本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥,具體涉及cnpy2作為新靶標(biāo)在糖尿病腎病診斷和治療中的應(yīng)用。
背景技術(shù):
1、糖尿病腎病(diabetic?nephropathy,dn)是糖尿病最為常見、嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一,其發(fā)生率逐年升高,已成為我國慢性腎臟病(chronic?kidney?disease,ckd)的主要病因,也是進(jìn)展為終末期腎病(end?stage?renal?disease,esrd)的重要危險因素之一,致死率較高。
2、線粒體相關(guān)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜(mitochondria-associated?endoplasmic?reticulummembrane,mam)是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體在形態(tài)和功能上的動態(tài)連接區(qū)域,能夠調(diào)控包括脂質(zhì)代謝、ca2+轉(zhuǎn)運、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic?reticulum?stress,ers)、線粒體損傷及功能障礙以及自噬在內(nèi)的多種細(xì)胞過程。最新的研究還表明mam可能在dn腎損傷進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。
3、腎小管作為富含線粒體的腎臟結(jié)構(gòu),更容易受到線粒體損傷的影響。線粒體功能障礙被認(rèn)為是糖尿病腎小管損傷中的重要原因之一。高糖環(huán)境下,腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)線粒體活性氧蓄積、gsh耗竭導(dǎo)致氧化還原狀態(tài)失衡,最終導(dǎo)致線粒體氧化損傷和鐵死亡。鐵死亡是一種新型的程序性細(xì)胞死亡方式,以細(xì)胞內(nèi)二價鐵滯留、還原型谷胱甘肽(glutathione,gsh)耗竭以及依賴鐵的脂質(zhì)活性氧(reactive?oxygen?species,ros)累積為主要特征,參與了多種疾病的病理生理過程,比如癌癥、神經(jīng)退行性疾病、代謝性疾病、缺血再灌注損傷等疾病。越來越多的研究表明,腎小管上皮細(xì)胞鐵死亡促進(jìn)dn的發(fā)生發(fā)展,但其具體調(diào)控機(jī)制仍不清楚。因此,闡明腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生鐵死亡的分子機(jī)制,對dn的靶向治療具有重要意義。
4、canopy成纖維細(xì)胞生長因子信號調(diào)節(jié)因子2(canopy?fgf?signaling?regulator2,cnpy2)是一種定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的新型血管生成生長因子,在ers中發(fā)揮重要調(diào)控作用,參與包括腫瘤、心血管損傷、肝損傷等多種疾病的發(fā)生發(fā)展。既往研究顯示,cnpy2是ers中未折疊蛋白的蛋白激酶r樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(protein?kinase?rna-like?endoplasmic?reticulumkinase,perk)通路的關(guān)鍵啟動子,能夠通過調(diào)節(jié)perk及其介導(dǎo)的下游信號通路進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞生長、遷移和凋亡等多種細(xì)胞過程,但其在dn中的作用尚未見報道。dn的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,缺乏特異性的干預(yù)靶點,尚無有效治療手段。因此,篩選dn的新治療靶點是干預(yù)其進(jìn)展的潛在治療手段。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題和不足,本發(fā)明的目的在于提供cnpy2作為新靶標(biāo)在糖尿病腎病診斷和治療中的應(yīng)用。
2、基于上述目的,本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
3、本發(fā)明第一方面提供了一種可用于糖尿病腎病輔助診斷的生物標(biāo)志物,所述生物標(biāo)志物為cnpy2基因或cnpy2蛋白。
4、通過免疫組化、western?blot等試驗檢測了dn患者腎組織、db/db小鼠腎組織以及體外高糖培養(yǎng)的hk-2細(xì)胞中cnpy2的表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)cnpy2在dn患者腎組織、db/db小鼠腎組織以及體外高糖培養(yǎng)的hk-2細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)。
5、本發(fā)明第二方面提供了cnpy2基因或cnpy2蛋白作為篩選預(yù)防、緩解或治療糖尿病腎病藥物的藥物靶標(biāo)的應(yīng)用。
6、本發(fā)明第三方面提供了抑制cnpy2表達(dá)和/或功能的物質(zhì)在制備預(yù)防、緩解或治療糖尿病腎病的藥物中的應(yīng)用。
7、根據(jù)上述的應(yīng)用,優(yōu)選地,所述抑制cnpy2表達(dá)和/或功能的物質(zhì)為cnpy2敲減腺相關(guān)病毒、特異靶向cnpy2基因的sirna、特異靶向cnpy2基因的shrna或cnpy2蛋白的抑制劑。
8、本發(fā)明第四方面提供了一種藥物,所述藥物用于預(yù)防、緩解或治療糖尿病腎病,所述藥物中含有抑制cnpy2表達(dá)和/或功能的物質(zhì)。
9、根據(jù)上述的藥物,優(yōu)選地,所述抑制cnpy2表達(dá)和/或功能的物質(zhì)為cnpy2敲減腺相關(guān)病毒、特異靶向cnpy2基因的sirna、特異靶向cnpy2基因的shrna或cnpy2蛋白的抑制劑。
10、根據(jù)上述藥物,優(yōu)選地,所述藥物中還含有藥學(xué)上可接受的載體或輔料。
11、根據(jù)上述的藥物,優(yōu)選地,所述載體/輔料包括(但并不限于):稀釋劑、賦形劑如乳糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、淀粉、水等、填充劑如淀粉、蔗糖等;粘合劑如單糖漿、葡萄糖溶液、淀粉溶液、纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮;濕潤劑如甘油;崩解劑如干淀粉、海藻酸鈉、海帶多糖粉末、瓊脂粉末、碳酸鈣和碳酸氫鈉;吸收促進(jìn)劑季銨化合物、十二烷基硫酸鈉等;表面活性劑如聚氧化乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、十二烷基硫酸鈉、硬脂酸單甘油酯、十六烷醇等;致濕劑如甘油、淀粉等;吸附載體如淀粉、乳糖、斑脫土、硅膠、高嶺土和皂粘土等;潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣和鎂、聚乙二醇、硼酸粉末等。
12、本發(fā)明第五方面提供了cnpy2基因或cnpy2蛋白的檢測試劑在制備用于糖尿病腎病輔助診斷的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
13、根據(jù)上述應(yīng)用,優(yōu)選地,所述產(chǎn)品通過rt-pcr、實時定量pcr、原位雜交、northernblot、western?blot、芯片、高通量測序平臺、免疫組織化學(xué)、組織免疫熒光或酶聯(lián)免疫吸附檢測樣本中cnpy2基因或其編碼的蛋白的表達(dá)水平。
14、根據(jù)上述應(yīng)用,優(yōu)選地,所述產(chǎn)品的檢測樣本為細(xì)胞或組織;所述產(chǎn)品為芯片、制劑或試劑盒。
15、本發(fā)明第六方面提供了一種用于糖尿病腎病輔助診斷的試劑盒,所述試劑盒中含有cnpy2基因或編碼的蛋白的檢測試劑。
16、根據(jù)上述試劑盒,優(yōu)選地,所述檢測試劑通過rt-pcr、實時定量pcr、原位雜交、northern?blot、western?blot、芯片、高通量測序平臺、免疫組織化學(xué)、組織免疫熒光或酶聯(lián)免疫吸附檢測樣本中cnpy2基因或其編碼的蛋白的表達(dá)水平。
17、與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明的有益效果是:
18、(1)本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)cnpy2在dn患者腎小管中表達(dá)上調(diào),cnpy2在db/db小鼠腎小管中表達(dá)上調(diào),cnpy2在體外高糖培養(yǎng)的hk-2細(xì)胞中表達(dá)上調(diào);因此cnpy2可作為糖尿病腎病的輔助診斷指標(biāo),來輔助診斷糖尿病腎病。
19、(2)本發(fā)明采用cnpy2敲減腺相關(guān)病毒以及其特異性小干擾rna抑制cnpy2表達(dá)或活性,可顯著改善db/db小鼠腎小管病理損傷、改善腎小管上皮細(xì)胞中mam完整性、減輕腎小管上皮細(xì)胞鐵死亡、ers和線粒體損傷;因此,cnpy2可以作為藥物、藥物靶點或基因治療中的靶基因,應(yīng)用于糖尿病腎病的預(yù)防、緩解或/和治療,能夠為糖尿病腎病的防治提供新策略,同時,也將為進(jìn)一步的研究糖尿病腎病的病因病理機(jī)制和相應(yīng)的防治策略提供新方向。
1.cnpy2基因或cnpy2蛋白作為篩選預(yù)防、緩解或治療糖尿病腎病藥物的藥物靶標(biāo)的應(yīng)用。
2.抑制cnpy2表達(dá)和/或功能的物質(zhì)在制備預(yù)防、緩解或治療糖尿病腎病的藥物中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用,其特征在于,所述抑制cnpy2表達(dá)和/或功能的物質(zhì)為cnpy2敲減腺相關(guān)病毒、特異靶向cnpy2基因的sirna、特異靶向cnpy2基因的shrna或cnpy2蛋白的抑制劑。
4.一種藥物,其特征在于,所述藥物用于預(yù)防、緩解或治療糖尿病腎病,所述藥物中含有抑制cnpy2表達(dá)和/或功能的物質(zhì)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物,其特征在于,所述抑制cnpy2表達(dá)和/或功能的物質(zhì)為cnpy2敲減腺相關(guān)病毒、特異靶向cnpy2基因的sirna、特異靶向cnpy2基因的shrna或cnpy2蛋白的抑制劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物,其特征在于,所述藥物中還含有藥學(xué)上可接受的載體或輔料。
7.cnpy2基因或cnpy2蛋白的檢測試劑在制備用于糖尿病腎病輔助診斷的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其特征在于,所述產(chǎn)品通過rt-pcr、實時定量pcr、原位雜交、northern?blot、western?blot、芯片、高通量測序平臺、免疫組織化學(xué)、組織免疫熒光或酶聯(lián)免疫吸附檢測樣本中cnpy2基因或cnpy2蛋白的表達(dá)水平。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8任一所述的應(yīng)用,其特征在于,所述產(chǎn)品的檢測樣本為細(xì)胞或組織;所述產(chǎn)品為芯片、制劑或試劑盒。
10.一種用于糖尿病腎病輔助診斷的試劑盒,所述試劑盒中含有cnpy2基因或cnpy2蛋白的檢測試劑。