:本發(fā)明涉及甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物及其制備方法和其在制備抗腫瘤化療藥物增敏劑中的應(yīng)用。
背景技術(shù)
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背景技術(shù):
1、惡性腫瘤一直是威脅人類健康的重要?dú)⑹?。盡管針對腫瘤治療的研究在不斷進(jìn)步和深入,但目前臨床治療惡性腫瘤的方法仍主要是通過使用化療藥物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞dna損傷從而殺傷腫瘤細(xì)胞。拓?fù)洚悩?gòu)酶1(top1)抑制劑常作為治療肺癌、結(jié)腸癌和膀胱癌等腫瘤化療藥物在臨床上廣泛使用,如拓?fù)涮婵?tpt)、伊立替康(irt)和羥基喜樹堿(hcpt)等。這些藥物在治療初期通常可取得明顯的療效,但隨著治療時(shí)間的延長,腫瘤細(xì)胞對該類藥物容易產(chǎn)生耐藥,從而大大降低了藥物的治療效果。有研究表明,tpt給藥治療后會導(dǎo)致dna修復(fù)酶—酪氨酸-dna磷酸二酯酶1(tdp1)表達(dá)上升,導(dǎo)致在治療一段時(shí)間后機(jī)體對相同劑量的藥物產(chǎn)生耐受。海洋真菌由于具有高度的物種多樣性,已逐漸成為重要的藥源分子補(bǔ)給站。從海洋真菌中尋找具有高效、低毒、可與腫瘤化療藥物協(xié)同起效的tdp1抑制劑,有望成為克服腫瘤耐藥性的重要策略,為腫瘤的治療提供更多可能性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
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技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:
1、本發(fā)明的目的是提供一種甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物及其制備方法和其在制備抗腫瘤化療藥物增敏劑中的應(yīng)用。
2、本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)的:
3、甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物,其結(jié)構(gòu)式如下:
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5、所述的甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物的制備方法,是從保藏編號為gdmcc60476的海洋軟珊瑚曲霉屬真菌aspergillus?sp.egf?15-0-3的大米培養(yǎng)基中制備得到,具體步驟如下:
6、1)菌株活化:將菌種接種到含有pda培養(yǎng)基的平板上,置恒溫培養(yǎng)箱中28℃培養(yǎng)2-3天,待平板長出單菌落后用接種環(huán)挑取單菌落轉(zhuǎn)移至裝有pdb培養(yǎng)基的三角瓶中,在28℃的全溫?fù)u瓶柜中165r/min培養(yǎng)2-3天,獲得活化的aspergillus?sp.egf15-0-3的種子培養(yǎng)液;
7、2)菌株發(fā)酵:吸取該活化的種子液加入裝有大米培養(yǎng)基的三角燒瓶中,在28℃下靜置培養(yǎng)35天,與空白培養(yǎng)基對比觀察是否有明顯的菌株生長,成長完畢便停止發(fā)酵,用etoac滅活后搖床振搖提取然后減壓濃縮得到etoac相浸膏;
8、3)將步驟2)得到的etoac相浸膏經(jīng)硅膠柱層析,以vpe:vetoac=50:1~1:1的石油醚-乙酸乙酯體系梯度洗脫后用乙酸乙酯和純甲醇體系沖柱,tlc薄層跟蹤,結(jié)合nmr和lc-ms共同分析后得到8個(gè)流份fr.1-fr.8,其中fr.6根據(jù)nmr和lc-ms分析為甾體類吲哚二酮哌嗪雜合物富集部位,選擇進(jìn)行進(jìn)一步的mci柱層析,以v甲醇:v水=40%-100%甲醇-水體系為洗脫劑進(jìn)行粗分離得到8個(gè)亞流份:fr.6-1-fr.6-8,其中fr.6-8進(jìn)行凝膠柱層析,以v甲醇:v二氯甲烷=7:3的甲醇-二氯甲烷體系為洗脫液,再進(jìn)行硅膠柱層析,以vpe:vetoac=50:1~10:1的石油醚-乙酸乙酯體系為洗脫劑得到fr.6-8-1-fr.6-8-10,其中fr.6-8-9經(jīng)反復(fù)hplc液相制備,得到化合物1-4。
9、pda培養(yǎng)基:葡萄糖2.0%、土豆汁200g/l、瓊脂10%、土豆汁用陳海水作溶劑配制,鹽度3.5%,ph自然。
10、pdb為pda中不加瓊脂的培養(yǎng)基。
11、大米培養(yǎng)基:大米100g、蛋白胨0.3%、鹽海水100ml。
12、發(fā)明人首次從真菌aspergillus?sp.egf15-0-3大米培養(yǎng)基中制備得到甾體類吲哚二酮哌嗪生物堿雜合類化合物,化合物1-4為自然界中首次發(fā)現(xiàn)的新骨架化合物。也首次發(fā)現(xiàn)該類雜合物具有tdp1抑制活性。因此本發(fā)明還保護(hù)所述化合物作為酪氨酸-dna磷酸二酯酶1(tdp1)抑制劑的應(yīng)用。
13、本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)了該類雜合物對腫瘤化療藥物的化療增敏活性。
14、因此本發(fā)明還保護(hù)所述化合物在制備抗腫瘤化療藥物增敏劑中的應(yīng)用。
15、所述腫瘤包括包括人肺癌、人乳腺癌和人宮頸癌。
16、抗腫瘤化療藥物包括拓?fù)涮婵?tpt)、伊立替康(irt)和羥基喜樹堿(hcpt)。
17、本發(fā)明還保護(hù)一種組合物,包含所述甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物與腫瘤化療藥物tpt。
18、本發(fā)明的有益效果如下:
19、1)首次從真菌aspergillus?sp.egf15-0-3大米培養(yǎng)基中制備得到甾體類吲哚二酮哌嗪生物堿雜合類化合物,該化合物為自然界中首次發(fā)現(xiàn)的新骨架化合物。
20、2)首次發(fā)現(xiàn)該類雜合物具有酪氨酸-dna磷酸二酯酶1(tdp1)抑制活性,可作為tdp1抑制劑應(yīng)用。
21、3)首次發(fā)現(xiàn)了該類雜合物對腫瘤化療藥物拓?fù)涮婵祎pt的化療增敏活性,為開發(fā)新型天然抗腫瘤聯(lián)用抑制劑提供藥源分子和數(shù)據(jù)支撐,對海洋曲霉屬真菌資源的開發(fā)利用具有重要意義。
22、本發(fā)明的保藏編號為gdmcc?60476的海洋軟珊瑚曲霉屬真菌aspergillus?sp.egf15-0-3已公開于cn?111139185?b,曲霉屬真菌及其應(yīng)用。
1.甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物,其特征在于,其結(jié)構(gòu)式如下:
2.權(quán)利要求1所述甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物的制備方法,其特征在于,從保藏編號為gdmcc?60476的海洋軟珊瑚曲霉屬真菌aspergillus?sp.egf?15-0-3的大米培養(yǎng)基中制備得到,具體步驟如下:
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于,pda培養(yǎng)基:葡萄糖2.0%、土豆汁200g/l、瓊脂10%、土豆汁用陳海水作溶劑配制,鹽度3.5%,ph自然。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于,pdb為pda中不加瓊脂的培養(yǎng)基。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于,大米培養(yǎng)基:大米100g、蛋白胨0.3%、鹽海水100ml。
6.權(quán)利要求1所述甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物作為酪氨酸-dna磷酸二酯酶1抑制劑的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求1所述甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物在制備抗腫瘤化療藥物增敏劑中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其特征在于,所述腫瘤包括包括人肺癌、人乳腺癌和人宮頸癌。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其特征在于,抗腫瘤化療藥物為拓?fù)涮婵?、伊立替康和羥基喜樹堿。
10.一種組合物,包含權(quán)利要求1所述甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物與腫瘤化療藥物拓?fù)涮婵怠?/p>
技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種甾體?吲哚生物堿雜合二聚體類化合物及其制備方法和其在制備抗腫瘤化療藥物增敏劑中的應(yīng)用,首次從真菌Aspergillus?sp.EGF15?0?3大米培養(yǎng)基中制備得到甾體類吲哚二酮哌嗪生物堿雜合類化合物,該化合物為自然界中首次發(fā)現(xiàn)的新骨架化合物。首次發(fā)現(xiàn)該類雜合物具有Tdp1抑制活性,可作為酪氨酸?DNA磷酸二酯酶1(Tdp1)抑制劑應(yīng)用。首次發(fā)現(xiàn)了該類雜合物對腫瘤化療藥物拓?fù)涮婵礣PT的化療增敏活性,為開發(fā)新型天然抗腫瘤聯(lián)用抑制劑提供藥源分子和數(shù)據(jù)支撐,對海洋曲霉屬真菌資源的開發(fā)利用具有重要意義。
技術(shù)研發(fā)人員:韋霞,張翠仙,張澤坤,林彥安
受保護(hù)的技術(shù)使用者:廣西醫(yī)科大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/1/6