本發(fā)明涉及植物化學(xué)，特別涉及一種繡球防風(fēng)中半日花烷型二萜類化合物及其分離方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、繡球防風(fēng)(leucas?ciliata?benth.)又名繡球草、拂風(fēng)草，為唇形科繡球防風(fēng)屬草本植物，主要分布于亞熱帶地區(qū)，在我國(guó)分布于廣西、四川、貴州、云南等地。全草均可入藥，具有疏肝活血、祛風(fēng)明目和解毒之功效，主治婦女血瘀經(jīng)閉，脅肋疼痛，小兒雀目，青盲翳障，癰疽腫毒，楊梅結(jié)毒，疥癬，皮疹等。

2、關(guān)于繡球防風(fēng)的化學(xué)成分研究報(bào)道很少，主要為黃酮(苷)類、二萜類、酚酸類等多種類的化合物，藥理學(xué)研究表明，其中許多化合物具有良好的生物活性，包括如抗炎、抗菌、抗氧化、抗腫瘤、α-葡萄糖苷酶抑制等，為新藥研發(fā)提供了前體化合物篩選。部分半日花烷型二萜類化合物具有抗炎作用，但效果欠佳。繡球防風(fēng)中含有大量具有生活活性的化合物，本發(fā)明旨在對(duì)繡球防風(fēng)化學(xué)成分進(jìn)一步分離研究，以期得到新結(jié)構(gòu)的具有顯著抗炎作用的半日花烷型二萜類化合物，充分發(fā)揮繡球防風(fēng)的藥用價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、鑒于此，本發(fā)明提出一種繡球防風(fēng)中半日花烷型二萜類化合物，具有顯著的抗炎作用，并提供目標(biāo)化合物的分離方法和應(yīng)用。

2、本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：

3、一種繡球防風(fēng)中半日花烷型二萜類化合物，碳骨架為19個(gè)碳，結(jié)構(gòu)中含有四氫呋喃螺環(huán)，分別為化合物i和化合物ii，其結(jié)構(gòu)分別為：

4、

5、本發(fā)明還提供了化合物i和ii的分離方法，包括以下步驟：

6、(1)將干燥繡球防風(fēng)的莖葉粉碎，將繡球防風(fēng)粉末使用乙醇溶液加熱50～60℃提取，得到提取液，減壓濃縮得粗提物；

7、(2)將粗提物用水稀釋制成懸浮液后，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，減壓濃縮得浸膏；

8、(3)取步驟(2)乙酸乙酯萃取得到的浸膏，先經(jīng)硅膠柱層析，采用二氯甲烷-甲醇混合溶劑作為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，洗脫梯度為(10:1)～(1:10)，根據(jù)極性大小共得到7個(gè)組分，即fr.1～fr.7；

9、(4)將fr.2先經(jīng)正相硅膠柱層析，采用石油醚-丙酮混合溶劑作為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，洗脫梯度為(10:1)～(1:1)，流分減壓濃縮得組分fr.2a-fr.2d；

10、(5)將fr.2a經(jīng)sephadex?lh-20凝膠柱層析，洗脫劑為meoh，洗脫3～6個(gè)柱體積，減壓濃縮后再經(jīng)高效液相色譜hplc制備，依次得到化合物i和ii。

11、優(yōu)選的，步驟(1)中，所述提取次數(shù)為3次以上，每次提取1～3h，合并提取液；步驟(2)中，依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取2次以上。

12、優(yōu)選的，步驟(1)中，所述乙醇溶液的體積分?jǐn)?shù)75％～95％，其用量為每千克繡球防風(fēng)粉末用2～3l乙醇溶液。

13、優(yōu)選的，步驟(2)中水的用量為每100克粗提物加水300～400ml，每次萃取的有機(jī)溶劑的體積用量是水體積的1.2-1.3倍。

14、優(yōu)選的，步驟(3)中，二氯甲烷-甲醇混合溶劑的洗脫梯度為20:1、10:1、8:1、5:1、1:1、1:5、1:10，每個(gè)梯度收集3個(gè)柱體積，每個(gè)梯度得到一個(gè)組分，共得到7個(gè)組分，即fr.1～fr.7。

15、優(yōu)選的，步驟(4)中，石油醚-丙酮混合溶劑的洗脫梯度為10:1、8:1、5:1、1:1，每個(gè)梯度洗脫2～5個(gè)柱體積。

16、優(yōu)選的，步驟(5)中，高效液相色譜的條件為：色譜柱waters?c18，流速為2ml/min，流動(dòng)相為體積比58:42的mecn:h2o。

17、優(yōu)選的，所述繡球防風(fēng)為采集于海南霸王嶺的繡球防風(fēng)。

18、本發(fā)明通過藥理活性實(shí)驗(yàn)，確認(rèn)所得化合物i和ii具有良好的抗炎效果，提示化合物i和ii在制備預(yù)防或治療炎癥的藥物中具有良好的應(yīng)用前景。

19、本發(fā)明還提供所述繡球防風(fēng)中半日花烷型二萜類化合物在制備預(yù)防或治療炎癥的藥物中的應(yīng)用。

20、優(yōu)選的，所述炎癥包括系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)綜合癥、支氣管炎、肺炎、胃炎、腸炎和肝炎。

21、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

22、本發(fā)明從繡球防風(fēng)中提取分離出碳骨架為19個(gè)碳，含四氫呋喃螺環(huán)的新穎半日花烷型二萜類化合物i和ii，兩者為一對(duì)差向異構(gòu)體。通過藥物活性實(shí)驗(yàn)表明兩個(gè)化合物均具有明顯的抗炎效果。本發(fā)明所述化合物i和ii是通過溶劑浸提、蒸餾水溶解分散、極性溶劑萃取、溶劑梯度洗脫和液相色譜分離等多級(jí)分離提取方法，從繡球防風(fēng)浸膏中得到含四氫呋喃螺環(huán)特征的新穎骨架半日花烷型二萜類化合物。

技術(shù)特征：

1.一種繡球防風(fēng)中半日花烷型二萜類化合物，其特征在于，所述化合物碳骨架為19個(gè)碳，結(jié)構(gòu)中含有四氫呋喃螺環(huán)，所述化合物的結(jié)構(gòu)式如式i或ii所示：

2.權(quán)利要求1所述繡球防風(fēng)中半日花烷型二萜類化合物的分離方法，其特征在于，包括以下步驟：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的繡球防風(fēng)中半日花烷型二萜類化合物的分離方法，其特征在于，步驟(1)中，所述提取次數(shù)為3次以上，每次提取1～3h，合并提取液；步驟(2)中，依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取2次以上。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的繡球防風(fēng)中半日花烷型二萜類化合物的分離方法，其特征在于，步驟(1)中，所述乙醇溶液的體積分?jǐn)?shù)75％～95％，其用量為每千克繡球防風(fēng)粉末用2～3l乙醇溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的繡球防風(fēng)中半日花烷型二萜類化合物的分離方法，其特征在于，步驟(2)中，水的用量為每100克粗提物加水300～400ml，每次萃取的有機(jī)溶劑的體積用量是水體積的1.2～1.3倍。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的繡球防風(fēng)中半日花烷型二萜類化合物的分離方法，其特征在于，步驟(3)中，二氯甲烷-甲醇混合溶劑的洗脫梯度為20:1、10:1、8:1、5:1、1:1、1:5、1:10，每個(gè)梯度收集3個(gè)柱體積，每個(gè)梯度得到一個(gè)組分，共得到7個(gè)組分，即fr.1～fr.7。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的繡球防風(fēng)中半日花烷型二萜類化合物的分離方法，其特征在于，步驟(4)中，石油醚-丙酮混合溶劑的洗脫梯度為10:1、8:1、5:1、1:1，每個(gè)梯度洗脫2～5個(gè)柱體積；步驟(5)中，高效液相色譜的條件為：色譜柱waters?c18，流速為2ml/min，流動(dòng)相為體積比58:42的mecn:h2o。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的繡球防風(fēng)中半日花烷型二萜類化合物的分離方法，其特征在于，所述繡球防風(fēng)為采集于海南霸王嶺的繡球防風(fēng)。

9.權(quán)利要求1所述的繡球防風(fēng)中半日花烷型二萜類化合物在制備預(yù)防或治療炎癥的藥物中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述炎癥包括系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)綜合癥、支氣管炎、肺炎、胃炎、腸炎和肝炎。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于植物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種繡球防風(fēng)中半日花烷型二萜類化合物及其分離方法和應(yīng)用。本發(fā)明將繡球防風(fēng)通過乙醇浸提、蒸餾水分散、極性溶劑萃取、有機(jī)溶劑梯度洗脫和液相色譜制備等多級(jí)分離步驟，得到新穎骨架結(jié)構(gòu)的化合物I和II。通過藥物活性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明從繡球防風(fēng)中分離得到的半日花烷型二萜類化合物I和II具有明顯的抗炎活性，表明其在制備預(yù)防或治療炎癥藥物方面具有良好的應(yīng)用前景。該方法簡(jiǎn)單可行、成本低廉。

技術(shù)研發(fā)人員：陳光英,況家才,李小寶,余章昕
受保護(hù)的技術(shù)使用者：海南師范大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9