本發(fā)明涉及噬菌體，尤其涉及一種kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體及其篩選方法、噬菌體組合物及應(yīng)用與藥物。

背景技術(shù)：

1、鮑曼不動(dòng)桿菌(acinetobacter?baumannii)因其在醫(yī)院環(huán)境中的高發(fā)病率和強(qiáng)大的傳播能力，并且對(duì)多種抗生素表現(xiàn)出耐藥性(對(duì)常規(guī)監(jiān)測(cè)抗生素耐藥率高達(dá)70％)，已成為全球公共衛(wèi)生的一大挑戰(zhàn)。特別是在重癥監(jiān)護(hù)病房(intensive?care?unit，icu)中，由于患者普遍存在基礎(chǔ)疾病、免疫力低下等，加之各種有創(chuàng)操作的頻繁進(jìn)行，使得鮑曼不動(dòng)桿菌的感染風(fēng)險(xiǎn)增加，一旦發(fā)生感染，可能會(huì)引起嚴(yán)重的醫(yī)院獲得性肺炎、血流感染等，治療難度大，病死率高。而其中醫(yī)院獲得性鮑曼不動(dòng)桿菌肺炎是醫(yī)生面臨的最大挑戰(zhàn)之一，由于其嚴(yán)重的抗菌藥物耐藥性，使治療選擇非常有限，常常預(yù)后不佳。由多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌(multidrug-resistant?acinetobacter?baumannii，mdrab)引起的呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎(ventilator-associated?pneumonia，vap)與敏感菌株相比，呼吸機(jī)成功脫機(jī)率顯著降低。現(xiàn)階段，對(duì)耐碳青霉烯類的鮑曼不動(dòng)桿菌(carbapenem-resistant?acinetobacterbaumannii，crab)引發(fā)的感染主要使用抗生素治療，在抗菌藥物耐藥治療指南中crab感染推薦選擇多粘菌素和替加環(huán)素單用或者兩者聯(lián)用。盡管抗生素在治療carb引起的肺炎中表現(xiàn)出一定積極作用，但依舊有耐藥性風(fēng)險(xiǎn)(crab能夠快速地出現(xiàn)對(duì)多粘菌素的耐藥性)，同時(shí)多粘菌素有嚴(yán)重的腎毒性和神經(jīng)毒性，而替加環(huán)素在肺中難以達(dá)到有效濃度，導(dǎo)致這兩種藥物在臨床的使用受限。另外，在嚴(yán)重的抗生素耐藥性危機(jī)下，新型抗生素研發(fā)的資本投入和管線數(shù)量難以滿足臨床日益增長(zhǎng)的需求。因此，由mdrab引發(fā)的感染的臨床可用抗生素少，侵害性強(qiáng)，疾病負(fù)擔(dān)性大，臨床上迫切需要一種新的方法來(lái)治療mdrab引發(fā)的肺炎。

2、噬菌體是一類能感染并殺死細(xì)菌的病毒，利用這一特性，臨床上應(yīng)用噬菌體來(lái)治療細(xì)菌感染稱為噬菌體療法(phage?therapy)。噬菌體療法在臨床實(shí)踐中一般會(huì)使用由幾種噬菌體混合組成噬菌體雞尾酒(cocktail)制劑，這樣可以防止細(xì)菌耐噬菌體現(xiàn)象的產(chǎn)生，從而增加清除細(xì)菌感染的成功率。更為重要的是，經(jīng)過(guò)篩選的固定噬菌體組合的噬菌體雞尾酒制劑可以大范圍的裂解特定細(xì)菌的臨床常見(jiàn)流行毒株，具有被開(kāi)發(fā)成藥物的潛力。

3、鮑曼不動(dòng)桿菌表面具有較厚的莢膜多糖(capsular?polysaccharides，cps)，其產(chǎn)生的cps具有高度的多樣性。這些cps分子作為鮑曼不動(dòng)桿菌表面的主要抗原，對(duì)噬菌體的宿主識(shí)別和噬菌體的感染過(guò)程起著關(guān)鍵作用。鮑曼不動(dòng)桿菌的cps結(jié)構(gòu)由其染色體上的莢膜基因位點(diǎn)k?locus(kl型)所決定，通過(guò)基因組序列分析，已鑒定出的kl型多達(dá)237種。其中kl2、kl3和kl7型鮑曼不動(dòng)桿菌等尤為常見(jiàn)，并且與多重耐藥性相關(guān)。特別是kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌，相較于其他莢膜分型，表現(xiàn)出更高的耐藥性水平，導(dǎo)致更嚴(yán)重的臨床癥狀，并與患者死亡風(fēng)險(xiǎn)的增加顯著相關(guān)，對(duì)公共衛(wèi)生構(gòu)成了重大威脅。鑒于此，開(kāi)發(fā)一種專門針對(duì)kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌的噬菌體顯得尤為迫切且具有重要的實(shí)際應(yīng)用前景。

4、因此，現(xiàn)有技術(shù)還有待于改進(jìn)和發(fā)展。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、基于上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體及其篩選方法、噬菌體組合物及應(yīng)用與藥物，旨在用于殺死kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌，降低kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌的危害。

2、本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

3、本發(fā)明的第一方面，提供一種kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體，其中，所述kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體命名為friunavirus?ab_szl2，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctcc?no：m?20241522；或，所述kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體命名為obolenskvirus?ab_szl3，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctcc?no：m20241523。

4、本發(fā)明的第二方面，提供一種本發(fā)明如上所述的kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體的篩選方法，其中，包括如下步驟：

5、將宿主菌菌液和培養(yǎng)基倒在平板上，然后將kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體點(diǎn)在平板上，培養(yǎng)過(guò)夜，得到第一輪噬菌體產(chǎn)物；

6、將所述第一輪噬菌體產(chǎn)物與宿主菌進(jìn)行培養(yǎng)，得到噬菌體抗性菌株；

7、使用噬菌體庫(kù)對(duì)所述噬菌體抗性菌株進(jìn)行第二輪篩選，得到克服噬菌體抗性的kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體。

8、本發(fā)明的第三方面，提供一種噬菌體組合物，其中，所述噬菌體組合物包括至少一種本發(fā)明如上所述的kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體。

9、本發(fā)明的第四方面，提供一種藥物，其中，所述藥物的活性成分包括本發(fā)明如上所述的kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體和/或本發(fā)明如上所述的噬菌體組合物。

10、可選地，所述藥物還包括藥學(xué)上可接受的載體。

11、可選地，所述藥學(xué)上可接受的載體包括賦形劑、助流劑、稀釋劑、防腐劑、著色劑、矯味劑、潤(rùn)濕劑、助懸劑、穩(wěn)定劑、等滲劑、溶劑、乳化劑中的至少一種。

12、可選地，所述藥物還包括抗生素；和/或，

13、所述藥物的劑型選自溶液劑、氣溶膠、丸劑、片劑、膠囊劑、散劑、錠劑、糊劑中的一種。

14、本發(fā)明的第五方面，提供一種本發(fā)明如上所述的kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體和/或本發(fā)明如上所述的噬菌體組合物在處理生物圈中kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體中的應(yīng)用，所述應(yīng)用為非疾病治療目的。

15、可選地，所述應(yīng)用的方法包括步驟：

16、從生物圈中取樣，獲得待測(cè)樣品；

17、通過(guò)pcr檢測(cè)待測(cè)樣品中是否存在預(yù)設(shè)含量的kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌；

18、若存在預(yù)設(shè)含量的kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌，則將權(quán)利要求1所述的kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體和/或權(quán)利要求2所述的噬菌體組合物施加到所述生物圈中以清除所述kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌。

19、可選地，所述pcr檢測(cè)采用的引物對(duì)包括第一引物對(duì)和第二引物對(duì)；

20、所述第一引物對(duì)為：

21、正向：ttgctatagtcccaacgtttatattcccatc；

22、反向：cctgtccctacatattccatatatattgtagagtc；

23、所述第二引物對(duì)為：

24、正向：tgattgctaaaaaagatcttgggaaagtgg；

25、反向：acaaaggcaaccctgctagc。

26、有益效果：本發(fā)明提供的kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體能夠精準(zhǔn)靶向kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌，并具有高效的殺菌效果，從而降低kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌的危害，有效解決了kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌的抗生素耐藥性的問(wèn)題。

技術(shù)特征：

1.一種kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體，其特征在于，所述kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體命名為friunavirus?ab_szl2，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctcc?no：m20241522；或，所述kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體命名為obolenskvirus?ab_szl3，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctcc?no：m?20241523。

2.一種權(quán)利要求1所述的kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體的篩選方法，其特征在于，包括如下步驟：

3.一種噬菌體組合物，其特征在于，所述噬菌體組合物包括至少一種權(quán)利要求1所述的kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體。

4.一種藥物，其特征在于，所述藥物的活性成分包括權(quán)利要求1所述的kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體和/或權(quán)利要求3所述的噬菌體組合物。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物，其特征在于，所述藥物還包括藥學(xué)上可接受的載體。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物，其特征在于，所述藥學(xué)上可接受的載體包括賦形劑、助流劑、稀釋劑、防腐劑、著色劑、矯味劑、潤(rùn)濕劑、助懸劑、穩(wěn)定劑、等滲劑、溶劑、乳化劑中的至少一種。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物，其特征在于，所述藥物還包括抗生素；

8.一種權(quán)利要求1所述的kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體和/或權(quán)利要求3所述的噬菌體組合物在處理生物圈中kl2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體中的應(yīng)用，所述應(yīng)用為非疾病治療目的。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特在于，所述應(yīng)用的方法包括步驟：

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特在于，所述pcr檢測(cè)采用的引物對(duì)包括第一引物對(duì)和第二引物對(duì)；

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)KL2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體及其篩選方法、噬菌體組合物及應(yīng)用與藥物，涉及噬菌體技術(shù)領(lǐng)域。所述KL2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體命名為Friunavirus?AB_SZL2，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC?NO：M20241522；或，所述KL2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體命名為Obolenskvirus?AB_SZL3，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC?NO：M?20241523。本發(fā)明提供的KL2型鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體能夠精準(zhǔn)靶向KL2型鮑曼不動(dòng)桿菌，并具有高效的殺菌效果，從而降低KL2型鮑曼不動(dòng)桿菌的危害，有效解決了KL2型鮑曼不動(dòng)桿菌的抗生素耐藥性的問(wèn)題。

技術(shù)研發(fā)人員：馬迎飛,譚新,劉自強(qiáng)
受保護(hù)的技術(shù)使用者：深圳先進(jìn)技術(shù)研究院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/23