或重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:118所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:118基本上相同的氨基酸序列；所述重鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:116所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?idno:116基本上相同的氨基酸序列；

129、b.輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:115所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:115基本上相同的氨基酸序列；所述重鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:116所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:116基本上相同的氨基酸序列；或

130、c.輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:118所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:118基本上相同的氨基酸序列；所述重鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:62所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:62基本上相同的氨基酸序列。

131、在其一個方面，具有與seq?id?no:115或seq?id?no:118所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或基本上相同的輕鏈的抗原結(jié)合劑可以具有分別與seq?id?no:115或seq?idno:118的cdr相同的cdr。

132、在其一個方面，具有與seq?id?no:62或seq?id?no:116所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或基本上相同的重鏈的抗原結(jié)合劑可以具有分別與seq?id?no:62或seq?idno:116的cdr相同的cdr。

133、本公開內(nèi)容在其它實施方案中提供了特異性結(jié)合egfrviii的抗原結(jié)合劑，諸如抗體或其抗原結(jié)合片段、car、bite等，它們可以包含：

134、a.輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:7所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:7基本上相同的氨基酸序列；所述重鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:12所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:12基本上相同的氨基酸序列；

135、b.輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:17所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:17基本上相同的氨基酸序列；所述重鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:22所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:22基本上相同的氨基酸序列；

136、c.輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:27所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:27基本上相同的氨基酸序列；所述重鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:32所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:32基本上相同的氨基酸序列；

137、d.輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:37所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:37基本上相同的氨基酸序列；所述重鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:42所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:42基本上相同的氨基酸序列；

138、e.輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:47所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:47基本上相同的氨基酸序列；所述重鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:52所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:52基本上相同的氨基酸序列；

139、f.輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:57所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:57基本上相同的氨基酸序列；所述重鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:62所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:62基本上相同的氨基酸序列；

140、g.輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:67所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:67基本上相同的氨基酸序列；所述重鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:77所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:77基本上相同、與seq?id?no:92所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:92基本上相同、或與seq?id?no:102所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:102基本上相同的氨基酸序列；或

141、h.輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:72所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:72基本上相同的氨基酸序列；所述重鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:77所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:77基本上相同、或與seq?id?no:92所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:92基本上相同的氨基酸序列。

142、可以包含與給定抗體的相應(yīng)部分具有至少80％同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)、輕鏈、重鏈可變區(qū)或重鏈可以具有與該抗體相同的cdr。在本公開內(nèi)容的一個實施方案中，在本公開內(nèi)容中提供的抗體和抗原結(jié)合片段的vl和vh序列可以包含與本文提供的vl和vh序列基本上相同的序列，或可以包含具有至少80％、至少90％或至少95％序列同一性的序列，其中序列變異優(yōu)選地在提供的vl和vh序列的cdr之外。

143、此外，本公開內(nèi)容特別提供了抗原結(jié)合劑，諸如抗體或其抗原結(jié)合片段、car、bite等，它們特異性結(jié)合egfrviii且它們可以包含：

144、a.輕鏈，其可以包含與seq?id?no:108所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:108基本上相同的氨基酸序列；和重鏈，其可以包含與seq?id?no:107所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:107基本上相同的氨基酸序列，或

145、b.輕鏈，其可以包含與seq?id?no:110所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:110基本上相同的氨基酸序列；和重鏈，其可以包含與seq?id?no:109所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或與seq?id?no:109基本上相同的氨基酸序列。

146、本公開內(nèi)容特別提供了抗原結(jié)合劑，諸如抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段、car、bite等，它們可以包含：

147、a.具有seq?id?no:38所示的氨基酸序列的cdrl1、具有seq?id?no:39所示的氨基酸序列的cdrl2和具有seq?id?no:40所示的氨基酸序列的cdrl3、具有seq?id?no:43所示的氨基酸序列的cdrh1、具有seq?id?no:44所示的氨基酸序列的cdrh2和具有seq?id?no:45所示的氨基酸序列的cdrh3；

148、b.輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:37所示的氨基酸序列具有至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性、至少95％同一性或相同的氨基酸序列；所述重鏈可變區(qū)可以包含與seq?id?no:42所示的氨基酸序列具有至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性、至少95％同一性或相同的氨基酸序列；或

149、c.輕鏈，其可以包含與seq?id?no:108所示的氨基酸序列具有至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性、至少95％同一性或相同的氨基酸序列；和重鏈，其可以包含與seq?id?no:107所示的氨基酸序列具有至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性、至少95％同一性或相同的氨基酸序列。

150、根據(jù)本公開內(nèi)容，項目b或c的抗體或其抗原結(jié)合片段可以具有與seq?id?no:38、39、40、43、44和45所示的cdr相同或基本上相同的cdr。

151、根據(jù)本公開內(nèi)容，所述抗體或其抗原結(jié)合片段可以具有，例如，小于100nm的親和力，例如，50nm或更小、20nm或更小、10nm或更小、5nm或更小等的親和力。

152、本公開內(nèi)容的示例性實施方案包括可以包含人igg恒定區(qū)的抗體或其抗原結(jié)合片段。本公開內(nèi)容的抗體或抗原結(jié)合片段可以包含，例如、但不限于，人igg1恒定區(qū)或人igg2恒定區(qū)。

153、在一個示例性實施方案中，本文中公開的抗原結(jié)合劑可以包含人源化的框架區(qū)。

154、根據(jù)本公開內(nèi)容，所述抗體或其抗原結(jié)合片段可以是單克隆抗體、多克隆抗體、人源化抗體、嵌合抗體、人抗體、單鏈抗體或多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)。

155、本公開內(nèi)容的雙特異性抗體或其抗原結(jié)合片段包括可以包含特異性結(jié)合第一人egfrviii表位的第一臂和特異性結(jié)合第二(不重疊的)人egfrviii表位的第二臂的那些(例如雙互補(bǔ)位抗體)。

156、本公開內(nèi)容的雙特異性抗體或其抗原結(jié)合片段的另外實施方案包括可以包含特異性結(jié)合第一人egfrviii表位的第一臂和特異性結(jié)合另一種抗原的第二臂的那些。

157、本公開內(nèi)容的雙特異性抗體或其抗原結(jié)合片段包括雙特異性免疫細(xì)胞銜接物，諸如包含特異性結(jié)合人egfrviii的第一臂和特異性結(jié)合cd3的第二臂的那些。

158、根據(jù)本公開內(nèi)容，所述抗原結(jié)合片段包含，例如，scfv、fab、fab'或(fab')2。

159、在另一個方面，本公開內(nèi)容提供了可以連接至貨物分子的抗-egfrviii抗體或其抗原結(jié)合片段。

160、根據(jù)本公開內(nèi)容，所述貨物分子可以包含治療部分，例如，細(xì)胞毒性劑、細(xì)胞抑制劑、抗癌劑或放療劑。在本公開內(nèi)容的特定實施方案中，所述抗體藥物綴合物可以包含細(xì)胞毒性劑。本公開內(nèi)容的另一個特定實施方案涉及包含放療劑的抗體藥物綴合物。

161、根據(jù)本公開內(nèi)容，所述貨物分子可以包含可檢測部分。

162、本公開內(nèi)容的抗體或其抗原結(jié)合片段可以以藥物組合物的形式提供。所述藥物組合物可以包含，例如，藥學(xué)上可接受的運(yùn)載劑、稀釋劑或賦形劑。

163、本公開內(nèi)容另外提供了編碼本文中公開的抗體或其抗原結(jié)合片段的輕鏈可變區(qū)和/或重鏈可變區(qū)的核酸分子。

164、本公開內(nèi)容的核酸分子的示例性實施方案包括：

165、a.核酸分子，其可以包含與seq?id?no:11所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列；和/或核酸分子，其可以包含與seq?id?no:16所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列或其編碼與seq?id?no:7和/或seq?id?no:12的氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列；

166、b.核酸分子，其可以包含與seq?id?no:21所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列；和/或核酸分子，其可以包含與seq?id?no:26所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列或其編碼與seq?id?no:17和/或seq?id?no:22的氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列；

167、c.核酸分子，其可以包含與seq?id?no:31所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列；和/或核酸分子，其可以包含與seq?id?no:36所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列或其編碼與seq?id?no:27和/或seq?id?no:32的氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列；

168、d.核酸分子，其可以包含與seq?id?no:41所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列；和/或核酸分子，其可以包含與seq?id?no:46所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列或其編碼與seq?id?no:37和/或seq?id?no:42的序列基本上相同的氨基酸序列；

169、e.核酸分子，其可以包含與seq?id?no:51所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列；和/或核酸分子，其可以包含與seq?id?no:56所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列或其編碼與seq?id?no:47和/或seq?id?no:52的序列基本上相同的氨基酸序列；

170、f.核酸分子，其可以包含與seq?id?no:61所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列；和/或核酸分子，其可以包含與seq?id?no:66所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列或其編碼與seq?id?no:57和/或seq?id?no:62的序列基本上相同的氨基酸序列；

171、g.核酸分子，其可以包含與seq?id?no:71所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列；和/或核酸分子，其可以包含與seq?id?no:81所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列或其編碼與seq?id?no:67和/或seq?id?no:77的序列基本上相同的氨基酸序列；

172、h.核酸分子，其可以包含與seq?id?no:76所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列；和/或核酸分子，其可以包含與seq?id?no:81所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列或其編碼與seq?id?no:72和/或seq?id?no:77的序列基本上相同的氨基酸序列；

173、i.核酸分子，其可以包含與seq?id?no:86所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列；和/或核酸分子，其可以包含與seq?id?no:96所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列或其編碼與seq?id?no:82和/或seq?id?no:92的序列基本上相同的氨基酸序列；

174、j.核酸分子，其可以包含與seq?id?no:91所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列；和/或核酸分子，其可以包含與seq?id?no:96所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列或其編碼與seq?id?no:87和/或seq?id?no:92的序列基本上相同的氨基酸序列；或

175、k.核酸分子，其可以包含與seq?id?no:101所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列；和/或核酸分子，其可以包含與seq?id?no:106所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列或其編碼與seq?id?no:97和/或seq?id?no:102的序列基本上相同的氨基酸序列。

176、在另一個方面，本公開內(nèi)容提供了一種試劑盒，其包含至少一種本文中公開的抗體或其抗原結(jié)合片段。

177、本公開內(nèi)容的另外方面涉及載體或載體集合，其可以包含編碼本文中公開的抗體或抗原結(jié)合片段的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的核酸。編碼輕鏈可變區(qū)或輕鏈和重鏈可變區(qū)或重鏈的核酸可以提供在同一載體或單獨的載體上。

178、本公開內(nèi)容的其它方面涉及分離的細(xì)胞，其包含本文描述的載體或載體集合。所述分離的細(xì)胞可以能夠表達(dá)、組裝和/或分泌所述抗體或其抗原結(jié)合片段。

179、本公開內(nèi)容的其它方面涉及包含第一瓶和第二瓶的試劑盒，所述第一瓶包含編碼本公開內(nèi)容的抗體或其抗原結(jié)合片段的輕鏈的核酸或載體，所述第二瓶包含編碼所述抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈的核酸或載體。

180、本公開內(nèi)容的另外方面涉及治療癌癥的方法，所述癌癥包含表達(dá)egfrviii的細(xì)胞(例如，腫瘤細(xì)胞)。所述方法可以包括給需要的受試者施用本文描述的抗體或其抗原結(jié)合片段。在治療方法中特別涵蓋綴合至治療部分的抗體或抗原結(jié)合片段(adc)。

181、本公開內(nèi)容另外涉及本文描述的抗體或其抗原結(jié)合片段在癌癥治療中的用途。

182、本公開內(nèi)容進(jìn)一步涉及本文描述的抗體或其抗原結(jié)合片段在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。

183、根據(jù)本公開內(nèi)容，所述抗體或其抗原結(jié)合片段可以與化療劑聯(lián)合使用。

184、根據(jù)本公開內(nèi)容，有需要的受試者患有或疑似患有多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤。

185、進(jìn)一步根據(jù)本公開內(nèi)容，有需要的受試者患有或疑似患有癌。

186、本公開內(nèi)容的其它方面涉及檢測egfrviii的方法。所述方法可以包括使包含或疑似包含egfrviii的樣品與本文描述的抗體或抗原結(jié)合片段接觸。

187、本公開內(nèi)容的另外方面涉及制備本公開內(nèi)容的抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，其包括培養(yǎng)包含編碼抗體或抗原結(jié)合片段的核酸或載體的細(xì)胞，從而生產(chǎn)所述抗體或其抗原結(jié)合片段。因而可以分離和/或純化所述抗體或其抗原結(jié)合片段。

188、所述方法可以進(jìn)一步包括將所述抗體或其抗原結(jié)合片段與貨物分子(例如，治療部分)綴合。

189、本公開內(nèi)容的其它范圍、適用性和優(yōu)點將從下文給出的非限制性詳細(xì)描述顯而易見。但是，應(yīng)當(dāng)理解，該詳細(xì)描述雖然指示本公開內(nèi)容的示例性實施方案，但是參考附圖僅作為示例給出。