本發(fā)明涉及分子育種領(lǐng)域，具體而言，涉及一種用于略陽(yáng)烏雞蛋殼顏色選育的分子標(biāo)記和選育方法。

背景技術(shù)：

1、略陽(yáng)烏雞是陜西省特有的地方家禽品種。該品種具有體型大、蛋肉品質(zhì)好、營(yíng)養(yǎng)豐富兼具食療保健功能、對(duì)林地放養(yǎng)適應(yīng)能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。由于未開(kāi)展雜交選育，略陽(yáng)烏雞年均產(chǎn)蛋數(shù)150.3±32.8枚，平均蛋重48.2±12.3g，26-30周齡料蛋比2.85±0.41，其產(chǎn)蛋性能遠(yuǎn)低于當(dāng)前商業(yè)蛋雞品種。除了產(chǎn)蛋性能差以外，略陽(yáng)烏雞在產(chǎn)蛋性能和蛋品質(zhì)指標(biāo)上也存在較大的變異性。以蛋殼顏色為例，略陽(yáng)烏雞以產(chǎn)褐殼蛋為主，但在褐色調(diào)上，有褐色、淺褐色、棕褐、褐綠、灰褐等多顏色變異存在。如果以蛋色混雜的普通烏雞蛋銷售，售價(jià)約6元/斤，成本4.8元/斤，凈利潤(rùn)1.2元/斤。如果人工挑選蛋色、蛋重、蛋形均一的烏雞蛋，以品牌蛋銷售，售價(jià)約10元/斤，凈利潤(rùn)增加4倍以上。但是，這種銷售模式增大了人工成本，而且剩余的蛋仍是以普通蛋銷售。在鑒定出與褐殼顏色變異顯著關(guān)聯(lián)分子標(biāo)記的基礎(chǔ)上，建立分子輔助選育方案，培育蛋色均一的略陽(yáng)烏雞新品系是解決上述蛋品生產(chǎn)難題的有效途徑。

2、綜上所述，如何鑒定與蛋殼顏色顯著關(guān)聯(lián)，且可用于蛋色均一的略陽(yáng)烏雞新品系分子輔助選育是本申請(qǐng)需要攻克的難題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的主要目的在于提供一種用于略陽(yáng)烏雞蛋殼顏色選育的分子標(biāo)記和選育方法，通過(guò)分子育種獲得蛋色均一的略陽(yáng)烏雞新品系，以解決略陽(yáng)烏雞因蛋用顏色變異影響銷售利潤(rùn)的問(wèn)題。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種用于略陽(yáng)烏雞蛋殼顏色選育的分子標(biāo)記和選育方法，從而通過(guò)分子育種獲得蛋色均一的略陽(yáng)烏雞新品系。

3、第一方面，本發(fā)明提供一種用于略陽(yáng)烏雞褐殼蛋蛋殼顏色選育的分子標(biāo)記c21r，所述分子標(biāo)記c21r為發(fā)生在abcg2蛋白第21位半胱氨酸上的錯(cuò)義突變，其中，所述錯(cuò)義突變由snp?g.17548092t>c引起，所述abcg2蛋白由abcg2基因編碼，所述snp在雞galgal5.0參考基因組的位置為chr6:17548092，所述snp?g.17548092t>c的t為野生型等位基因，所述t用于編碼第21位半胱氨酸(c)，c為突變等位基因，所述c用于編碼第21位精氨酸(r)。

4、具體地，所述c形成cc基因型，所述t形成tt基因型，其中，所述cc基因型與深褐殼關(guān)聯(lián)，用于產(chǎn)深褐殼蛋略陽(yáng)烏雞新品系的分子輔助選育；所述tt基因型與淺褐殼關(guān)聯(lián)，用于產(chǎn)淺褐殼蛋略陽(yáng)烏雞新品系的分子輔助選育。

5、第二方面，本發(fā)明提供一種用于檢測(cè)第一方面所述分子標(biāo)記c21r的引物對(duì)，所述引物對(duì)用于特異性地?cái)U(kuò)增包含c21r突變位點(diǎn)的dna片段。

6、第三方面，本發(fā)明提供一種使用第二方面所述引物對(duì)檢測(cè)略陽(yáng)烏雞abcg2基因中c21r基因型的檢測(cè)方法，所述檢測(cè)方法包括以下步驟：

7、步驟s1:以略陽(yáng)烏雞的dna為模板，使用所述引物對(duì)進(jìn)行pcr擴(kuò)增，將pcr擴(kuò)增得到的包含c21r突變位點(diǎn)的dna片段作為pcr擴(kuò)增產(chǎn)物；

8、步驟s2:將步驟s1得到的所述pcr擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，確認(rèn)所述pcr擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性和濃度；

9、步驟s3:判斷所述pcr擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性和濃度是否符合sanger測(cè)序要求，若是，則執(zhí)行步驟s4；若否，則返回執(zhí)行所述步驟s1；

10、步驟s4:對(duì)步驟s1得到的pcr擴(kuò)增產(chǎn)物用所述sanger測(cè)序，根據(jù)測(cè)序結(jié)果檢測(cè)待測(cè)個(gè)體在c21r位點(diǎn)的基因型，從而區(qū)分出cc型、ct型和tt型個(gè)體。

11、第四方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N基于第一方面所述分子標(biāo)記c21r的褐殼蛋蛋殼顏色選育方法，所述選育方法包括以下步驟：

12、步驟t1:利用第二方面所述的引物對(duì)和第三方面所述的檢測(cè)方法檢測(cè)烏雞個(gè)體的abcg2基因中c21r的基因型；

13、步驟t2:根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，選留cc型個(gè)體進(jìn)行繁殖，以獲得產(chǎn)深褐殼蛋的烏雞新品系；或選留tt型個(gè)體進(jìn)行繁殖，以獲得產(chǎn)淺褐殼蛋的烏雞新品系。

14、可選地，所述選育方法用于在雛雞階段實(shí)施。

15、本申請(qǐng)?zhí)峁┑暮謿さ暗皻ゎ伾x育的分子標(biāo)記、引物對(duì)、檢測(cè)方法及選育方法，所述選育方法根據(jù)引物對(duì)和分子標(biāo)記c21r通過(guò)pcr擴(kuò)增和sanger測(cè)序檢測(cè)出烏雞個(gè)體的abcg2基因中c21r的基因型；根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，選留cc型個(gè)體進(jìn)行繁殖，以獲得產(chǎn)深褐殼蛋的烏雞新品系；或選留tt型個(gè)體進(jìn)行繁殖，以獲得產(chǎn)淺褐殼蛋的烏雞新品系，其中，分子標(biāo)記c21r為abcg2基因內(nèi)第21位半胱氨酸上的錯(cuò)義突變，引物對(duì)包括正鏈引物序列5’-gtcacctcagaaaccctcat-3’和反鏈引物序列5’

16、-ccacagtcttccgtctacat-3’。本發(fā)明為略陽(yáng)烏雞蛋殼顏色選育提供了一種分子輔助選育的手段，顯著縮短了蛋色均一的略陽(yáng)烏雞新品系育種進(jìn)程，降低了育種成本。

技術(shù)特征：

1.一種用于略陽(yáng)烏雞褐殼蛋蛋殼顏色選育的分子標(biāo)記c21r，其特征在于：所述分子標(biāo)記c21r為abcg2蛋白第21位半胱氨酸上的錯(cuò)義突變，其中，所述錯(cuò)義突變由snpg.17548092t>c引起，所述abcg2蛋白由abcg2基因編碼，所述snp在雞galgal5.0參考基因組的位置為chr6:17548092，所述snp?g.17548092t>c的t為野生型等位基因，所述t用于編碼第21位半胱氨酸(c)，c為突變等位基因，所述c用于編碼第21位精氨酸(r)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記c21r，其特征在于，所述c形成cc基因型，所述t形成tt基因型，其中，所述cc基因型與深褐殼關(guān)聯(lián)，用于產(chǎn)深褐殼蛋略陽(yáng)烏雞新品系的分子輔助選育；所述tt基因型與淺褐殼關(guān)聯(lián)，用于產(chǎn)淺褐殼蛋略陽(yáng)烏雞新品系的分子輔助選育。

3.一種用于檢測(cè)權(quán)利要求1所述分子標(biāo)記c21r的引物對(duì)，其特征在于，所述引物對(duì)包括正鏈引物序列5’-gtcacctcagaaaccctcat-3’和反鏈引物序列5’-ccacagtcttccgtctacat-3’，所述引物對(duì)用于特異性地?cái)U(kuò)增包含c21r突變位點(diǎn)的dna片段。

4.一種使用權(quán)利要求3所述引物對(duì)檢測(cè)略陽(yáng)烏雞abcg2基因中c21r基因型的檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：

5.一種基于權(quán)利要求1所述分子標(biāo)記c21r的褐殼蛋蛋殼顏色選育方法，其特征在于，包括以下步驟：

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的選育方法，其特征在于：所述選育方法用于在雛雞階段實(shí)施。

技術(shù)總結(jié)
本申請(qǐng)?zhí)峁┑囊环N用于略陽(yáng)烏雞蛋殼顏色選育的分子標(biāo)記和選育方法，具體涉及分子育種領(lǐng)域。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了ABCG2基因內(nèi)一個(gè)錯(cuò)義突變(C21R)與略陽(yáng)烏雞褐殼蛋蛋殼顏色變異存在關(guān)聯(lián)，因此可用于略陽(yáng)烏雞褐殼蛋蛋殼顏色的分子輔助選育。C21R為發(fā)生在ABCG2蛋白第21位半胱氨酸上的一個(gè)錯(cuò)義突變，由SNP?g.17548092T>C引起。所述選育方法為通過(guò)PCR擴(kuò)增和Sanger測(cè)序檢測(cè)出待測(cè)個(gè)體的C21R位點(diǎn)基因型。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，選留CC型個(gè)體進(jìn)行繁殖，可輔助培育產(chǎn)深褐殼蛋的烏雞新品系；選留TT型個(gè)體進(jìn)行繁殖，可輔助培育產(chǎn)淺褐殼蛋的烏雞新品系。本發(fā)明解決了現(xiàn)有略陽(yáng)烏雞因?yàn)榛蛲蛔儗?dǎo)致蛋色不一的問(wèn)題，可大幅縮短產(chǎn)特定褐殼顏色蛋的烏雞新品系選育的時(shí)間，降低育種成本。

技術(shù)研發(fā)人員：王哲鵬,王梓翰,岳洪
受保護(hù)的技術(shù)使用者：西北農(nóng)林科技大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6