本發(fā)明涉及膠原蛋白制備，具體而言，涉及一種ⅱ型膠原蛋白及其制備方法。

背景技術(shù)：

1、膠原蛋白是一種廣泛分布于哺乳動物體內(nèi)的白色、無異味的纖維蛋白，是動物體內(nèi)含量最多的蛋白，約占總蛋白的30％。目前已知的膠原蛋白種類已有二十余種，其中ii型膠原蛋白主要分布于動物的皮、軟骨、肌腱、血管、角膜等結(jié)締組織中關(guān)節(jié)軟骨中，是軟骨基質(zhì)中最主要的成分。

2、雞胸軟骨作為雞肉加工中的廢棄物，不但造成極大的浪費而且污染環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn)雞胸軟骨中ii型膠原蛋白的含量高達50％以上，因此可作為提取ii型膠原蛋白的優(yōu)質(zhì)原料。

3、ii型膠原蛋白是由三股纏繞的多肽鏈組成，由于其具備三螺旋結(jié)構(gòu)，因此，在體內(nèi)主要起到支撐器官、保護機體的作用。但它的三螺旋結(jié)構(gòu)易被破壞，并且可能伴隨生物活性的喪失。而ii型膠原蛋白的三螺旋結(jié)構(gòu)的維持依賴于分子間和分子內(nèi)各種作用的協(xié)同效應(yīng)，如氫鍵、范德華力、水合作用及二硫鍵在維持其分子結(jié)構(gòu)上共同發(fā)揮作用，疏水作用和離子作用提供了分子間作用力，因此，ii型膠原蛋白的三螺旋結(jié)構(gòu)的熱穩(wěn)定性受到眾多因素的影響。

4、目前市售的ii型膠原蛋白產(chǎn)品，多為完全酶解的膠原蛋白產(chǎn)品。由于提取工藝和制劑工藝的局限，在酶、高溫、ph值等因素作用下，ii型膠原蛋白喪失原有的三螺旋結(jié)構(gòu)，膠原蛋白被分解為20000道爾頓以下的多肽和氨基酸，失去原有對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)炎的預(yù)防及輔助治療功能。

5、目前，國內(nèi)外已公開多種非變性ii型膠原蛋白的制備工藝，cn116253791a公開了一種非變性ii型膠原蛋白的制備方法，包括殺菌脫雜處理、固液分離、軟骨粉碎、均漿、酶解、固液分離、調(diào)ph、固液分離、干燥、粉碎等步驟。cn114045322a公開了一種非變性ii型膠原蛋白的制備方法以雞胸軟骨為原料通過脫脂，粉磨，酸解，酶解，電泳透析，二次粉磨，殺菌，制得ii型膠原蛋白。cn113563458a公開了一種非變性ii型膠原蛋白的制備方法，以雞胸軟骨為原料，經(jīng)選材、清洗、粉碎、酶解、干燥、粉碎、過篩等步驟。目前現(xiàn)有技術(shù)普遍存在工序復(fù)雜、耗時長，且得到非變性ii型膠原蛋白提取率低或者純度低的問題。因此，提供一種工藝簡單、膠原蛋白提取率高且純度高的非變性ii型膠原蛋白的提取方法非常重要。

6、有鑒于此，特提出本申請。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、現(xiàn)有技術(shù)的問題在于目前ii型膠原蛋白的制備存在工序復(fù)雜、耗時長，且得到非變性ii型膠原蛋白提取率低或者純度低，本發(fā)明提供一種ⅱ型膠原蛋白及其制備方法，通過采用超臨界co2和加入胰酶進行酶解的方式相結(jié)合進行脫脂工序，能夠大大的提高膠原蛋白的提取率，且非變性ii型膠原蛋白提取純度高，生產(chǎn)工藝簡單，能夠適用于大規(guī)模生產(chǎn)。

2、本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)：

3、第一方面，本發(fā)明提供一種ⅱ型膠原蛋白的制備方法，將原料依次經(jīng)過脫脂、酶解、濃縮和噴干工序；

4、脫脂工序具體方法如下：

5、將原料預(yù)處理后轉(zhuǎn)至超臨界萃取裝置中，使用co2流體進行萃取脫脂處理；

6、萃取完成后加入原料0.5-1.5％的胰酶進行酶解處理，完成脫脂工序。

7、在某一具體實施方式中，所述脫脂工序中co2流體萃取條件為：萃取流速25～30l/h，20～25mpa，30～35℃處理2h。

8、在某一具體實施方式中，所述脫脂工序中的酶解處理條件為：40～45℃，ph8.0～8.2，酶解2h。

9、在某一具體實施方式中，所述脫脂工序中，原料預(yù)處理具體步驟如下：將清潔干凈的原料絞碎并粉碎，使其能通過20～40目篩網(wǎng)。

10、在某一具體實施方式中，酶解工序的具體方法如下：將脫脂完成后的原料，使用鹽酸調(diào)節(jié)溶液ph值至2.5～3.5，加入原料重量0.5-1.5％的胃蛋白酶進行酶解處理，得酶解液。

11、在某一具體實施方式中，所述酶解工序中，酶解處理條件為：超聲功率310w，36-38℃條件下酶解處理1～2h。

12、在某一具體實施方式中，濃縮工序的具體方法如下：將酶解液過濾至澄清，過濾液經(jīng)500da納濾膜濃縮10倍體積。

13、在某一具體實施方式中，噴干工序的具體方法如下：將過濾液進入噴霧干燥器，進風(fēng)溫度190～200℃,出風(fēng)溫度80℃，進料頻率45～50hz，制得ii型膠原蛋白。

14、在某一具體實施方式中，所述原料采用雞胸軟骨。

15、第二方面，本發(fā)明提供一種ⅱ型膠原蛋白，采用所述制備方法制得。

16、本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下的優(yōu)點和有益效果：

17、本發(fā)明實施例提供的一種ⅱ型膠原蛋白及其制備方法，通過采用超臨界co2和加入胰酶進行酶解的方式相結(jié)合進行脫脂工序，能夠大大的提高膠原蛋白的提取率，且非變性ii型膠原蛋白提取純度高，生產(chǎn)工藝簡單，能夠適用于大規(guī)模生產(chǎn)。

技術(shù)特征：

1.一種ⅱ型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，將原料依次經(jīng)過脫脂、酶解、濃縮和噴干工序；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種ⅱ型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，所述脫脂工序中co2流體萃取條件為：萃取流速25～30l/h，20～25mpa，30～35℃處理2h。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種ⅱ型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，所述脫脂工序中，胰酶添加量為0.5-1.5％，酶解處理條件為：40～45℃，ph8.0～8.2，酶解2h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種ⅱ型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，所述脫脂工序中，原料預(yù)處理具體步驟如下：將清潔干凈的原料絞碎并粉碎，使其能通過20～40目篩網(wǎng)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種ⅱ型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，酶解工序的具體方法如下：將脫脂完成后的原料，使用鹽酸調(diào)節(jié)溶液ph值至2.5～3.5，加入原料重量0.5-1.5％的胃蛋白酶進行酶解處理，得酶解液。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種ⅱ型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，所述酶解工序中，酶解處理條件為：超聲功率310w，36-38℃條件下酶解處理1～2h。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種ⅱ型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，濃縮工序的具體方法如下：將酶解液過濾至澄清，過濾液經(jīng)500da納濾膜濃縮10倍體積。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種ⅱ型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，噴干工序的具體方法如下：將過濾液進入噴霧干燥器，進風(fēng)溫度190～200℃,出風(fēng)溫度80℃，進料頻率45～50hz，制得ii型膠原蛋白。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種ⅱ型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，所述原料采用雞胸軟骨。

10.一種ⅱ型膠原蛋白，其特征在于，采用權(quán)利要求1～9任一所述制備方法制得。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種Ⅱ型膠原蛋白及其制備方法，包括如下步驟：脫脂：取干凈的雞胸軟骨絞碎并粉碎，轉(zhuǎn)移至超臨界萃取裝置中，使用CO2流體進行脫脂處理，加入雞胸軟骨重量3～5倍的純化水，加入雞胸軟骨重量0.5?1.5％的胰酶進行酶解，制得脫脂雞胸軟骨；酶解：脫脂完成后，使用鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH值為2.5?3.5，繼續(xù)加入雞胸軟骨重量0.5?1.5％的胃蛋白酶，酶解處理得酶解液；濃縮：酶解液過濾至澄清，過濾液經(jīng)500Da納濾膜濃縮10倍體積；噴干：過濾液進入噴霧干燥器，制得II型膠原蛋白。本發(fā)明通過采用超臨界CO2和加入胰酶進行酶解的方式相結(jié)合進行脫脂工序，能夠大大的提高膠原蛋白的提取率，且非變性II型膠原蛋白提取純度高，生產(chǎn)工藝簡單，能夠適用于大規(guī)模生產(chǎn)。

技術(shù)研發(fā)人員：唐章勇,張革,周后杰,張忠元,肖勇,蔣維濤,李先鋒,張新欣,郭婷,王倩,李媛
受保護的技術(shù)使用者：四川德博爾制藥有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9