本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及與腫瘤細胞順鉑耐藥性相關(guān)的分子標志物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、惡性腫瘤，也被稱作癌癥，是全球范圍內(nèi)對人類健康構(gòu)成重大威脅的疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，每年全球約有1270萬新發(fā)癌癥病例，約760萬人因癌癥去世。預(yù)計到2030年，每年因癌癥死亡的人數(shù)將超過1310萬。目前，癌癥的傳統(tǒng)治療手段主要包括外科手術(shù)、化療和放療?；?，也稱為藥物治療，通過使用藥物來殺死癌細胞或阻止其生長。然而，化療藥物的劑量依賴性毒性限制了其治療效果，并且隨著時間的推移，腫瘤可能對這些藥物產(chǎn)生耐藥性，這進一步降低了治療效果。

2、順鉑（cisplatin），作為第一代鉑類抗癌藥物，自1978年被引入臨床以來，已成為多種癌癥治療中不可或缺的一線藥物。其獨特的抗腫瘤活性主要歸功于能夠與dna形成交叉聯(lián)結(jié)，導(dǎo)致腫瘤細胞的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過程受阻，最終引發(fā)細胞死亡。然而，隨著順鉑在臨床上的廣泛應(yīng)用，腫瘤細胞對順鉑的耐藥性問題逐漸顯現(xiàn)，成為限制其療效和應(yīng)用范圍的主要障礙。為了克服腫瘤耐藥性，提高化療和靶向治療的療效，降低耐藥風險，并延長患者的生存期，本領(lǐng)域迫切地需要深入探索，希望能夠提高順鉑在癌癥治療中的療效，降低耐藥性的風險，并最終延長患者的生存期和改善生活質(zhì)量。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于尋找提高腫瘤細胞對順鉑藥物敏感性的關(guān)鍵microrna并開發(fā)相應(yīng)的檢測試劑及治療藥物。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明通過hela（宮頸癌）細胞的培養(yǎng)及hela/ddp耐藥細胞株的建立，及檢測兩者基因的差異表達，發(fā)現(xiàn)現(xiàn)hsa-mir-12117可以作為宮頸癌細胞耐藥性的標志物。

3、進一步研究hsa-mir-12117在hela/ddp細胞對順鉑耐藥中發(fā)揮的作用，在實驗中發(fā)現(xiàn)，下調(diào)hsa-mir-12117表達能逆轉(zhuǎn)hela/ddp細胞對順鉑耐藥性；并且下調(diào)hsa-mir-12117表達能抑制宮頸癌hela/ddp細胞的增殖速度，同時也抑制其克隆形成能力。從而為尋找新的分子治療靶標，指導(dǎo)臨床用藥，并更加有效對抗順鉑耐藥提供科學的依據(jù)。

4、本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)hsa-mir-12117表達量能夠反映患者對順鉑的治療效果，用于指導(dǎo)臨床用藥；并且可以通過該microrna的抑制劑能夠增加順鉑的治療效果，更具有臨床轉(zhuǎn)化價值。

5、為實現(xiàn)本發(fā)明目的，采用的具體技術(shù)方案如下：

6、本發(fā)明提供了一種宮頸癌細胞對順鉑耐藥性的分子標志物，其特征在于，所述分子標志物為hsa-mir-12117，其核苷酸序列如seq?id?no：1所示，hsa-mir-12117在對順鉑耐藥的宮頸癌細胞中表達量升高。

7、所?述hsa-mir-12117的?核?苷?酸?序?列?如?seq?id?no.1?所?示?：gaagtggagcgcatcagtga。

8、本發(fā)明提供一種檢測宮頸癌對順鉑耐藥性的檢測試劑，用于檢測核苷酸序列如seq?id?no：1所示標志物hsa-mir-12117的表達水平，所述檢測試劑包含逆轉(zhuǎn)錄試劑和擴增試劑，逆轉(zhuǎn)錄試劑中含有hsa-mir-12117反轉(zhuǎn)錄引物，反轉(zhuǎn)錄引物的核苷酸序列如seq?idno：2所示；擴增試劑中含有hsa-mir-12117擴增引物對，hsa-mir-12117正向引物的核苷酸序列如seq?id?no：3所示，hsa-mir-12117反向引物的核苷酸序列如seq?id?no：4所示。

9、所述的檢測試劑，還包括10?×buffer、dntp、mgcl2、taq酶和taqman探針。

10、本發(fā)明提供了一種用于降低宮頸癌細胞中hsa-mir-12117表達量的hsa-mir-12117?抑制劑。

11、所述hsa-mir-12117?抑制劑的核苷酸序列如seq?id?no：6所示，所述hsa-mir-12117?inhibito選自以下能降低宮頸癌細胞中hsa-mir-12117表達量的sirna、dsrna、shrna、mirna、反義核苷酸；或者能表達或形成所述sirna、?dsrna、shrna、mirna、反義核苷酸的構(gòu)建物或者小分子化合物。

12、進一步地，本發(fā)明提供了hsa-mir-12117抑制劑在制備逆轉(zhuǎn)宮頸癌對順鉑耐藥性藥物中的應(yīng)用。

13、所述藥物中含有的hsa-mir-12117抑制劑下調(diào)宮頸癌耐藥細胞中hsa-mir-12117的表達，能逆轉(zhuǎn)宮頸癌耐藥細胞對順鉑的耐藥性。

14、進一步地，本發(fā)明還提供了hsa-mir-12117抑制劑在制備宮頸癌對順鉑藥物敏感性的促進劑中的應(yīng)用。

15、所述促進劑中含有的hsa-mir-12117?抑制劑下調(diào)宮頸癌耐藥細胞中hsa-mir-12117的表達，降低順鉑對宮頸癌耐藥細胞的半數(shù)抑制濃度，提高了宮頸癌耐藥細胞對順鉑的藥物敏感性。

16、進一步，本發(fā)明提供了hsa-mir-12117?抑制劑與順鉑在制備宮頸癌化療藥物中的應(yīng)用，藥物中含有的hsa-mir-12117?抑制劑能下調(diào)宮頸癌耐藥細胞中hsa-mir-12117的表達，抑制宮頸癌耐藥細胞的增殖速度和克隆形成能力。

17、更進一步地，本發(fā)明提供了一種宮頸癌化療藥物，所述藥物以hsa-mir-12117的抑制劑和順鉑藥物為主要活性成分，藥物中含有的hsa-mir-12117抑制劑能下調(diào)宮頸癌耐藥細胞中hsa-mir-12117的表達，抑制宮頸癌耐藥細胞的增殖速度和克隆形成能力。

18、基于上述技術(shù)方案，本發(fā)明具有以下有益效果：

19、本發(fā)明通過hela/ddp細胞株發(fā)現(xiàn)hsa-mir-12117可以作為宮頸癌對順鉑藥物耐藥性的標志物，為宮頸癌治療提供了新的分子治療靶標，hsa-mir-12117表達量能夠反映患者對順鉑的治療的效果，有利于指導(dǎo)臨床用藥。

20、進一步研究發(fā)現(xiàn)：下調(diào)hsa-mir-12117表達量能逆轉(zhuǎn)hela/ddp細胞對順鉑耐藥；并且能抑制宮頸癌hela/ddp細胞的增殖速度，同時也抑制其克隆形成能力。通過該microrna的抑制劑能夠增加順鉑的治療效果，更具有臨床轉(zhuǎn)化價值，為有效對抗順鉑耐藥提供科學手段。

技術(shù)特征：

1.一種宮頸癌細胞對順鉑耐藥性的標志物，其特征在于，所述標志物為hsa-mir-12117，其核苷酸序列如seq?id?no：1所示，hsa-mir-12117在對順鉑耐藥的宮頸癌細胞中表達量升高。

2.一種檢測宮頸癌對順鉑耐藥性的檢測試劑，其特征在于，用于檢測核苷酸序列如seqid?no：1所示的標志物hsa-mir-12117的表達水平，所述檢測試劑包含逆轉(zhuǎn)錄試劑和擴增試劑，逆轉(zhuǎn)錄試劑中含有hsa-mir-12117反轉(zhuǎn)錄引物，反轉(zhuǎn)錄引物的核苷酸序列如seq?id?no：2所示；擴增試劑中含有hsa-mir-12117擴增引物對，hsa-mir-12117正向引物的核苷酸序列如seq?id?no：3所示，hsa-mir-12117反向引物的核苷酸序列如seq?id?no：4所示。

3.一種用于降低宮頸癌細胞中hsa-mir-12117表達量的hsa-mir-12117?抑制劑，其特征在于，所述hsa-mir-12117?抑制劑的核苷酸序列如seq?id?no：6所示，所述hsa-mir-12117?inhibito選自以下能降低宮頸癌細胞中hsa-mir-12117表達量的sirna、dsrna、shrna、mirna、反義核苷酸；或者能表達或形成所述sirna、?dsrna、shrna、mirna、反義核苷酸的構(gòu)建物或者小分子化合物。

4.hsa-mir-12117抑制劑在制備逆轉(zhuǎn)宮頸癌對順鉑耐藥性藥物中的應(yīng)用，所述藥物中含有的hsa-mir-12117?抑制劑下調(diào)宮頸癌耐藥細胞中hsa-mir-12117的表達，能逆轉(zhuǎn)宮頸癌耐藥細胞對順鉑的耐藥性。

5.hsa-mir-12117抑制劑在制備宮頸癌對順鉑藥物敏感性的促進劑中的應(yīng)用，所述促進劑中含有的hsa-mir-12117?抑制劑下調(diào)宮頸癌耐藥細胞中hsa-mir-12117的表達，降低順鉑對宮頸癌耐藥細胞的半數(shù)抑制濃度，提高了宮頸癌耐藥細胞對順鉑的藥物敏感性。

6.hsa-mir-12117抑制劑與順鉑在制備宮頸癌化療藥物中的應(yīng)用，藥物中含有的hsa-mir-12117?抑制劑能下調(diào)宮頸癌耐藥細胞中hsa-mir-12117的表達，抑制宮頸癌耐藥細胞的增殖速度和克隆形成能力。

7.一種宮頸癌化療藥物，其特征在于，所述藥物以hsa-mir-12117的抑制劑和順鉑藥物為主要活性成分，藥物中含有的hsa-mir-12117?抑制劑能下調(diào)宮頸癌耐藥細胞中hsa-mir-12117的表達，抑制宮頸癌耐藥細胞的增殖速度和克隆形成能力。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了與腫瘤細胞順鉑耐藥性相關(guān)的hsa?miR?12117及其應(yīng)用；本發(fā)明通過建立Hela/DDP耐藥細胞株及其檢測實驗，發(fā)現(xiàn)hsa?miR?12117在宮頸癌細胞中顯著過表達，可以作為宮頸癌耐藥性的標志物。進一步研究發(fā)現(xiàn)：通過下調(diào)hsa?miR?12117表達能逆轉(zhuǎn)Hela/DDP細胞對順鉑耐藥，提高了藥物敏感性；下調(diào)hsa?miR?12117表達能抑制宮頸癌Hela/DDP細胞的增殖速度和克隆形成能力。本發(fā)明提供了新的宮頸癌分子治療靶標，并為指導(dǎo)臨床用藥，更加有效對抗順鉑耐藥提供科學的依據(jù)。

技術(shù)研發(fā)人員：張炳強,陳夢夢,張高峰,米哈伊爾·文尼阿米諾維奇·烏格柳莫夫,欒延松,馬永超,于俊梅,孫國龍,鄒偉,付學奇,孫允東
受保護的技術(shù)使用者：青島瑞思德生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30