本發(fā)明涉及生物技術(shù)，特別涉及一種巖藻糖苷酶的應(yīng)用，特別是一種特異性作用于α-1,2糖苷鍵、α-1,3糖苷鍵、α-1,4糖苷鍵的巖藻糖苷酶的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、α巖藻糖廣泛存在于hmo、糖蛋白和糖脂中，在不同的生物過程如免疫識(shí)別、遺傳和神經(jīng)發(fā)育、宿主和腸道菌群互作中發(fā)揮重要生理功能。α巖藻糖苷酶可特異性地水解釋放α巖藻糖，從而影響生理功能。

2、巖藻糖苷酶在糖類分析中具有重要應(yīng)用。在對(duì)疾病糖代謝進(jìn)行糖組學(xué)分析中，巖藻糖苷酶可從糖譜進(jìn)行mody糖尿病的診斷，解決基因?qū)用嬖\斷的缺陷。在由植物、動(dòng)物糖蛋白導(dǎo)致的過敏反應(yīng)中，巖藻糖苷酶可特異性識(shí)別和水解過敏原的n-糖鏈，從而輔助診斷和治療。由于巖藻糖基在不同生物大分子中的存在方式不同，不同的巖藻糖修飾具有特性的作用或影響，因此，對(duì)特定巖藻糖修飾具有專一性的α巖藻糖苷酶具有潛在的分子診斷價(jià)值。巖藻糖苷酶的特異性與其蛋白結(jié)構(gòu)有關(guān)，較難通過氨基酸序列預(yù)測(cè)其特異性。目前已鑒定的α巖藻糖苷酶有可用于血型抗原h(huán)的α1,2巖藻糖苷酶，可作用于路易斯寡糖抗原的α1,3/4巖藻糖苷酶，可作用于唾液酸修飾的路易斯寡糖抗原的α1,3/4巖藻糖苷酶，可作用于二糖的α1,3或者α1,4巖藻糖苷酶。發(fā)掘具有新的特異性的巖藻糖苷酶具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明的目的在于提供巖藻糖苷酶的應(yīng)用。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

3、本發(fā)明第一方面提供巖藻糖苷酶pgoldgh29c在制備檢測(cè)探針中的應(yīng)用，所述檢測(cè)探針用于檢測(cè)樣品中的所述巖藻糖基二糖，所述巖藻糖苷酶的氨基酸序列如seq?id?no.1所示，所述巖藻糖基二糖包含糖苷鍵連接的第一單糖基和第二單糖基，所述第一單糖基為巖藻糖基團(tuán)；所述糖苷鍵包含α-1,2糖苷鍵、α-1,3糖苷鍵、α-1,4糖苷鍵的至少一種。

4、其中，seq?id?no.1為：

5、mkysfvtilflalslqlgygqdlilpvpsnqpssaqqkqiarkygmfihfgintfhdqewtdgskpassyrptaidadqwiktakdagmkyvilvakhhegfclwdskyteydvansgnktnvieevakackkydiglglyyslwdrkvnadvkdktldaayneymikqlnelidivqpythivefwfdggwekeherwpareiyqtiksrepecqiginwtiglpenpdahpvlpenqkegypiryfpsdfrlgdpylpadndpklfshdgklyympwesticiserwfynttdkkyktveeltglyhqctkndnililncppnregkirdadvtllkelrkkiqm。

6、本發(fā)明提供了巖藻糖苷酶pgoldgh29c在制備巖藻糖基二糖檢測(cè)探針中的應(yīng)用，其中，巖藻糖基二糖為含有α-1,2糖苷鍵、α-1,3糖苷鍵、或α-1,4糖苷鍵的巖藻糖基二糖。所述巖藻糖苷酶對(duì)含有α-1,2糖苷鍵、α-1,3糖苷鍵、或α-1,4糖苷鍵的巖藻糖基二糖有更強(qiáng)的催化水解作用，可以更有效地切割由α-1,2糖苷鍵、α-1,3糖苷鍵、或α-1,4糖苷鍵連接的巖藻糖基團(tuán)，使用該檢測(cè)探針可以檢測(cè)待測(cè)樣品中是否存在含有α-1,2糖苷鍵、α-1,3糖苷鍵、或α-1,4糖苷鍵的巖藻糖基二糖。

7、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述第二單糖基選自半乳糖基團(tuán)、乙?；咸烟腔鶊F(tuán)中的至少一種。

8、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述樣品中的糖類包含一種或多種二糖。其中，二糖是指本領(lǐng)域技術(shù)人員一般認(rèn)知中的二糖，即由二分子的單糖通過糖苷鍵形成的糖，對(duì)單糖和糖苷鍵沒有特別限定。

9、本發(fā)明第二方面提供巖藻糖苷酶pgoldgh29c在制備檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用，所述檢測(cè)試劑盒用于檢測(cè)樣品中的所述巖藻糖基二糖，所述巖藻糖苷酶的氨基酸序列如seq?idno.1所示，所述巖藻糖基二糖包含糖苷鍵連接的第一單糖基和第二單糖基，所述第一單糖基為巖藻糖基團(tuán)；所述糖苷鍵包含α-1,2糖苷鍵、α-1,3糖苷鍵、α-1,4糖苷鍵的至少一種。

10、其中，seq?id?no.1為：

11、mkysfvtilflalslqlgygqdlilpvpsnqpssaqqkqiarkygmfihfgintfhdqewtdgskpassyrptaidadqwiktakdagmkyvilvakhhegfclwdskyteydvansgnktnvieevakackkydiglglyyslwdrkvnadvkdktldaayneymikqlnelidivqpythivefwfdggwekeherwpareiyqtiksrepecqiginwtiglpenpdahpvlpenqkegypiryfpsdfrlgdpylpadndpklfshdgklyympwesticiserwfynttdkkyktveeltglyhqctkndnililncppnregkirdadvtllkelrkkiqm。

12、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述第二單糖基選自半乳糖基團(tuán)、乙?；咸烟腔鶊F(tuán)中的至少一種。

13、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述樣品中的糖類包含一種或多種二糖。其中，二糖是指本領(lǐng)域技術(shù)人員一般認(rèn)知中的二糖，即由二分子的單糖通過糖苷鍵形成的糖，對(duì)單糖和糖苷鍵沒有特別限定。

14、本發(fā)明第三方面提供一種檢測(cè)方法，所述檢測(cè)方法用于樣品中的巖藻糖基二糖，所述方法包括：

15、使用巖藻糖苷酶pgoldgh29c與樣品進(jìn)行酶解反應(yīng)；

16、分析酶解反應(yīng)的產(chǎn)物；

17、所述巖藻糖苷酶的氨基酸序列如seq?id?no.1所示，所述巖藻糖基二糖包含糖苷鍵連接的第一單糖基和第二單糖基，所述第一單糖基為巖藻糖基團(tuán)；所述糖苷鍵包含α-1,2糖苷鍵、α-1,3糖苷鍵、α-1,4糖苷鍵中的至少一種。

18、其中，seq?id?no.1為：

19、mkysfvtilflalslqlgygqdlilpvpsnqpssaqqkqiarkygmfihfgintfhdqewtdgskpassyrptaidadqwiktakdagmkyvilvakhhegfclwdskyteydvansgnktnvieevakackkydiglglyyslwdrkvnadvkdktldaayneymikqlnelidivqpythivefwfdggwekeherwpareiyqtiksrepecqiginwtiglpenpdahpvlpenqkegypiryfpsdfrlgdpylpadndpklfshdgklyympwesticiserwfynttdkkyktveeltglyhqctkndnililncppnregkirdadvtllkelrkkiqm。

20、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述第二單糖基選自半乳糖基團(tuán)、乙?；咸烟腔鶊F(tuán)中的至少一種。

21、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述酶解反應(yīng)在ph4-6下反應(yīng)。

22、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述酶解反應(yīng)在35-40℃下進(jìn)行。

23、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述酶解反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)為3-6h。

24、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，酶解反應(yīng)體系中所述巖藻糖苷酶的濃度為0.025-10μm。

25、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述樣品的濃度為1-10mm。

26、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述分析酶解反應(yīng)的產(chǎn)物包含通過硅膠薄層層析板、高效液相色譜、離子色譜、質(zhì)譜中的至少一種分析酶解反應(yīng)的產(chǎn)物。

27、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述樣品中的糖類包含一種或多種二糖。其中，二糖是指本領(lǐng)域技術(shù)人員一般認(rèn)知中的二糖，即由二分子的單糖通過糖苷鍵形成的糖，對(duì)單糖和糖苷鍵沒有特別限定。

28、本發(fā)明第四方面提供巖藻糖苷酶pgoldgh29c在降解巖藻糖基二糖中的應(yīng)用，所述降解巖藻糖基二糖包括以所述巖藻糖苷酶為催化劑，催化底物進(jìn)行酶解反應(yīng)，所述巖藻糖苷酶的氨基酸序列如seq?id?no.1所示，所述巖藻糖基二糖包含糖苷鍵連接的第一單糖基和第二單糖基，所述第一單糖基為巖藻糖基團(tuán)，所述糖苷鍵包含α-1,2糖苷鍵、α-1,3糖苷鍵、α-1,4糖苷鍵的至少一種。

29、其中，seq?id?no.1為：

30、mkysfvtilflalslqlgygqdlilpvpsnqpssaqqkqiarkygmfihfgintfhdqewtdgskpassyrptaidadqwiktakdagmkyvilvakhhegfclwdskyteydvansgnktnvieevakackkydiglglyyslwdrkvnadvkdktldaayneymikqlnelidivqpythivefwfdggwekeherwpareiyqtiksrepecqiginwtiglpenpdahpvlpenqkegypiryfpsdfrlgdpylpadndpklfshdgklyympwesticiserwfynttdkkyktveeltglyhqctkndnililncppnregkirdadvtllkelrkkiqm。

31、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述第二單糖基選自半乳糖基團(tuán)、乙酰基葡萄糖基團(tuán)中的至少一種。

32、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述酶解反應(yīng)在ph4-6下進(jìn)行。

33、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述酶解反應(yīng)在35-40℃下進(jìn)行。

34、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述酶解反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)為3-6h。

35、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，酶解反應(yīng)體系中所述巖藻糖苷酶的濃度為0.025-10μm。

36、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述底物的濃度為1-10mm。

37、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述底物含有所述巖藻糖基二糖和至少一種其他二糖。其中，其他二糖所指的二糖是指本領(lǐng)域技術(shù)人員一般認(rèn)知中的二糖，即由二分子的單糖通過糖苷鍵形成的糖，對(duì)單糖和糖苷鍵沒有特別限定。

38、本發(fā)明第五方面提供一種降解巖藻糖基二糖的方法，包括以巖藻糖苷酶pgoldgh29c為催化劑，催化底物進(jìn)行酶解反應(yīng)，所述巖藻糖苷酶的氨基酸序列如seq?idno.1所示，所述巖藻糖基二糖包含糖苷鍵連接的第一單糖基和第二單糖基，所述第一單糖基為巖藻糖基團(tuán)，所述糖苷鍵包含α-1,2糖苷鍵、α-1,3糖苷鍵、α-1,4糖苷鍵的至少一種。

39、其中，seq?id?no.1為：

40、mkysfvtilflalslqlgygqdlilpvpsnqpssaqqkqiarkygmfihfgintfhdqewtdgskpassyrptaidadqwiktakdagmkyvilvakhhegfclwdskyteydvansgnktnvieevakackkydiglglyyslwdrkvnadvkdktldaayneymikqlnelidivqpythivefwfdggwekeherwpareiyqtiksrepecqiginwtiglpenpdahpvlpenqkegypiryfpsdfrlgdpylpadndpklfshdgklyympwesticiserwfynttdkkyktveeltglyhqctkndnililncppnregkirdadvtllkelrkkiqm。

41、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述第二單糖基選自半乳糖基團(tuán)、乙?；咸烟腔鶊F(tuán)中的至少一種。

42、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述底物含有所述巖藻糖基二糖和至少一種其他二糖。其中，其他二糖所指的二糖是指本領(lǐng)域技術(shù)人員一般認(rèn)知中的二糖，即由二分子的單糖通過糖苷鍵形成的糖，對(duì)單糖和糖苷鍵沒有特別限定。

43、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述酶解反應(yīng)在ph4-6下進(jìn)行。

44、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述酶解反應(yīng)在35-40℃下進(jìn)行。

45、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述酶解反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)為3-6h。

46、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，酶解反應(yīng)體系中所述巖藻糖苷酶的濃度為0.025-10μm。

47、在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，酶解反應(yīng)體系中所述底物的濃度為1-10mm。

48、本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供了特異性作用于巖藻糖基二糖中的α-1,2糖苷鍵、α-1,3糖苷鍵、α-1,4糖苷鍵的巖藻糖苷酶pgoldgh29c，使用該酶可以特異性催化降解含有α-1,2糖苷鍵、α-1,3糖苷鍵、α-1,4糖苷鍵的巖藻糖基二糖，可用于糖類分析檢測(cè)。