本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，尤其是涉及一種耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌噬菌體及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、肺炎克雷伯菌作為臨床常見機會致病菌，可引起人體各系統(tǒng)、多部位感染，或定植于患者周圍環(huán)境及各類物表，造成院內(nèi)傳播、交叉感染。隨著抗生素的快速發(fā)展和廣泛使用，臨床上肺炎克雷伯菌的感染率和耐藥性都在逐年攀升，其中耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌導(dǎo)致的感染由于其針對性的抗生素選擇非常有限，在治療上變得愈發(fā)棘手。現(xiàn)有多種噬菌體展現(xiàn)了卓越的殺菌能力，其作為細菌的天然捕手，在醫(yī)學(xué)界早期抗感染治療中有過重要應(yīng)用。其對細菌高度專一、殺傷力強，噬菌體治療作為常規(guī)抗生素應(yīng)用的潛在輔助手段，其價值被重新定義。但是由于細菌可很快衍生出抗噬菌體的機制，因此分離出更多的可用于臨床的新型噬菌體愈發(fā)重要。

2、本發(fā)明通過實驗室大量篩選獲得本株噬菌體，其優(yōu)勢有：第一、廣泛性，對多株肺炎克雷伯菌有強殺滅能力；第二、與抗生素聯(lián)用后，抗生素mic值由抗性轉(zhuǎn)為敏感性濃度，同時可抑制噬菌體抗性細菌出現(xiàn)，達到快速有效的殺菌效果。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，提出一種耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌噬菌體及應(yīng)用，通過對該噬菌體進行生物學(xué)特性研究、形態(tài)學(xué)等分析，發(fā)現(xiàn)該噬菌體作為一種新的潛在治療劑和殺菌劑具有廣闊的應(yīng)用前景，同時本發(fā)明還通過研究其與碳青霉烯類抗生素美羅培南聯(lián)合應(yīng)用后體外協(xié)同效果，為臨床耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌的感染控制及相關(guān)應(yīng)用提供新的可行性辦法。

2、為達到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的：

3、第一方面，一種耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌噬菌體phk-203，分類命名為：肺炎克雷伯氏菌噬菌體klebsiella?pneumoniae?bacteriophage，于2024年8月8日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心(china?general?microbiological?culture?collectioncenter,cgmcc)，保藏地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏編號為cgmcc?no.46098。

4、本發(fā)明的耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌噬菌體phk-203有正多面體頭部，直徑約55nm，有不可收縮長尾，尾長約200nm，根據(jù)病毒分類國際委員會(ictv)的分類標準，形態(tài)符合長尾噬菌體科(siphoviridae)特點。

5、本發(fā)明的耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌噬菌體phk-203與細菌吸附后，10min即進入爆發(fā)期，爆發(fā)時間持續(xù)30min以上，1h效價即可達到109pfu/ml，具有較強裂解復(fù)制能力。

6、本發(fā)明的耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌噬菌體phk-203在4-50℃條件下效價保持穩(wěn)定，60℃條件下處理1小時后，存活率仍＞50％，80℃條件下仍未完全失活；在ph?6～12區(qū)間內(nèi)效價保持穩(wěn)定，在ph≥14條件仍不完全失活，代表該噬菌體對溫度與環(huán)境酸堿度有良好的耐受性，在高溫與強堿性條件下對宿主細菌仍可保持一定的裂解作用。

7、對本發(fā)明的耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌噬菌體phk-203的裂菌譜進行了測定，其對碳青霉烯耐藥肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant?klebsiella?pneumonia，crkp)裂解率達40％(可裂解10株中的4株)，對非多重耐藥肺炎克雷伯菌裂解率達66.7％(可裂解12株中的8株)。

8、本發(fā)明的耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌噬菌體phk-203在moi＝0.01條件下，可將美羅培南mic值由原始的128μg/ml降低至≤2μg/ml；在moi＝0.1與1條件下，可降低美羅培南mic值至1μg/ml。噬菌體phk-203在moi＝0.01條件下，與2μg/ml美羅培南聯(lián)用，8小時內(nèi)可使培養(yǎng)體系內(nèi)耐藥菌濃度減低4×log10cfu/ml。將同比例噬菌體提前1小時加入菌液進行預(yù)處理后，再與2μg/ml美羅培南聯(lián)用，7小時內(nèi)即可完全殺死體系內(nèi)細菌。且噬菌體與抗生素聯(lián)合用藥組觀察24小時后均未見細菌再次生長。

9、第二方面，本發(fā)明還提供了上述噬菌體phk-203在制備用于防治耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌的制劑中的應(yīng)用。

10、作為優(yōu)先實施方式，所述制劑為抗菌藥物和/或環(huán)境消殺劑。

11、第三方面，本發(fā)明提供了上述噬菌體phk-203與碳青霉烯類抗生素聯(lián)合在制備用于防治耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌的制劑中的應(yīng)用。

12、作為優(yōu)先實施方式，所述碳青霉烯類抗生素為美羅培南。

13、作為優(yōu)先實施方式，所述制劑為抗菌藥物和/或環(huán)境消殺劑。

14、第四方面，本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，其主要成分包括噬菌體phk-203與碳青霉烯類抗生素。

15、作為優(yōu)先實施方式，所述碳青霉烯類抗生素為美羅培南。

16、第五方面，本發(fā)明還提供了上述藥物組合物在制備用于防治耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌的制劑中的應(yīng)用。

17、作為優(yōu)先實施方式，所述碳青霉烯類抗生素為美羅培南。

18、作為優(yōu)先實施方式，所述制劑為抗菌藥物和/或環(huán)境消殺劑。

19、相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下優(yōu)勢：

20、本發(fā)明提供的噬菌體phk-203具有裂解增殖能力強、裂解宿主菌范圍廣、生存環(huán)境耐受性良好以及可降低耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌對美羅培南的mic值等優(yōu)點，對泛耐藥肺炎克雷伯菌有較強的殺滅能力，為噬菌體作為肺炎克雷伯菌所致感染的抗生素的補充或替代療法打下研究基礎(chǔ)，亦可用于開發(fā)研制環(huán)境物表滅菌劑，具有良好的臨床應(yīng)用前景。

技術(shù)特征：

1.一種耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌噬菌體phk-203，其特征在于：所述噬菌體于2024年8月8日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心(china?general?microbiologicalculture?collection?center,cgmcc)，保藏地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏編號為cgmcc?no.46098。

2.權(quán)利要求1所述的耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌噬菌體phk-203在制備用于防治耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌的制劑中的應(yīng)用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于：所述制劑為抗菌藥物和/或環(huán)境消殺劑。

4.權(quán)利要求1所述的耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌噬菌體phk-203與碳青霉烯類抗生素聯(lián)合在制備用于防治耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌的制劑中的應(yīng)用。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于：所述碳青霉烯類抗生素為美羅培南。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于：所述制劑為抗菌藥物和/或環(huán)境消殺劑。

7.一種藥物組合物，其特征在于：其有效成分包括權(quán)利要求1所述的耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌噬菌體phk-203與碳青霉烯類抗生素。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于：所述碳青霉烯類抗生素為美羅培南。

9.權(quán)利要求7或8所述的藥物組合物在制備用于防治耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌的制劑中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于：所述碳青霉烯類抗生素為美羅培南，優(yōu)選地，所述制劑為抗菌藥物和/或環(huán)境消殺劑。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌噬菌體及應(yīng)用，本發(fā)明通過對該噬菌體進行生物學(xué)特性研究、形態(tài)學(xué)等分析，發(fā)現(xiàn)該噬菌體作為一種新的潛在治療劑和殺菌劑具有廣闊的應(yīng)用前景，同時本發(fā)明還通過研究其與碳青霉烯類抗生素美羅培南聯(lián)合應(yīng)用后體外協(xié)同效果，為臨床耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌的感染控制及相關(guān)應(yīng)用提供新的可行性辦法。

技術(shù)研發(fā)人員：盧靜,賈宇馳,吳存瑾
受保護的技術(shù)使用者：天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30