本發(fā)明屬于卵母細(xì)胞發(fā)育，具體涉及激素敏感脂肪酶hsl基因提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、卵母細(xì)胞體外成熟(in?vitro?maturation，ivm)是進(jìn)行胚胎體外生產(chǎn)(in?vitroproduction，ivp)技術(shù)的關(guān)鍵步驟。通過(guò)ivp技術(shù)可以充分挖掘我國(guó)優(yōu)良種豬的遺傳潛能、擴(kuò)繁優(yōu)良品種、促進(jìn)遺傳改良、支持疾病模型豬及器官供體豬的制備。卵母細(xì)胞質(zhì)量的優(yōu)劣和成熟率很大程度上決定了胚胎發(fā)育的命運(yùn)，改善卵母細(xì)胞的體外發(fā)育潛能有助于ivp體系發(fā)展，對(duì)胚胎發(fā)育、著床、胎兒生長(zhǎng)發(fā)育具有重要影響，直接決定著ivp產(chǎn)出效率。因此，如何提高ivm的效率和質(zhì)量仍將是未來(lái)一定時(shí)間內(nèi)的重要任務(wù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是為了提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率。

2、本發(fā)明提供一種激素敏感脂肪酶hsl蛋白質(zhì)在提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率、脂肪酸的含量和atp的含量中的應(yīng)用，所述激素敏感脂肪酶hsl蛋白質(zhì)的氨基酸序列如seq?idno.3所示。

3、本發(fā)明提供一種激素敏感脂肪酶hsl基因在提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率、脂肪酸的含量和atp的含量中的應(yīng)用，所述激素敏感脂肪酶hsl基因序列如seq?id?no.4所示。

4、本發(fā)明提供一種過(guò)表達(dá)激素敏感脂肪酶hsl?mrna在提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率、脂肪酸的含量和atp的含量中的應(yīng)用，所述激素敏感脂肪酶hslmrna序列如seq?id?no.7所示。

5、本發(fā)明提供一種含有過(guò)表達(dá)激素敏感脂肪酶hsl基因的重組載體在提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率、脂肪酸的含量和atp的含量中的應(yīng)用，所述激素敏感脂肪酶hsl基因序列如seq?id?no.4所示。

6、進(jìn)一步地限定，所述重組載體的骨架為pcdna3.1_egfp。

7、進(jìn)一步地限定，重組載體還包括kozak序列。

8、本發(fā)明提供一種含有過(guò)表達(dá)激素敏感脂肪酶hsl基因的重組微生物細(xì)胞在提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率、脂肪酸的含量和atp的含量中的應(yīng)用，所述激素敏感脂肪酶hsl基因序列如seq?id?no.4所示。

9、本發(fā)明提供一種提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率、脂肪酸的含量或atp的含量的方法，在豬卵母細(xì)胞過(guò)表達(dá)激素敏感脂肪酶hsl蛋白；所述激素敏感脂肪酶hsl蛋白的序列如seqid?no.3所示。

10、進(jìn)一步地限定，將含有激素敏感脂肪酶hsl基因的重組載體為模板，進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，獲得激素敏感脂肪酶hsl?mrna序列。

11、本發(fā)明提供一種上述的方法獲得的豬卵母細(xì)胞。

12、有益效果：本發(fā)明構(gòu)建了用于體外轉(zhuǎn)錄的過(guò)表達(dá)hsl基因mrna載體，所得mrna注入豬卵母細(xì)胞中，可顯著提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率。

13、本發(fā)明注入豬卵母細(xì)胞的mrna可融合表達(dá)egfp基因和hsl基因，在顯微注射后可快速篩選。本發(fā)明構(gòu)建的載體具有kozak序列，可促進(jìn)mrna注入后的穩(wěn)定翻譯，提高后續(xù)豬卵母細(xì)胞體外成熟率。本發(fā)明構(gòu)建的以pcdna3.1_egfp作為骨架的hsl過(guò)表達(dá)載體含有t7啟動(dòng)子，適用于體外轉(zhuǎn)錄大量mrna。本發(fā)明經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)獲得的轉(zhuǎn)錄自目的序列的mrna，所述目的序列包括hsl基因，再將所述mrna通過(guò)顯微注射法注入到豬卵母細(xì)胞中，可使卵母細(xì)胞過(guò)量表達(dá)hsl蛋白。

技術(shù)特征：

1.激素敏感脂肪酶hsl蛋白質(zhì)在提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率、脂肪酸的含量和atp的含量中的應(yīng)用，其特征在于，所述激素敏感脂肪酶hsl蛋白質(zhì)的氨基酸序列如seq?id?no.3所示。

2.激素敏感脂肪酶hsl基因在提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率、脂肪酸的含量和atp的含量中的應(yīng)用，其特征在于，所述激素敏感脂肪酶hsl基因序列如seq?id?no.4所示。

3.激素敏感脂肪酶hslmrna在提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率、脂肪酸的含量和atp的含量中的應(yīng)用，其特征在于，所述激素敏感脂肪酶hslmrna序列如seq?id?no.7所示。

4.含有激素敏感脂肪酶hsl基因的重組載體在提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率、脂肪酸的含量和atp的含量中的應(yīng)用，其特征在于，所述激素敏感脂肪酶hsl基因序列如seq?id?no.4所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述重組載體的骨架為pcdna3.1_egfp。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，重組載體還包括kozak序列。

7.含有激素敏感脂肪酶hsl基因的重組微生物細(xì)胞在提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率、脂肪酸的含量和atp的含量中的應(yīng)用，其特征在于，所述激素敏感脂肪酶hsl基因序列如seqid?no.4所示。

8.一種提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率、脂肪酸的含量或atp的含量的方法，其特征在于，在豬卵母細(xì)胞中過(guò)表達(dá)激素敏感脂肪酶hsl蛋白；所述激素敏感脂肪酶hsl蛋白的序列如seq?id?no.3所示。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，將含有激素敏感脂肪酶hsl基因的重組載體為模板，進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，獲得激素敏感脂肪酶hsl?mrna序列。

10.權(quán)利要求8或權(quán)利要求9所述的方法獲得的豬卵母細(xì)胞。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供激素敏感脂肪酶HSL基因提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率中的應(yīng)用，屬于卵母細(xì)胞發(fā)育技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明為了提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率。本發(fā)明提供一種過(guò)表達(dá)激素敏感脂肪酶HSL基因在提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率、脂肪酸的含量和ATP的含量中的應(yīng)用，所述激素敏感脂肪酶HSL的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。本發(fā)明證明了過(guò)表達(dá)激素敏感脂肪酶HSL基因可為提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率、提高豬繁殖力提供技術(shù)支持，為良種豬育種工作提供了一種全新的途徑，具有良好的應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)研發(fā)人員：金君學(xué),孫婧陶,姜希卿,何天瑤
受保護(hù)的技術(shù)使用者：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/23