本發(fā)明屬于微生物防治，涉及一種煙草花葉病的微生物防治技術(shù)，具體涉及一種抗煙草花葉病毒的蠟樣芽孢桿菌c1-3及其應(yīng)用和煙草種植方法。

背景技術(shù)：

1、煙草花葉病毒（tobacco?mosaic?virus,?tmv）是煙草上的一類(lèi)重要病害，煙草病毒病在全世界煙草栽培區(qū)發(fā)生普遍、分布廣泛、危害嚴(yán)重，嚴(yán)重影響著煙草的產(chǎn)量和質(zhì)量。

2、目前防治tmv的策略以預(yù)防為主，主要是因?yàn)闊煵莸纳L(zhǎng)周期短以及tmv擴(kuò)散速度快，一旦開(kāi)始發(fā)病就很難及時(shí)進(jìn)行防治。針對(duì)這種情況，目前的防治方法主要分為農(nóng)業(yè)防治、化學(xué)防治和生物防治三大類(lèi)，生物農(nóng)藥又稱(chēng)為生物源農(nóng)藥，是指直接利用生物體或生物代謝產(chǎn)生的一些天然物質(zhì)，作為對(duì)抗病蟲(chóng)害的農(nóng)藥或制劑。這種以生物為基礎(chǔ)的防治手段，提供了一種更為環(huán)保和可持續(xù)的解決方案。

3、生物農(nóng)藥可分為微生物農(nóng)藥、植物源農(nóng)藥、生物化學(xué)農(nóng)藥等，隨著農(nóng)業(yè)科技的進(jìn)步和發(fā)展，綠色生物農(nóng)藥尤其是微生物農(nóng)藥逐漸受到關(guān)注。微生物農(nóng)藥主要包括真菌、細(xì)菌、放線(xiàn)菌、病毒等活體生物或代謝產(chǎn)物制成的藥劑，其中細(xì)菌拮抗菌被廣泛用于植物病害的生物防治。芽孢桿菌是一種革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，多營(yíng)腐生生活，菌體具內(nèi)生芽孢，抗逆能力強(qiáng)，繁殖速度快，營(yíng)養(yǎng)要求簡(jiǎn)單，一些種類(lèi)可分泌、產(chǎn)生胞外蛋白、桿菌肽、大環(huán)內(nèi)酯、環(huán)肽、類(lèi)噬菌體顆粒等十幾種活性物質(zhì)，一些芽孢桿菌還能產(chǎn)生多種酶類(lèi)和多糖，具有促進(jìn)其他生物生長(zhǎng)和激發(fā)其產(chǎn)生免疫病害的功能，研究已經(jīng)揭示了芽孢桿菌在抵抗煙草花葉病毒（tmv）方面的潛力，例如枯草芽孢桿菌?sn-02，它能夠產(chǎn)生一種具有抗病毒特性的表面活性劑。此外，解淀粉芽孢桿菌?ba33?的代謝產(chǎn)物在體外實(shí)驗(yàn)中顯示出對(duì)?tmv?的抑制作用，并且能夠促進(jìn)煙草植株的生長(zhǎng)；枯草芽孢桿菌?tpb55，它不僅能有效降低?tmv?的活性，還能激發(fā)煙草植株的自身防御機(jī)制，增強(qiáng)其對(duì)?tmv?的抵抗力。作為一種具有豐富抗病毒資源的微生物類(lèi)群，芽孢桿菌在生物防治中很有開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景。芽胞桿菌屬（ bacillusspp.)因其綠色環(huán)保、穩(wěn)定性好、生長(zhǎng)迅速、抑菌譜廣、抗逆性強(qiáng)、生物安全性高等優(yōu)點(diǎn)在抑制植物病害中發(fā)揮著功能性作用，是最具潛力和商業(yè)價(jià)值的生防菌之一。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問(wèn)題之一，為了減少化學(xué)藥劑的使用以及對(duì)環(huán)境的危害，同時(shí)能夠克服生物制劑在田間使用時(shí)防治效果不穩(wěn)定的缺點(diǎn)，本發(fā)明提供了一株無(wú)毒、無(wú)致病性，對(duì)人畜安全、對(duì)環(huán)境友好，抗逆性強(qiáng)、抑菌活性穩(wěn)定的抑制植物病毒的蠟樣芽孢桿菌?c1-3，為植物病毒防治提供了一種安全、高效、環(huán)保的生物農(nóng)藥新選擇，有助于推動(dòng)農(nóng)業(yè)的綠色可持續(xù)發(fā)展。

2、本發(fā)明的技術(shù)解決方案如下：

3、本發(fā)明的第一方面提供一種抗煙草花葉病毒的蠟樣芽孢桿菌c1-3，所述蠟樣芽孢桿菌（ bacillus?cereus）c1-3已于2024年7月18日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctcc?no:?m?20241595，保藏地址為湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號(hào)武漢大學(xué)校內(nèi)。

4、優(yōu)選地，所述蠟樣芽孢桿菌c1-3在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上，37℃培養(yǎng)24小時(shí)后，會(huì)形成圓形或近似圓形、質(zhì)地軟、無(wú)色素、稍有光澤的白色菌落。

5、本發(fā)明的第二方面提供所述的蠟樣芽孢桿菌c1-3在防治煙草花葉病中的應(yīng)用。

6、本發(fā)明的第三方面提供采用上述的蠟樣芽孢桿菌c1-3防治煙草花葉病的方法，所述方法包括以下步驟：

7、將蠟樣芽孢桿菌c1-3接種于液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到發(fā)酵液；

8、將所述發(fā)酵液噴施在煙草葉片上。

9、優(yōu)選地，所述煙草葉片為三生煙草葉片。

10、優(yōu)選地，所述液體培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基。

11、優(yōu)選地，所述培養(yǎng)條件為：在37℃、200?r/min?條件下恒溫振蕩培養(yǎng)?1d，獲得蠟樣芽孢桿菌c1-3?發(fā)酵液，放4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

12、本發(fā)明的第四方面提供一種抗煙草花葉病毒的制劑，其有效成分包含所述的蠟樣芽孢桿菌c1-3。

13、本發(fā)明的第五方面提供一種抗煙草花葉病毒的的藥物組合物，其有效成分包含所述的蠟樣芽孢桿菌c1-3。

14、本發(fā)明的第六方面提供一種煙草種植方法，包括將所述的生物制劑或所述的藥物組合物噴施于煙草葉片上的步驟。

15、本發(fā)明至少具有以下有益效果之一：

16、本發(fā)明分離獲得一株蠟樣芽孢桿菌c1-3，該菌株對(duì)煙草普通花葉病毒的抑制作用顯著，首先是在三生煙枯斑實(shí)驗(yàn)中對(duì)?tmv?抑制率較高，蠟樣芽孢桿菌c1-3?發(fā)酵液對(duì)?tmv鈍化作用的抑制率可達(dá)?82.12%。對(duì)蠟樣芽孢桿菌?c1-3?發(fā)酵液對(duì)?tmv?的抑制作用進(jìn)一步探究，在k326?煙草內(nèi)病毒表達(dá)量以及防御酶的變化情況中可以看出，蠟樣芽孢桿菌c1-3能夠誘導(dǎo)煙草產(chǎn)生抗病性，在接種?tmv后，因其體內(nèi)產(chǎn)生的抗性而使得煙草感染的病毒無(wú)法在其體內(nèi)大量繁殖，從而達(dá)到較好的抗病毒效果。將蠟樣芽孢桿菌c1-3?應(yīng)用于抗花葉病毒生物農(nóng)藥的開(kāi)發(fā)，能夠開(kāi)出發(fā)新的、高效、安全的微生物制劑來(lái)控制植物病毒病。

技術(shù)特征：

1.一種抗煙草花葉病毒的蠟樣芽孢桿菌c1-3，其特征在于，所述蠟樣芽孢桿菌（bacillus?cereus）c1-3已于2024年7月18日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctcc?no:?m?20241595，保藏地址為湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號(hào)武漢大學(xué)校內(nèi)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蠟樣芽孢桿菌c1-3，其特征在于，所述蠟樣芽孢桿菌c1-3在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上，37℃培養(yǎng)24小時(shí)后，會(huì)形成圓形或近似圓形、質(zhì)地軟、無(wú)色素、稍有光澤的白色菌落。

3.如權(quán)利要求1~2任一所述的蠟樣芽孢桿菌c1-3在防治煙草花葉病中的應(yīng)用。

4.一種采用如權(quán)利要求1~2任一所述的蠟樣芽孢桿菌c1-3防治煙草花葉病的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的防治煙草花葉病的方法，其特征在于，所述煙草葉片為三生煙草葉片。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的防治煙草花葉病的方法，其特征在于，所述液體培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的防治煙草花葉病的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)條件為：在37℃、200?r/min?條件下恒溫振蕩培養(yǎng)?1d，獲得蠟樣芽孢桿菌c1-3?發(fā)酵液，放4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

8.一種抗煙草花葉病毒的生物制劑，其特征在于，其有效成分包含權(quán)利要求1~2任一所述的蠟樣芽孢桿菌c1-3。

9.一種抗煙草花葉病毒的的藥物組合物，其特征在于：其有效成分包含權(quán)利要求1~2任一所述的蠟樣芽孢桿菌c1-3。

10.一種煙草種植方法，其特征在于：包括將權(quán)利要求8所述的生物制劑或權(quán)利要求9所述的藥物組合物噴施于煙草葉片上的步驟。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種抗煙草花葉病毒的蠟樣芽孢桿菌C1?3及其應(yīng)用，涉及微生物防治技術(shù)領(lǐng)域，包括一種抗煙草花葉病毒的蠟樣芽孢桿菌C1?3，所述蠟樣芽孢桿菌（Bacillus?cereus）C1?3已于2024年7月18日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC?NO:M?20241595，保藏地址為湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號(hào)武漢大學(xué)校內(nèi)；一種蠟樣芽孢桿菌C1?3在防治煙草花葉病中的應(yīng)用；一種抗煙草花葉病毒的制劑，其有效成分包含所述的蠟樣芽孢桿菌C1?3。本發(fā)明的有益效果是該菌株對(duì)煙草普通花葉病毒的抑制作用顯著，并能夠誘導(dǎo)煙草產(chǎn)生抗病性，達(dá)到較好的抗病毒效果，能夠應(yīng)用于抗花葉病毒生物農(nóng)藥的開(kāi)發(fā)。

技術(shù)研發(fā)人員：吳麗萍,張煥然,趙微,張文鈺,彭月琪
受保護(hù)的技術(shù)使用者：南昌大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6