本發(fā)明屬于培養(yǎng)液，具體涉及一種間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液及其制備方法與在制備具有抗衰老作用的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal?stem?cells,?mscs）是一類多能性的成體干細(xì)胞，具有自我更新能力和分化為多種中胚層來源細(xì)胞的潛能，如骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等。它們在再生醫(yī)學(xué)和細(xì)胞治療領(lǐng)域展現(xiàn)出了巨大的應(yīng)用潛力。以下是對間充質(zhì)干細(xì)胞的詳細(xì)概述：

2、來源與特性來源廣泛：mscs最初從骨髓中被發(fā)現(xiàn)，但后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)它們也存在于多種組織中，包括脂肪組織（脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，adscs）、臍帶血、臍帶組織、胎盤、牙髓等。這些來源使得mscs相對容易獲取且減少了倫理爭議。自我更新與分化：mscs可以在體外培養(yǎng)時(shí)不斷增殖，同時(shí)保持分化為多種細(xì)胞類型的能力。免疫調(diào)節(jié)：mscs具有免疫調(diào)節(jié)功能，能夠抑制免疫反應(yīng)，減少炎癥，這一特性使得它們在治療自身免疫疾病和移植排斥反應(yīng)中具有潛在應(yīng)用。旁分泌作用：mscs通過分泌多種細(xì)胞因子、生長因子和趨化因子，影響周圍細(xì)胞的功能，促進(jìn)組織修復(fù)和再生。臨床應(yīng)用：組織工程與修復(fù)：mscs在骨缺損、軟骨損傷、心肌梗死、神經(jīng)損傷等多種組織損傷的修復(fù)中顯示出了潛力。免疫調(diào)節(jié)治療：用于治療自身免疫疾?。ㄈ缦到y(tǒng)性紅斑狼瘡、克羅恩?。?、移植物抗宿主?。╣vhd）等。再生醫(yī)學(xué)：在糖尿病、肝臟疾病、心血管疾病等領(lǐng)域探索其再生治療效果。抗衰老與美容：因其促進(jìn)細(xì)胞再生和分泌生長因子的能力，也被探討在抗衰老治療和皮膚再生中的應(yīng)用。

3、間充質(zhì)干細(xì)胞（mscs）在抗衰老領(lǐng)域展現(xiàn)出巨大潛力，其培養(yǎng)液雖直接用于抗衰老治療的討論較少，但間充質(zhì)干細(xì)胞本身及其分泌的因子在抗衰老方面的作用機(jī)制已被廣泛研究。以下是基于間充質(zhì)干細(xì)胞及其分泌物如何在理論上促進(jìn)抗衰老的一些關(guān)鍵點(diǎn)：細(xì)胞分化與再生：mscs具有分化為多種細(xì)胞類型的能力，如成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等，這一特性使它們在替換衰老或受損組織方面發(fā)揮作用。通過局部或全身回輸mscs，可以促進(jìn)組織的再生和修復(fù)，對抗因衰老引起的組織退化。旁分泌效應(yīng)：mscs在培養(yǎng)過程中會(huì)分泌一系列生長因子、細(xì)胞因子和微小rna等活性分子，這些因子被稱為mscs條件培養(yǎng)基。這些因子能夠刺激細(xì)胞增殖、抑制凋亡、促進(jìn)血管生成、抗氧化、抗炎，以及調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，從而在整體上改善組織環(huán)境，減緩衰老過程。免疫調(diào)節(jié)：mscs能夠調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的功能，包括抑制過度的免疫反應(yīng)和促進(jìn)免疫耐受，這有助于減少慢性炎癥，而慢性炎癥被認(rèn)為是加速衰老的重要因素之一。抗氧化與抗炎：mscs及其分泌物具有清除自由基和抗氧化的能力，減少氧化應(yīng)激，這是導(dǎo)致細(xì)胞老化的一個(gè)關(guān)鍵因素。它們還能調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，減少因炎癥引發(fā)的組織損傷。促進(jìn)新陳代謝：通過改善細(xì)胞間通訊和代謝平衡，mscs有助于恢復(fù)細(xì)胞的正常功能，包括改善能量代謝，這對于維持細(xì)胞活力和延緩衰老至關(guān)重要。

4、迄今為止，為了防止上述的皮膚老化，尤其是為了防止皺紋而使用視黃醇之類的物質(zhì)或者植物提取物等。但是，這些物質(zhì)的上述效果低，或者具有誘發(fā)皮膚刺激、發(fā)紅、炎癥而對皮膚產(chǎn)生副作用的缺點(diǎn)。因此亟需一種具有抗衰功能的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液及其制備方法與在制備具有抗衰老作用的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案：一種間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液的制備方法，包括以下步驟：

3、（1）在包含質(zhì)量百分?jǐn)?shù)3%-8%的人血小板裂解物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)源自骨髓的單克隆間充質(zhì)干細(xì)胞；間充質(zhì)干細(xì)胞以500細(xì)胞/cm2至800細(xì)胞/cm2的密度接種；

4、（2）獲取培養(yǎng)的干細(xì)胞后在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)；

5、（3）收集源自間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)液后過濾來獲取干細(xì)胞培養(yǎng)液。

6、進(jìn)一步地，所述間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液包括生長因子及細(xì)胞因子。

7、進(jìn)一步地，所述生長因子及細(xì)胞因子包括選自由載脂蛋白-a-1、視黃醇結(jié)合蛋白-4、維生素d-bp、脂聯(lián)素、補(bǔ)體成分5/補(bǔ)體成分5a、分化群14、fas配體、白細(xì)胞介素-6、白細(xì)胞介素-8、血小板衍生因子-aa中的一種以上。

8、進(jìn)一步地，所述步驟（1）中培養(yǎng)液包括以下成分：3-8%人血小板裂解物、0.2-0.4%青鏈霉素（penstrep）、1-4mmol/l長效谷氨酰胺、5-10ng/ml趨化因子xcl1、4-12ng/ml熱休克蛋白(hsp70)、10-15ng/ml端粒酶抑制劑ifn-α2b、基礎(chǔ)培養(yǎng)基dmem。

9、進(jìn)一步地，培養(yǎng)液的ph值為6.8~7.0。

10、進(jìn)一步地，培養(yǎng)液的滲透壓為305-315mosm/kg。

11、進(jìn)一步地，無血清培養(yǎng)基包括以下組分：基礎(chǔ)培養(yǎng)基及胰島素樣生長因子3~8μg/ml、表皮生長因子5~15μg/ml、成纖維生長因子3~8μg/ml、轉(zhuǎn)鐵蛋白5~15μg/ml、亞硒酸鈉20~30μg/ml、小麥蛋白酶解物1~5mg/ml、1~5%體積百分比的酶解明膠溶液和乙醇胺10~20μg/ml。

12、進(jìn)一步地，所述的基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括dmem培養(yǎng)基和f12培養(yǎng)基，其體積比為2-4:1。

13、本發(fā)明提供了所述制備方法制得的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液。

14、本發(fā)明提供了間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液在制備具有抗衰老作用的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

15、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果為：間充質(zhì)干細(xì)胞（mscs）培養(yǎng)液中使用的培養(yǎng)基對其生長、分化能力以及長期擴(kuò)增的效率有著顯著影響。理想的mscs培養(yǎng)基應(yīng)包含所有必要的營養(yǎng)成分，以支持細(xì)胞的生長和維持其多向分化潛能。無血清或低血清培養(yǎng)基越來越受歡迎，因?yàn)樗鼈兡軠p少批次間差異，降低污染物風(fēng)險(xiǎn)，并且更符合臨床應(yīng)用的需求。本發(fā)明提供了提供一種間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液及其制備方法與在制備具有抗衰老作用的產(chǎn)品中的應(yīng)用，本發(fā)明通過特定的制備步驟和培養(yǎng)基制得的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液中細(xì)胞因子及生長因子的含量高且膠原蛋白的合成能力優(yōu)秀，可以利用上述間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液制備具有皮膚再生、改善皺紋的化妝品，可以在化妝品領(lǐng)域及醫(yī)藥行業(yè)廣為使用。

技術(shù)特征：

1.一種間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液的制備方法，其特征在于，所述間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液包括生長因子及細(xì)胞因子。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液的制備方法，其特征在于，所述生長因子及細(xì)胞因子包括選自由載脂蛋白-a-1、視黃醇結(jié)合蛋白-4、維生素d-bp、脂聯(lián)素、補(bǔ)體成分5/補(bǔ)體成分5a、分化群14、fas配體、白細(xì)胞介素-6、白細(xì)胞介素-8、血小板衍生因子-aa中的一種以上。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中培養(yǎng)液包括以下成分：3-8%人血小板裂解物、0.2-0.4%青鏈霉素（penstrep）、1-4mmol/l長效谷氨酰胺、5-10ng/ml趨化因子xcl1、4-12ng/ml熱休克蛋白(hsp70)、10-15ng/ml端粒酶抑制劑ifn-α2b、基礎(chǔ)培養(yǎng)基dmem。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液的制備方法，其特征在于，培養(yǎng)液的ph值為6.8~7.0。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液的制備方法，其特征在于，培養(yǎng)液的滲透壓為305-315mosm/kg。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液的制備方法，其特征在于，無血清培養(yǎng)基包括以下組分：基礎(chǔ)培養(yǎng)基及胰島素樣生長因子3~8μg/ml、表皮生長因子5~15μg/ml、成纖維生長因子3~8μg/ml、轉(zhuǎn)鐵蛋白5~15μg/ml、亞硒酸鈉20~30μg/ml、小麥蛋白酶解物1~5mg/ml、1~5%體積百分比的酶解明膠溶液和乙醇胺10~20μg/ml。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液的制備方法，其特征在于，所述的基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括dmem培養(yǎng)基和f12培養(yǎng)基，其體積比為2-4:1。

9.一種根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的制備方法制得的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液。

10.權(quán)利要求9所述的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液在制備具有抗衰老作用的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液及其制備方法與在制備具有抗衰老作用的產(chǎn)品中的應(yīng)用，包括以下步驟：（1）在包含質(zhì)量百分?jǐn)?shù)3%?8%的人血小板裂解物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)源自骨髓的單克隆間充質(zhì)干細(xì)胞；間充質(zhì)干細(xì)胞以500細(xì)胞/cm2至800細(xì)胞/cm2的密度接種；（2）獲取培養(yǎng)的干細(xì)胞后在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)；（3）收集源自間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)液后過濾來獲取干細(xì)胞培養(yǎng)液。本發(fā)明通過特定的制備步驟和培養(yǎng)基制得的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液中細(xì)胞因子及生長因子的含量高且膠原蛋白的合成能力優(yōu)秀，可以利用上述間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液制備具有抗衰效果的化妝品。

技術(shù)研發(fā)人員：李智耀,徐智峰,張新
受保護(hù)的技術(shù)使用者：廣州沙艾生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/11/4