本發(fā)明屬于藥品，具體涉及一種芋螺抗皺素的制備方法。

背景技術(shù)：

1、芋螺抗皺素是一種對不同離子通道及神經(jīng)受體高度專一的活性多肽，其由海洋腹足綱軟體動物芋螺的毒液管和毒囊內(nèi)壁的毒腺所分泌，是一種高度折疊的勝肽，主鏈具有22個氨基酸，肽鏈較長且有三對二硫鍵形成特定的空間立體結(jié)構(gòu)。芋螺抗皺素穿透能力強，可以放松肌肉，研究證明，芋螺抗皺素可以通過抑制鈉離子通道、鈣離子通道以及乙酰膽堿受體，來阻斷神經(jīng)信號傳遞抑制肌肉收縮，最終達到減少皺紋的效果，因此芋螺抗皺素具有選擇性高、副作用小的優(yōu)點，被廣泛用于化妝品領(lǐng)域。

2、芋螺抗皺素的結(jié)構(gòu)如下：

3、h-pyr1-gly2-cys3-cys4-asn5-gly6-pro7-lys8-gly9-cys10-ser11-ser12-lys13-trp14-cys15-arg16-asp17-his18-ala19-arg20-cys21-cys22-nh2

4、(二硫鍵：c3-c15；c4-c21；c10-c22)；

5、芋螺抗皺素在生物體內(nèi)含量極低，若采用生物提取，具有產(chǎn)量低、成本高的缺點；目前，常見的芋螺抗皺素工業(yè)化生產(chǎn)的方式是固相合成，但在實際生產(chǎn)中，不合適的氧化方法極易生成二硫鍵錯配的同分異構(gòu)體，且普通的氧化方法效率低，粗肽純度差，還增加了后續(xù)產(chǎn)品純化的難度，造成收率低、成本高的局面；現(xiàn)有技術(shù)中常用的芋螺抗皺素氧化方法有氨水自然氧化法、dmso(二甲基亞砜)氧化法、定點氧化法，這些方法不是對氧化要求較高(要求相對嚴苛的反應(yīng)條件)，就是收率較低；因此，有必要提供一種收率高、氧化反應(yīng)條件寬松的芋螺抗皺素的制備方法。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、因此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的制備芋螺抗皺素的氧化方法氧化要求高、制得的芋螺抗皺素收率低的缺陷，從而提供一種芋螺抗皺素的制備方法。

2、為此，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案。

3、本發(fā)明提供了一種芋螺抗皺素的制備方法，包括，將裸肽、溶劑、緩沖鹽、催化劑和氧化劑混合，得到混合液，向混合液中通入氧氣，反應(yīng)，制得芋螺抗皺素；

4、所述催化劑包括半胱氨酸和谷胱甘肽中的至少一種；

5、所述裸肽結(jié)構(gòu)如下：

6、h-pyr-gly-cys-cys-asn-gly-pro-lys-gly-cys-ser-ser-lys-trp-cys-arg-asp-his-ala-arg-cys-cys-nh2。

7、在一種可選的實施方式中，所述催化劑、緩沖鹽、氧化劑和裸肽的質(zhì)量比為(1-20):(1-20):(1-20):(50-200)；優(yōu)選為(2.5-3.5):(6-7):(7-8):(110-130)。

8、在一種可選的實施方式中，裸肽、緩沖鹽、催化劑、氧化劑的總質(zhì)量與溶劑的體積比為500-2000mg:500ml。

9、在一種可選的實施方式中，所述反應(yīng)的時間為10-48h；優(yōu)選為22-26h。

10、在一種可選的實施方式中，所述反應(yīng)之前中還包括調(diào)節(jié)混合溶液的ph值為7-10的步驟；

11、在一種可選的實施方式中，所述氧氣的流量為1-2l/min；

12、在一種可選的實施方式中，反應(yīng)之后還包括對反應(yīng)液進行純化的步驟。

13、在一種可選的實施方式中，所述ph值通過堿性溶液調(diào)節(jié)；

14、優(yōu)選地，所述堿性溶液包括氨水。

15、在一種可選的實施方式中，所述緩沖鹽包括硫酸銨、碳酸銨和乙酸銨中的至少一種；

16、在一種可選的實施方式中，所述氧化劑包括乙二胺四乙酸、雙氧水和dmso中的至少一種。

17、在一種可選的實施方式中，所述催化劑為半胱氨酸，所述緩沖鹽為硫酸銨，所述氧化劑為乙二胺四乙酸。

18、在一種可選的實施方式中，所述制備方法還包括加入酸性溶液終止反應(yīng)的步驟。

19、當(dāng)hplc分析目標(biāo)峰為唯一主峰時，反應(yīng)結(jié)束，加入酸性溶液終止反應(yīng)；

20、在一種可選的實施方式中，所述酸性溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)液的ph值為5-6；

21、在一種可選的實施方式中，所述酸性溶液包括醋酸。

22、在一種可選的實施方式中，所述溶劑為乙腈和水中的至少一種，可選的，所述溶劑為體積百分濃度為1-10％的乙腈水溶液。

23、在一種可選的實施方式中，所述制備方法包括如下步驟：將裸肽、溶劑、緩沖鹽、催化劑和氧化劑混合，得到混合液后加入堿性溶液調(diào)節(jié)ph值為7-10；向混合液中通入氧氣，反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束，加入酸性溶液終止反應(yīng)；對反應(yīng)液進行純化，制得芋螺抗皺素。

24、本發(fā)明技術(shù)方案，具有如下優(yōu)點：

25、1.本發(fā)明提供的一種芋螺抗皺素的制備方法，包括，將裸肽、溶劑、緩沖鹽、催化劑和氧化劑混合，得到混合液，向混合液中通入氧氣，反應(yīng)，制得芋螺抗皺素；所述催化劑包括半胱氨酸和谷胱甘肽中的至少一種。該制備方法可以在芋螺抗皺素裸肽上形成三對二硫鍵，且不會出現(xiàn)二硫鍵錯配的同分異構(gòu)體；其中，緩沖鹽能夠穩(wěn)定ph值、提供穩(wěn)定的化學(xué)環(huán)境從而減少裸肽降解的風(fēng)險；半胱氨酸或谷胱甘肽可以避免裸肽因其氨基酸殘基氧化而發(fā)生斷裂、從而降低芋螺抗皺素活性的缺陷，還可以維持所制得的芋螺抗皺素的化學(xué)穩(wěn)定性；氧化劑幫助二硫鍵的形成、穩(wěn)定所制得的芋螺抗皺素空間結(jié)構(gòu)。采用本發(fā)明的制備方法，操作簡單，制備周期短，氧化效率高，還提高了芋螺抗皺素的收率，可以應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)芋螺抗皺素。

26、2.本發(fā)明提供的一種芋螺抗皺素的制備方法，本發(fā)明優(yōu)選半胱氨酸，硫酸銨作為緩沖鹽，乙二胺四乙酸作為氧化劑制備芋螺抗皺素時，氧化效率高、制備周期短，所制得的芋螺抗皺素收率高；本發(fā)明優(yōu)選半胱氨酸、緩沖鹽、氧化劑和裸肽的質(zhì)量比為(2.5-3.5)：(6-7)：(7-8)：(110-130)，提高了芋螺抗皺素收率；本發(fā)明優(yōu)選反應(yīng)時間22-26h，可以有效提高芋螺抗皺素收率。本發(fā)明通過控制氧氣流量為1-2l/min，來控制反應(yīng)速率，制備得到的芋螺抗皺素收率提高。

技術(shù)特征：

1.一種芋螺抗皺素的制備方法，其特征在于，包括，將裸肽、溶劑、緩沖鹽、催化劑和氧化劑混合，得到混合液，向混合液中通入氧氣，反應(yīng)，制得芋螺抗皺素；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述催化劑、緩沖鹽、氧化劑和裸肽的質(zhì)量比為(1-20):(1-20):(1-20):(50-200)；優(yōu)選為(2.5-3.5):(6-7):(7-8):(110-130)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述反應(yīng)的時間為10-48h；優(yōu)選為22-26h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述反應(yīng)之前中還包括調(diào)節(jié)混合溶液的ph值為7-10的步驟；和/或，

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述ph值通過堿性溶液調(diào)節(jié)；

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述緩沖鹽包括硫酸銨、碳酸銨和乙酸銨中的至少一種；和/或，

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述催化劑為半胱氨酸，所述緩沖鹽為硫酸銨，所述氧化劑為乙二胺四乙酸。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法還包括加入酸性溶液終止反應(yīng)的步驟。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述酸性溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)液的ph值為5-6；和/或，

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述溶劑包括乙腈和水中的至少一種，可選的，所述溶劑為體積百分濃度為1-10％的乙腈水溶液。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于藥品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種芋螺抗皺素的制備方法。本發(fā)明提供一種芋螺抗皺素的制備方法，包括，將裸肽、溶劑、緩沖鹽、催化劑和氧化劑混合，得到混合液，向混合液中通入氧氣，反應(yīng)，制得芋螺抗皺素；所述催化劑包括半胱氨酸和谷胱甘肽中的至少一種。采用本發(fā)明的芋螺抗皺素的制備方法，操作簡單，制備周期短，氧化效率高，還提高了芋螺抗皺素的收率，可以應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)芋螺抗皺素。

技術(shù)研發(fā)人員：陳玉琛,李樂,秦超
受保護的技術(shù)使用者：蘇州默迪夫生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/23