本發(fā)明涉及植物分子生物學(xué)領(lǐng)域，特別是涉及一種用于鑒別水稻細(xì)菌性條斑病抗性主效基因的引物對及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、水稻(學(xué)名：oryza?sativa?l.)屬于草本稻屬的一種，作為世界三大糧食作物(小麥、水稻和玉米)之一，養(yǎng)活了全球近三分之二的人口，在我國也有超過半數(shù)人以之為主糧。近幾十年來，各種水稻病害范圍的不斷擴(kuò)大和頻頻爆發(fā)，水稻產(chǎn)量和品質(zhì)也受到嚴(yán)重影響，糧食安全問題日益嚴(yán)重。水稻細(xì)菌性條斑病(bacterial?leafstreak，bls)簡稱細(xì)條病，是由革蘭氏陰性菌黃單胞菌水稻變種xanthomonas?oryzae?pv.oryzicola(簡稱xooc)侵染引起的。細(xì)條病是國內(nèi)調(diào)運(yùn)植物應(yīng)檢疫的危險性病害之一，目前亞洲和大洋洲一些國家將其列為重要的檢疫性水稻病害。水稻細(xì)菌性條斑病也是我國四大水稻病害(水稻紋枯病、白葉枯病、稻瘟病和細(xì)條病)之一，水稻細(xì)條病流行的因素主要包括病原物、感病品種和適宜發(fā)病的環(huán)境條件。

2、近年來，水稻細(xì)條病發(fā)病時間逐年變早，發(fā)病范圍不斷擴(kuò)大，發(fā)病程度也愈演愈烈。據(jù)研究調(diào)查，在自然條件下，細(xì)條病對感病品種會引起15-25％的減產(chǎn)，且發(fā)病嚴(yán)重的情況下，產(chǎn)量減少可達(dá)40-60％。該病的發(fā)生在輕病田減產(chǎn)10％-20％，在重病田減產(chǎn)高達(dá)50％-60％。人們常采用噻菌銅、噻唑鋅、葉枯唑、灰霜特、代森銨、農(nóng)用鏈霉素等藥劑去防治細(xì)條病的發(fā)生。但農(nóng)藥的濫用對生態(tài)環(huán)境會造成很大的危害，因此，隨著人們對食品安全和生態(tài)環(huán)境的保護(hù)意識不斷提高，利用分子生物學(xué)等手段培育無污染、無公害的抗病品種，提高植株的抗病性的方式，成為了控制該病害最經(jīng)濟(jì)有效和環(huán)保的途徑。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種用于鑒別水稻細(xì)菌性條斑病抗性主效基因的引物對及其應(yīng)用，以解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題。本發(fā)明發(fā)掘并利用水稻抗細(xì)菌性條斑病的主效基因(命名為bls3)，開發(fā)出可用于輔助育種的引物對，該引物對能夠有效區(qū)別抗細(xì)菌性條斑病的水稻品種和易感細(xì)菌性條斑病的水稻品種。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下方案：

3、本發(fā)明提供了一種用于鑒別水稻細(xì)菌性條斑病抗性的引物對，所述引物對包括如seq?id?no.1所示的上游引物和如seq?id?no.2所示的下游引物。

4、進(jìn)一步優(yōu)選的，所述引物對擴(kuò)增得到的分子標(biāo)記在于水稻第一條染色體上。

5、本發(fā)明提供了一種用于鑒別水稻細(xì)菌性條斑病抗性的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品中包括上述的引物對。

6、優(yōu)選的，所述產(chǎn)品包括試劑、試劑盒和芯片。

7、本發(fā)明提供了上述的引物對或上述的產(chǎn)品在鑒定水稻細(xì)菌性條斑病抗性中的應(yīng)用。

8、本發(fā)明提供了一種鑒定水稻細(xì)菌性條斑病抗性的方法，包括以下步驟：

9、以待測樣本的基因組為樣本模板dna，水稻rl6的基因組為陽性模板dna，以水稻9311的基因組為陰性模板dna；

10、將樣本模板dna、陽性模板dna和陰性模板dna分別與上述的引物對混合后，進(jìn)行pcr擴(kuò)增，得到擴(kuò)增產(chǎn)物的帶型，根據(jù)帶型判斷待測樣本對水稻細(xì)菌性條斑病抗性。

11、優(yōu)選的，當(dāng)所述樣本模板dna的帶型與所述陽性模板dna帶型相同時，判斷待測樣本為抗細(xì)菌性條斑病的水稻品種；當(dāng)所述樣本模板dna的帶型與所述陰性模板dna帶型相同時，判斷待測樣本為易感細(xì)菌性條斑病的水稻品種。

12、優(yōu)選的，所述pcr的反應(yīng)體系為：模板dna?1μl、上游引物0.8μl、下游引物0.8μl、bffuer?1μl、dntp?0.2μl和taq酶0.1μl。

13、優(yōu)選的，所述pcr的反應(yīng)程序為：94℃預(yù)變性5min，94℃變性30s，55℃-62℃退火30s，72℃延伸45s，72℃再延伸5min，35個循環(huán)。

14、本發(fā)明還提供了上述的引物對或上述的產(chǎn)品在水稻育種中的應(yīng)用。

15、本發(fā)明公開了以下技術(shù)效果：

16、1、通過本發(fā)明提供的引物對能夠定位水稻品種中抗細(xì)條病的主效基因。

17、2、本發(fā)明提供的引物對可以預(yù)測水稻植株的細(xì)菌性條斑病的抗性。因此，該引物對可以用于水稻品種或品系的基因型檢測，判斷水稻品種或品系是否具有細(xì)菌性條斑病抗性，進(jìn)而快速篩選抗病品種或品系用于水稻育種。

18、3、輔助育種選擇目標(biāo)明確，節(jié)約成本。在傳統(tǒng)育種方法中，一般首先要收集具有抗病基因的親本與栽培品種進(jìn)行一系列雜交，而且要對水稻品種進(jìn)行抗細(xì)菌性條斑病性狀的鑒定并進(jìn)行選擇育種，選育工作繁瑣、耗時，同時還受環(huán)境影響很大。然而，通過檢測抗細(xì)菌性條斑病主效基因位點(diǎn)，可以在苗期就鑒定出高抗病的單株，淘汰其他植株，不僅能夠節(jié)約生產(chǎn)成本，而且大大提高抗細(xì)條病水稻的選擇效率，極大地縮短水稻品種的育種周期。

技術(shù)特征：

1.一種用于鑒別水稻細(xì)菌性條斑病抗性的引物對，其特征在于，所述引物對包括如seqid?no.1所示的上游引物和如seq?id?no.2所示的下游引物。

2.一種用于鑒別水稻細(xì)菌性條斑病抗性的產(chǎn)品，其特征在于，所述產(chǎn)品中包括權(quán)利要求1所述的引物對。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的產(chǎn)品，其特征在于，所述產(chǎn)品包括試劑、試劑盒和芯片。

4.權(quán)利要求1所述的引物對或權(quán)利要求2或3所述的產(chǎn)品在鑒定水稻細(xì)菌性條斑病抗性中的應(yīng)用。

5.一種鑒定水稻細(xì)菌性條斑病抗性的方法，其特征在于，包括以下步驟：

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，當(dāng)所述樣本模板dna的帶型與所述陽性模板dna帶型相同時，判斷待測樣本為抗細(xì)菌性條斑病的水稻品種；當(dāng)所述樣本模板dna的帶型與所述陰性模板dna帶型相同時，判斷待測樣本為易感細(xì)菌性條斑病的水稻品種。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述pcr的反應(yīng)體系為：模板dna?1μl、上游引物0.8μl、下游引物0.8μl、bffuer?1μl、dntp?0.2μl和taq酶0.1μl。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述pcr的反應(yīng)程序為：94℃預(yù)變性5min，94℃變性30s，55℃-62℃退火30s，72℃延伸45s，72℃再延伸5min，35個循環(huán)。

9.權(quán)利要求1所述的引物對或權(quán)利要求2或3所述的產(chǎn)品在水稻育種中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及植物分子生物學(xué)領(lǐng)域，特別是涉及一種用于鑒別水稻細(xì)菌性條斑病抗性主效基因的引物對及其應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種用于鑒別水稻細(xì)菌性條斑病抗性的引物對，所述引物對包括如SEQ?ID?NO.1所示的上游引物和如SEQ?ID?NO.2所示的下游引物。本發(fā)明提供的引物對可以預(yù)測水稻植株對細(xì)菌性條斑病的抗性。該引物對能夠用于水稻品種或品系的基因型檢測，判斷水稻品種或品系是否具有細(xì)菌性條斑病抗性，進(jìn)而快速篩選抗病品種或品系。由此可見，本發(fā)明提供的引物對能夠用于水稻育種。

技術(shù)研發(fā)人員：劉芳,萬瑤,鄧子秋,唐敏,黃潔怡,韋璇,覃雪梅
受保護(hù)的技術(shù)使用者：廣西大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/23