：本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)，具體涉及一種pir-hsa-164586和myh9的新用途，通過促進(jìn)a549細(xì)胞遷移，促進(jìn)nsclc(非小細(xì)胞肺癌)進(jìn)展，作為nsclc的治療靶點。

背景技術(shù)

0、
背景技術(shù)：

1、人體血清外泌體中的pir-hsa-164586在nsclc患者血清外泌體和細(xì)胞中均表達(dá)上調(diào)，對肺癌的早期診斷有重要價值。此外，pir-hsa-164586定位于細(xì)胞核，可促進(jìn)nsclc細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和血管生成，但抑制其凋亡?；诖?，pir-hsa-164586的作用機(jī)制可能對治療nsclc提供新思路，定位于細(xì)胞核中的非編碼小rna可以通過與蛋白質(zhì)或rna結(jié)合形成復(fù)合物參與癌癥進(jìn)展。為了進(jìn)一步研究pir-hsa-164586在nsclc中的作用，首先通過rnapulldown實驗獲得與pir-hsa-164586相關(guān)的蛋白，然后進(jìn)行了蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析、rip實驗和分子對接，發(fā)現(xiàn)并證明了一種名為myh9(肌球蛋白重鏈9)的蛋白質(zhì)與pir-hsa-164586存在相互作用且與nsclc發(fā)生有關(guān)。

2、myh9參與了包括細(xì)胞遷移、侵襲、粘附、胞質(zhì)分裂和極化、細(xì)胞形狀的維持和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等生物過程，其異常表達(dá)與多種癌癥的進(jìn)展密切相關(guān)，例如，myh9依賴性極化通過加速粘著斑組裝促進(jìn)結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移；myh9可以通過增強(qiáng)癌癥干細(xì)胞性肝細(xì)胞癌進(jìn)展；myh9通過激活akt-mtor信號傳導(dǎo)對nsclc中的干細(xì)胞樣特性產(chǎn)生影響。

3、piwi相互作用rna(pirna)屬于一類小型非編碼rna(ncrna)，長度范圍為24-31個核苷酸，通常與piwi蛋白家族結(jié)合發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，pirna最初被發(fā)現(xiàn)在生殖系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用，最近的研究表明其與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。此外，越來越多的證據(jù)表明某些pirna的異常表達(dá)可能參與腫瘤的發(fā)生并與癌癥的預(yù)后相關(guān)，例如，pirna-14633可以通過mettl14依賴性m6arna甲基化促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞惡性腫瘤的進(jìn)展；

4、pirna-54265血清來源的異常表達(dá)可以作為檢測和診斷人類早期結(jié)直腸癌的新型生物標(biāo)志物。

5、探索pirna與myh9之間的相互作用時：首先，通過核醣核酸交互作用沉降(rnapulldown)實驗獲得與pir-hsa-164586結(jié)合的蛋白，進(jìn)行蛋白質(zhì)譜分析；然后，通過核醣核酸結(jié)合蛋白免疫共沉淀(rnabindingproteinimmunoprecipitation，rip)實驗，驗證pir-hsa-164586與靶標(biāo)蛋白myh9的結(jié)合關(guān)系，通過分子對接實驗證明pir-hsa-164586與靶標(biāo)蛋白myh9間存在結(jié)合位點；最后，通過qrt-pcr、蛋白免疫印跡和組織免疫熒光染色實驗基于mrna水平和蛋白水平驗證pir-hsa-164586對下游靶標(biāo)蛋白的調(diào)控作用，通過transwell回補(bǔ)實驗證明myh9與pir-hsa-164586能夠發(fā)揮協(xié)同作用影響a549細(xì)胞的遷移。

6、據(jù)此可以說明pir-hsa-164586能夠正向調(diào)控myh9的表達(dá)；pir-hsa-164586能夠與myh9發(fā)揮協(xié)同作用，通過促進(jìn)a549細(xì)胞的遷移，促進(jìn)nsclc進(jìn)展；pir-hsa-164586和myh9能夠作為nsclc潛在的治療靶點，有潛力成為新的治療藥物。

技術(shù)實現(xiàn)思路

0、
技術(shù)實現(xiàn)要素：

1、本發(fā)明涉及的pir-hsa-164586和myh9的新用途為基于pir-hsa-164586通過調(diào)控myh9的表達(dá)，促進(jìn)nsclc轉(zhuǎn)移，作為nsclc的治療靶點。

2、本發(fā)明涉及的myh9由rnapulldown實驗獲得，通過蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析、分子對接和rip實驗驗證。

3、本發(fā)明涉及的pir-hsa-164586能夠正向調(diào)控myh9的表達(dá)，通過分別對空白對照組(nc)、敲低pir-hsa-164586組(kd)和過表達(dá)pir-hsa-164586組(oe)進(jìn)行qrt-pcr、蛋白免疫印跡和組織免疫熒光染色實驗驗證。

4、本發(fā)明涉及的pir-hsa-164586和myh9相互結(jié)合，能夠在nsclc細(xì)胞株中上調(diào)myh9的表達(dá)，驗證實驗如下：

5、分別敲除pir-hsa-164586和myh9后，通過transwell實驗證實nsclc細(xì)胞的遷移數(shù)目均顯著受到抑制，同時敲低pir-hsa-164586和myh9能夠進(jìn)一步抑制a549細(xì)胞的遷移數(shù)目；

6、過表達(dá)pir-hsa-164586能夠顯著增加a549細(xì)胞的遷移數(shù)目，同時敲低myh9后，a549細(xì)胞的遷移數(shù)目顯著下降；

7、表明pir-hsa-164586和myh9結(jié)合能夠促進(jìn)a549細(xì)胞的遷移，增加nsclc轉(zhuǎn)移能力。

8、本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，基于pir-hsa-164586與myh9相互結(jié)合發(fā)揮作用：pir-hsa-164586調(diào)控myh9的表達(dá)，發(fā)揮促進(jìn)nsclc轉(zhuǎn)移的作用，作為nsclc的治療靶點，成為潛在的治療藥物。

技術(shù)特征：

1.一種pir-hsa-164586和myh9的新用途，其特征在于，作為nsclc的治療靶點。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的pir-hsa-164586和myh9的新用途，其特征在于，原理是pir-hsa-164586通過調(diào)控myh9的表達(dá)，促進(jìn)nsclc轉(zhuǎn)移。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的pir-hsa-164586和myh9的新用途，其特征在于，myh9由rnapulldown實驗獲得，通過蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析、分子對接和rip實驗驗證。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的pir-hsa-164586和myh9的新用途，其特征在于，pir-hsa-164586正向調(diào)控myh9的表達(dá)，通過分別對空白對照組、敲低pir-hsa-164586組和過表達(dá)pir-hsa-164586組進(jìn)行qrt-pcr、蛋白免疫印跡和組織免疫熒光染色實驗驗證。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的pir-hsa-164586和myh9的新用途，其特征在于，pir-hsa-164586和myh9相互結(jié)合，在nsclc細(xì)胞株中上調(diào)myh9的表達(dá)，驗證實驗如下：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種piR?hsa?164586和MYH9的新用途，基于piR?hsa?164586與MYH9相互結(jié)合發(fā)揮作用：piR?hsa?164586調(diào)控MYH9的表達(dá)，發(fā)揮促進(jìn)NSCLC轉(zhuǎn)移的作用，作為NSCLC的治療靶點，成為潛在的治療藥物，其中，MYH9由RNApulldown實驗獲得，通過蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析、分子對接和RIP實驗驗證，piR?hsa?164586能夠正向調(diào)控MYH9的表達(dá)，通過分別對空白對照組(NC)、敲低piR?hsa?164586組(KD)和過表達(dá)piR?hsa?164586組(OE)進(jìn)行qRT?PCR、蛋白免疫印跡和組織免疫熒光染色實驗驗證，piR?hsa?164586和MYH9相互結(jié)合，能夠在NSCLC細(xì)胞株中上調(diào)MYH9的表達(dá)，驗證實驗過程為分別敲除piR?hsa?164586和MYH9后，通過Transwell實驗證實。

技術(shù)研發(fā)人員：徐文華,唐艷,孔曉穎,韓丹,張良,王曉敏,王崇旺
受保護(hù)的技術(shù)使用者：青島大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6