本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥，具體涉及一種(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺的可藥用鹽、晶型及其制備方法，以及含有治療有效量的該晶型的藥物組合物和其在治療癌癥中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、癌癥嚴(yán)重威脅著人們的生命和生活質(zhì)量，因此尋找高效、低毒的抗腫瘤藥物是當(dāng)今生命科學(xué)中極富挑戰(zhàn)性且意義重大的課題。受體酪氨酸激酶是一類參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的跨膜蛋白，研究表明，超過50％的原癌基因和癌基因產(chǎn)物都具有酪氨酸激酶活性，它們的異常表達將導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。酪氨酸激酶抑制劑從2001年開始上市，已成為異軍突起的一類新型抗癌藥。表皮生長因子受體(her2和egfr)均為受體酪氨酸激酶家族的一員，表皮生長因子受體通路在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中起非常重要的作用，目前已成為腫瘤治療領(lǐng)域最主要的研究和開發(fā)靶點之一。現(xiàn)已經(jīng)上市的此類藥物有埃羅替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、拉帕替尼(lapatinib,tykerb,gw572016)、阿法替尼(afatinib)、來那替尼(neratinib)、奧西替尼(osimertinib)等。

2、zl201480003627.0公開了化合物(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺的制備方法，該藥物分子具有明顯的藥代、藥效優(yōu)勢。其中，具體公開了化合物amx3009的化學(xué)結(jié)構(gòu)和制備方法，但未對其成鹽的情況和結(jié)晶形態(tài)進行研究。由于藥用的活性成分的鹽型、晶型結(jié)構(gòu)等往往影響到該藥物的化學(xué)穩(wěn)定性，結(jié)晶條件及儲存條件的不同有可能導(dǎo)致化合物的晶型結(jié)構(gòu)的變化，有時還會伴隨著產(chǎn)生其他形態(tài)的晶型。

3、基于此，進一步研究化合物amx3009的鹽型以及晶型對抑制活性、穩(wěn)定性等方面的影響具有重要意義，從而獲得具有高抑制活性以及優(yōu)異穩(wěn)定性的amx3009鹽晶體，以滿足實際應(yīng)用及生產(chǎn)需求。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺(amx3009)的可藥用鹽、晶型及其制備方法，以及含有治療有效量的該晶型的藥物組合物和其在治療癌癥中的應(yīng)用。

2、本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明第一方面提供了一種(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺的可藥用鹽，所述可藥用鹽為馬來酸鹽、甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、磷酸鹽、l-蘋果酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、鹽酸鹽、酒石酸鹽、乙酸鹽、三氟乙酸鹽、檸檬酸鹽、氫溴酸鹽或富馬酸鹽。

4、進一步地，所述(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺的可藥用鹽優(yōu)選為具有以下結(jié)構(gòu)通式的化合物：

5、

6、其中，n為1、2或3；

7、a為馬來酸、甲磺酸、對甲苯磺酸、磷酸、l-蘋果酸、琥珀酸、硫酸、鹽酸、酒石酸、乙酸、三氟乙酸、檸檬酸、氫溴酸或富馬酸。

8、進一步地，所述(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺的可藥用鹽包括但不限于下表中的幾種：

9、

10、

11、

12、

13、進一步地，所述(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺的可藥用鹽更優(yōu)選為二馬來酸鹽，相較于(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺，其二馬來酸鹽在溶解度、生物利用度和藥代動力學(xué)等方面具有明顯優(yōu)勢，成藥性良好。

14、進一步地，所述(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺的可藥用鹽可根據(jù)領(lǐng)域的常規(guī)制備鹽的方法制備得到，例如：將(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺與酸在溶劑存在下攪拌，得到所述可藥用鹽，所述酸為有機酸或無機酸，可選自馬來酸、甲磺酸、對甲苯磺酸、磷酸、l-蘋果酸、琥珀酸、硫酸、鹽酸、酒石酸、乙酸、三氟乙酸、檸檬酸、氫溴酸和富馬酸中的一種。

15、本發(fā)明第二方面提供了一種(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺二馬來酸鹽的晶型，包括無水晶型a、b、c、f以及水合物晶型d、e、h、k、r、v。

16、進一步地，使用cu-kα作為輻射源，以2θ角度表示的x-射線粉末衍射圖譜，所述晶型a的x-射線粉末衍射圖譜在4.98±0.2°、10.41±0.2°、15.16±0.2°、19.72±0.2°處有特征峰；更優(yōu)選地，所述晶型a的x-射線粉末衍射圖譜在4.98±0.2°、5.98±0.2°、10.41±0.2°、14.76±0.2°、15.16±0.2°、16.21±0.2°、19.72±0.2°、22.09±0.2°、25.80±0.2°、34.81±0.2°處有特征峰。

17、進一步地，所述晶型a的dsc圖譜顯示在144℃附近有熔融吸熱峰。

18、進一步地，使用cu-kα作為輻射源，以2θ角度表示的x-射線粉末衍射圖譜，所述晶型b的x-射線粉末衍射圖譜在4.68±0.2°、14.41±0.2°、16.70±0.2°、18.73±0.2°處有特征峰；更優(yōu)選地，所述晶型b的x-射線粉末衍射圖譜在4.68±0.2°、7.75±0.2°、9.90±0.2°、13.40±0.2°、14.03±0.2°、14.41±0.2°、16.70±0.2°、17.64±0.2°、18.73±0.2°、25.52±0.2°、26.38±0.2°、33.07±0.2°處有特征峰。

19、進一步地，使用cu-kα作為輻射源，以2θ角度表示的x-射線粉末衍射圖譜，所述晶型c的x-射線粉末衍射圖譜在4.82±0.2°、14.41±0.2°、15.41±0.2°、19.24±0.2°處有特征峰；更優(yōu)選地，所述晶型c的x-射線粉末衍射圖譜在4.82±0.2°、9.56±0.2°、14.12±0.2°、14.41±0.2°、15.41±0.2°、19.24±0.2°、19.69±0.2°、25.72±0.2°處有特征峰。

20、進一步地，使用cu-kα作為輻射源，以2θ角度表示的x-射線粉末衍射圖譜，所述晶型d的x-射線粉末衍射圖譜在5.93±0.2°、7.91±0.2°、14.86±0.2°、20.33±0.2°、25.36±0.2°、26.05±0.2°處有特征峰；更優(yōu)選地，所述晶型d的x-射線粉末衍射圖譜在3.37±0.2°、3.96±0.2°、5.93±0.2°、7.91±0.2°、14.86±0.2°、16.06±0.2°、19.20±0.2°、20.33±0.2°、21.81±0.2°、25.36±0.2°、26.05±0.2°、27.28±0.2°處有特征峰。

21、進一步地，使用cu-kα作為輻射源，以2θ角度表示的x-射線粉末衍射圖譜，所述晶型e的x-射線粉末衍射圖譜在4.75±0.2°、5.16±0.2°、15.65±0.2°、23.45±0.2°處有特征峰；更優(yōu)選地，所述晶型e的x-射線粉末衍射圖譜在5.16±0.2°、6.75±0.2°、15.65±0.2°、16.67±0.2°、17.84±0.2°、18.09±0.2°、18.90±0.2°、23.45±0.2°、25.07±0.2°、26.12±0.2°、26.74±0.2°、27.98±0.2°處有特征峰。

22、進一步地，使用cu-kα作為輻射源，以2θ角度表示的x-射線粉末衍射圖譜，所述晶型f的x-射線粉末衍射圖譜在4.57±0.2°、12.93±0.2°、15.5±0.2°、18.44±0.2°處有特征峰；更優(yōu)選地，所述晶型f的x-射線粉末衍射圖譜在4.57±0.2°、7.06±0.2°、8.51±0.2°、12.93±0.2°、15.5±0.2°、18.44±0.2°、19.33±0.2°、20.23±0.2°、20.94±0.2°、25.58±0.2°、25.85±0.2°、26.31±0.2°處有特征峰。

23、進一步地，使用cu-kα作為輻射源，以2θ角度表示的x-射線粉末衍射圖譜，所述晶型h的x-射線粉末衍射圖譜在3.67±0.2°、5.51±0.2°、11.04±0.2°、19.73±0.2°、26.48±0.2°、27.86±0.2°處有特征峰；更優(yōu)選地，所述晶型h的x-射線粉末衍射圖譜在3.67±0.2°、5.51±0.2°、7.15±0.2°、7.36±0.2°、11.04±0.2°、11.45±0.2°、19.73±0.2°、20.48±0.2°、21.66±0.2°、25.79±0.2°、26.48±0.2°、27.86±0.2°處有特征峰。

24、進一步地，使用cu-kα作為輻射源，以2θ角度表示的x-射線粉末衍射圖譜，所述晶型k的x-射線粉末衍射圖譜在5.16±0.2°、6.96±0.2°、15.54±0.2°、23.34±0.2°、25.43±0.2°、27.91±0.2°處有特征峰；更優(yōu)選地，所述晶型k的x-射線粉末衍射圖譜在5.16±0.2°、6.96±0.2°、13.86±0.2°、15.54±0.2°、17.67±0.2°、19.62±0.2°、23.34±0.2°、23.79±0.2°、24.34±0.2°、25.43±0.2°、27.50±0.2°、27.91±0.2°處有特征峰。

25、進一步地，使用cu-kα作為輻射源，以2θ角度表示的x-射線粉末衍射圖譜，所述晶型r的x-射線粉末衍射圖譜在4.67±0.2°、8.52±0.2°、9.21±0.2°、15.13±0.2°、18.60±0.2°、19.69±0.2°處有特征峰；更優(yōu)選地，所述晶型r的x-射線粉末衍射圖譜在4.67±0.2°、4.93±0.2°、7.53±0.2°、8.52±0.2°、9.21±0.2°、12.49±0.2°、15.13±0.2°、16.28±0.2°、16.98±0.2°、18.60±0.2°、19.69±0.2°、27.34±0.2°處有特征峰。

26、進一步地，使用cu-kα作為輻射源，以2θ角度表示的x-射線粉末衍射圖譜，所述晶型v的x-射線粉末衍射圖譜在8.56±0.2°、10.10±0.2°、14.16±0.2°、16.58±0.2°、18.20±0.2°、19.19±0.2°、20.28±0.2°、23.77±0.2°、26.03±0.2°處有特征峰；更優(yōu)選地，所述晶型v的x-射線粉末衍射圖譜在8.56±0.2°、10.10±0.2°、13.48±0.2°、14.16±0.2°、16.58±0.2°、18.20±0.2°、18.40±0.2°、19.19±0.2°、20.28±0.2°、22.28±0.2°、23.77±0.2°、26.03±0.2°處有特征峰。

27、本發(fā)明中，“晶體”或“晶型”可以用x射線粉末衍射表征。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，x射線粉末衍射圖受儀器的條件、樣品的準(zhǔn)備和樣品純度的影響而有所改變。x射線粉末衍射圖中衍射峰的相對強度也可能隨著實驗條件的變化而變化，所以衍射峰強度不能作為判定晶型的唯一或決定性因素。事實上，x射線粉末衍射圖中衍射峰的相對強度與晶體的擇優(yōu)取向有關(guān)，本發(fā)明所示的衍射峰強度為說明性而非用于絕對比較。因而，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的是，本發(fā)明所保護晶型的x射線粉末衍射圖不必和這里所指的實施例中的x射線粉末衍射圖完全一致，任何具有和這些圖譜中的特征峰相同或相似的x射線粉末衍射圖的晶型均屬于本發(fā)明的范疇之內(nèi)。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠?qū)⒈景l(fā)明所列的x射線粉末衍射圖和一個未知晶型的x射線粉末衍射圖相比較，以證實這兩組圖反映的是相同還是不同的晶型。

28、本發(fā)明第三方面提供了第二方面所述的(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺二馬來酸鹽的晶型a、b、c、d、e、f、h、k、r、v的制備方法。其中，

29、所述晶型a的制備方法包括：

30、將amx3009與順丁烯二酸溶解于第一有機溶劑中，攪拌析出晶體，分離干燥得到所述晶型a；所述第一有機溶劑選自異丙醇、乙腈、四氫呋喃、甲基異丁基酮、三氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、1,4-二氧六環(huán)、乙酸異丙酯、甲基叔丁基醚、2-甲基四氫呋喃、甲苯中的一種或多種；

31、或，將(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺的二馬來酸鹽溶于乙腈中，揮發(fā)析出固體，得到所述晶型a；優(yōu)選地，在揮發(fā)處理前，對(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺的二馬來酸鹽溶于乙腈中得到的溶液進行過濾處理，所述揮發(fā)的步驟在50℃下進行；

32、或，將(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺的二馬來酸鹽溶于甲醇中，添加反溶劑，攪拌析出固體，得到所述晶型a；所述反溶劑為甲基叔丁基醚、2-甲基四氫呋喃或甲苯；

33、或，將(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺的二馬來酸鹽溶于丙酮或乙腈中，進行降溫處理，析出固體，得到所述晶型a；優(yōu)選地，在降溫處理前，將(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺的二馬來酸鹽溶于丙酮或乙腈中得到的溶液進行過濾處理，所述降溫處理具體為：以0.1℃/分鐘的降溫速率從50℃降溫至5℃。

34、所述晶型b的制備方法包括以下步驟：將amx3009與順丁烯二酸溶解于適量異丙醇中，35℃攪拌析晶，過濾分離固體后干燥，得到所述晶型b。

35、所述晶型c的制備方法包括以下步驟：將amx3009二馬來酸鹽溶解于適量乙醇中，室溫攪拌析晶，離心分離固體后室溫干燥，得到所述晶型c。

36、所述晶型d的制備方法包括以下步驟：將amx3009二馬來酸鹽溶解于適量二甲基乙酰胺中，邊攪邊加入2-甲基四氫呋喃，將得到的固體溶解于2-甲基四氫呋喃中，室溫下攪拌析晶，離心分離固體后室溫干燥，得到所述晶型d。

37、所述晶型e的制備方法包括以下步驟：將amx3009二馬來酸鹽在含水體系中攪拌，離心分離固體并在室溫下干燥，得到所述晶型e；所述攪拌的溫度優(yōu)選為10-30℃，攪拌時間為3-6天，例如5天。

38、進一步地，所述含水體系為有機溶劑與水的混合體系，優(yōu)選地，所述混合體系中水的體積百分比不低于3％，例如混合體系中有機溶劑與水的體積比為(85-97)：(3-15)；優(yōu)選地，所述有機溶劑為1，4二氧六環(huán)或異丙醇。

39、所述晶型f的制備方法包括以下步驟：將amx3009二馬來酸鹽溶解于甲醇/乙酸乙酯(1：4，v/v)中，40-60℃攪拌析晶，離心分離固體后室溫干燥，得到所述晶型f。

40、所述晶型h的制備方法包括以下步驟：將amx3009二馬來酸鹽放入瓶中，并敞口置于密封且盛有水的瓶中，進行氣固滲透，得到所述晶型h。

41、所述晶型k的制備方法包括以下步驟：將amx3009二馬來酸鹽晶型e以5-10℃/分鐘的加熱速率加熱至75-100℃，然后降至室溫得到所述晶型k。

42、所述晶型r的制備方法包括以下步驟：將amx3009二馬來酸鹽晶型a在濕度為0％rh-90％rh-0％rh進行動態(tài)水分吸附測試，得到amx3009二馬來酸鹽晶型r。

43、所述晶型v的制備方法包括以下步驟：將amx3009二馬來酸鹽在異丙醇/水(體積比為98/2)中懸浮攪拌，得到amx3009二馬來酸鹽晶型v。

44、本發(fā)明第四方面提供了一種藥物組合物，包含第一方面所述的(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺的可藥用鹽和/或第二方面所述的二馬來酸鹽晶型a、b、c、d、e、f、h、k、r、v以及藥學(xué)上可接受的載體。

45、本發(fā)明第五方面提供了一種第一方面所述的(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺的可藥用鹽、第二方面所述的二馬來酸鹽晶型a、b、c、d、e、f、h、k、r、v或第四方面所述的藥物組合物在制備治療與蛋白質(zhì)激酶有關(guān)的疾病的藥物中的用途，所述蛋白質(zhì)激酶為egfr受體酪氨酸激酶或her-2受體酪氨酸激酶。

46、進一步地，所述藥物單獨施用或與其他治療劑組合施用。

47、本發(fā)明還提供了一種第一方面所述的(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺的可藥用鹽、第二方面所述的二馬來酸鹽晶型a、b、c、d、e、f、h、k、r、v或第四方面所述的藥物組合物在制備治療癌癥的藥物中的用途，所述癌癥包括但不限于egfr耐藥突變肺癌、頭頸癌、her2陽性胃癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌。

48、進一步地，所述藥物單獨施用或與其他治療劑組合施用。

49、借由上述技術(shù)方案，本發(fā)明至少具有以下優(yōu)點：

50、本發(fā)明提供了一類(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺的可藥用鹽及其二馬來酸鹽晶型，相較于(e)-4-(二甲氨基)-n-(7-(2-乙氧基乙氧基醚)-4-((3-乙炔基苯基)氨基)-6-喹唑啉)-2-丁烯酰胺化合物，其可藥用鹽在溶解度、生物利用度和藥代動力學(xué)等方面具有明顯優(yōu)勢，成藥性良好，尤其amx3009的二馬來酸鹽，在egfr耐藥突變肺癌細(xì)胞抑制率測試中表現(xiàn)出高抑制活性。

51、另外，本發(fā)明提供了一系列amx3009二馬來酸鹽的無水晶型及水合物晶型，其中，無水晶型a具有高溶解度，在動物體內(nèi)暴露量高，半衰期長，口服生物利用度高，具有良好的生物利用度，目前正應(yīng)用于臨床試驗；且該晶型表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性，適于藥物制劑應(yīng)用。