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耐熱的錯配核酸內(nèi)切酶變體的制作方法

文檔序號:40603120發(fā)布日期:2025-01-07 20:43閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種多肽,所述多肽包含選自seq?id?no:6至8的氨基酸序列。

2.一種核酸,其編碼根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的核酸,其包含選自seq?id?no:21至23的核苷酸序列。

4.一種表達載體,其包含根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的核酸和表達調(diào)控序列。

5.一種細胞,其由根據(jù)權(quán)利要求4所述的表達載體轉(zhuǎn)化,表達具有錯配核酸內(nèi)切酶活性的多肽。

6.一種用于切割具有錯配的雙鏈核酸的方法,所述方法包括使用根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽處理所述雙鏈核酸的步驟。

7.一種組合物,其包含以下(a)至(d):

8.一種用于擴增核酸的方法,所述方法包括以下步驟(1)和(2):

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其中所述核酸擴增通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(pcr)方法、等溫核酸擴增方法或多重置換擴增(mda)方法進行。

10.一種用于抑制包含特定核苷酸序列的核酸擴增的方法,所述方法包括在以下(a)至(d)的存在下進行核酸擴增反應(yīng)的步驟:

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法,其中所述核酸擴增反應(yīng)為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(pcr)或等溫核酸擴增。

12.一種用于優(yōu)先擴增靶dna的非診斷方法,所述方法包括通過根據(jù)權(quán)利要求10或11所述的方法抑制具有與靶dna相差一個或幾個核苷酸的核苷酸序列的dna的擴增。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法,其用于擴增具有野生型核苷酸序列的dna和通過彼此不同的單核苷酸多態(tài)性突變而不同于野生型dna的dna中的一個。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法,其中所述單核苷酸多態(tài)性突變是與癌變或癌癥治療劑的治療效果相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性突變。

15.一種包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽的多肽二聚體,其中所述二聚體是:


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了耐熱的錯配核酸內(nèi)切酶變體。具體地,本發(fā)明提供了GG?特異性錯配核酸內(nèi)切酶變體。本發(fā)明還提供了使用所述變體的錯配特異性切割反應(yīng)、使用錯配核酸酶去除核酸擴增反應(yīng)中的錯誤的方法、在核酸擴增反應(yīng)期間抑制具有特定堿基序列的核酸擴增的方法,以及使用所述抑制方法檢測具有單堿基多態(tài)性突變的核酸的方法。

技術(shù)研發(fā)人員:松本裕之,上森隆司,白井剛,石野良純,石野園子
受保護的技術(shù)使用者:寶生物工程株式會社
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/1/6
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