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新型CRISPR-Casσ酶和系統(tǒng)

文檔序號(hào):40481873發(fā)布日期:2024-12-31 12:49閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種蛋白,其具有seq?id?no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12和13任一項(xiàng)所示的氨基酸序列或其直系同源物(ortholog)、同源物、變體或功能性片段;其中,所述直系同源物、同源物、變體或功能性片段基本保留了其所源自的序列的生物學(xué)功能;

2.權(quán)利要求1所述的蛋白,其包含選自下列的序列,或由選自下列的序列組成:

3.一種綴合物,其包含權(quán)利要求1或2所述的蛋白以及修飾部分;

4.一種融合蛋白,其包含權(quán)利要求1或2所述的蛋白以及另外的蛋白或多肽;

5.一種分離的核酸分子,其包含選自下列的序列,或由選自下列的序列組成:

6.一種復(fù)合物,其包含:

7.權(quán)利要求6所述的復(fù)合物,其中,所述導(dǎo)向序列連接于所述核酸分子的3’端;

8.一種分離的核酸分子,其包含:

9.一種載體,其包含權(quán)利要求8所述的分離的核酸分子。

10.一種宿主細(xì)胞,其包含權(quán)利要求8所述的分離的核酸分子或權(quán)利要求9所述的載體。

11.一種組合物,其包含:

12.一種組合物,其包含一種或多種載體,所述一種或多種載體包含:

13.權(quán)利要求11或12所述的組合物,其中,當(dāng)所述靶序列為dna時(shí),所述靶序列位于原間隔序列臨近基序(pam)的3’端,并且所述pam具有5’-ntn所示的序列,其中,n各自獨(dú)立地選自a、g、t或c;

14.權(quán)利要求11-13任一項(xiàng)所述的組合物,其中,所述靶序列是來自原核細(xì)胞或真核細(xì)胞的dna或rna序列;或者,所述靶序列是非天然存在的dna或rna序列。

15.權(quán)利要求11-14任一項(xiàng)所述的組合物,其中,所述靶序列存在于細(xì)胞內(nèi);或者,所述靶序列存在于體外的核酸分子(例如,質(zhì)粒)中;

16.權(quán)利要求11-15任一項(xiàng)所述的組合物,其中,所述蛋白連接有一個(gè)或多個(gè)nls序列,或者,所述綴合物或融合蛋白包含一個(gè)或多個(gè)nls序列;

17.一種試劑盒,其包括一種或多種選自下列的組分:權(quán)利要求1或2所述的蛋白、權(quán)利要求3所述的綴合物、權(quán)利要求4所述的融合蛋白、權(quán)利要求5所述的分離的核酸分子、權(quán)利要求6或7所述的復(fù)合物、權(quán)利要求8所述的分離的核酸分子、權(quán)利要求9所述的載體、權(quán)利要求10所述的宿主細(xì)胞、權(quán)利要求11-16任一項(xiàng)所述的組合物;

18.一種遞送組合物,其包含遞送載體,以及選自下列的一種或多種:權(quán)利要求1或2所述的蛋白、權(quán)利要求3所述的綴合物、權(quán)利要求4所述的融合蛋白、權(quán)利要求5所述的分離的核酸分子、權(quán)利要求6或7所述的復(fù)合物、權(quán)利要求8所述的分離的核酸分子、權(quán)利要求9所述的載體、權(quán)利要求10所述的宿主細(xì)胞、權(quán)利要求11-16任一項(xiàng)所述的組合物;

19.一種修飾靶基因的方法,其包括:將權(quán)利要求6或7所述的復(fù)合物或權(quán)利要求11-16任一項(xiàng)所述的組合物與所述靶基因接觸,或者遞送至包含所述靶基因的細(xì)胞中;所述靶序列存在于所述靶基因中;

20.一種改變基因產(chǎn)物的表達(dá)的方法,其包括:將權(quán)利要求6或7所述的復(fù)合物或權(quán)利要求11-16任一項(xiàng)所述的組合物與編碼所述基因產(chǎn)物的核酸分子接觸,或者遞送至包含所述核酸分子的細(xì)胞中,所述靶序列存在于所述核酸分子中;

21.權(quán)利要求18-20任一項(xiàng)所述的方法,其中所述的蛋白、綴合物、融合蛋白、分離的核酸分子、復(fù)合物、載體或組合物包含于遞送載體中;

22.權(quán)利要求18-21任一項(xiàng)所述的方法,其用于改變靶基因或編碼靶基因產(chǎn)物的核酸分子中的一個(gè)或多個(gè)靶序列來修飾細(xì)胞、細(xì)胞系或生物體。

23.一種由權(quán)利要求18-22任一項(xiàng)所述的方法獲得的細(xì)胞或其子代,其中所述細(xì)胞包含在其野生型中不存在的修飾。

24.權(quán)利要求23所述的細(xì)胞或其子代的細(xì)胞產(chǎn)物。

25.一種體外的、離體的或體內(nèi)的細(xì)胞或細(xì)胞系或它們的子代,所述細(xì)胞或細(xì)胞系或它們的子代包含:權(quán)利要求1或2所述的蛋白、權(quán)利要求3所述的綴合物、權(quán)利要求4所述的融合蛋白、權(quán)利要求5所述的分離的核酸分子、權(quán)利要求6或7所述的復(fù)合物、權(quán)利要求8所述的分離的核酸分子、權(quán)利要求9所述的載體、權(quán)利要求11-16任一項(xiàng)所述的組合物;

26.權(quán)利要求1或2所述的蛋白、權(quán)利要求3所述的綴合物、權(quán)利要求4所述的融合蛋白、權(quán)利要求5所述的分離的核酸分子、權(quán)利要求6或7所述的復(fù)合物、權(quán)利要求8所述的分離的核酸分子、權(quán)利要求9所述的載體、權(quán)利要求11-16任一項(xiàng)所述的組合物或權(quán)利要求18所述的試劑盒,在制備制劑中的用途,所述制劑用于核酸編輯(例如,體外或離體核酸編輯);

27.權(quán)利要求1或2所述的蛋白、權(quán)利要求3所述的綴合物、權(quán)利要求4所述的融合蛋白、權(quán)利要求5所述的分離的核酸分子、權(quán)利要求6或7所述的復(fù)合物、權(quán)利要求8所述的分離的核酸分子、權(quán)利要求9所述的載體、權(quán)利要求11-16任一項(xiàng)所述的組合物或權(quán)利要求17所述的試劑盒,在制備制劑中的用途,所述制劑用于:(i)體外或離體dna檢測(cè);和/或,(ii)編輯靶基因座中的靶序列來修飾生物或非人類生物。

28.一種檢測(cè)樣品中是否存在靶核酸的方法,其包括以下步驟:

29.權(quán)利要求28所述的方法,其中,所述靶核酸的序列為獲自病原物的序列;優(yōu)選地,所述病原物選自病毒、細(xì)菌、真菌、原生動(dòng)物、寄生蟲或其任意組合;


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及核酸編輯領(lǐng)域,特別是規(guī)律成簇的間隔短回文重復(fù)(CRISPR)技術(shù)領(lǐng)域。具體而言,本發(fā)明涉及Cas效應(yīng)蛋白,包含此類蛋白的融合蛋白,以及編碼它們的核酸分子。本發(fā)明還涉及用于核酸編輯(例如,基因或基因組編輯)的復(fù)合物和組合物,其包含本發(fā)明的蛋白或融合蛋白,或編碼它們的核酸分子。本發(fā)明還涉及用于核酸編輯(例如,基因或基因組編輯)的方法,其使用包含本發(fā)明的蛋白或融合蛋白。

技術(shù)研發(fā)人員:賴錦盛,楊志佳,余美霞,陳建,辛蓓蓓,滕云鵬,周躍恒,趙海銘,宋偉彬
受保護(hù)的技術(shù)使用者:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2024/12/30
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