本發(fā)明屬于醫(yī)藥及保健食品，具體涉及一種化橘紅多糖及其制備方法、鑒定方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、心肌缺血(mi)是猝死的主要原因之一，通常是由于血栓形成或動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致流向心臟的血液急劇減少，最終導(dǎo)致心血管疾病。在臨床實(shí)踐中，再灌注是心肌缺血的首選治療策略。然而，大量研究表明，缺血一段時(shí)間后再灌注，不僅未能使組織、器官功能恢復(fù)，反而加重組織、器官的功能障礙和結(jié)構(gòu)損傷。這種再灌注引起的心肌損傷被廣泛地稱為心肌缺血再灌注(mi/r)損傷。目前，仍缺乏成熟有效的mi/r治療方法或藥物，使得mi/r的治療仍然是世界范圍內(nèi)的臨床治療挑戰(zhàn)。

2、多糖又稱多聚糖，是一類廣泛存在于動(dòng)植物與微生物體內(nèi)的生物信息大分子。天然多糖由于其突出的抗氧化和免疫調(diào)節(jié)活性，在多種疾病中發(fā)揮重要作用，包括腫瘤、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和心血管系統(tǒng)疾病。越來(lái)越多的證據(jù)表明，多糖可以有效減輕缺血/再灌注引起的心肌損傷。因此，從天然多糖中尋找潛在的治療藥物有望成為預(yù)防和治療缺血再灌注心肌損傷的有效策略。

3、化橘紅多糖為蕓香科植物化州柚(citrusgrandis?tomentosa)的干燥外層果皮的組成成分之一。味辛、苦，性溫。歸肺、脾經(jīng)。理氣寬中，燥濕化痰。臨床上用于咳嗽痰多，食積傷酒，嘔惡痞悶等?；偌t的化學(xué)成分主要有多糖、類黃酮、揮發(fā)油和香豆素等多種成分。同時(shí)現(xiàn)代藥理研究表明，多糖作為化橘紅的主要活性成分之一，其藥理作用較為廣泛，具有多種有益作用，包括抗氧化、抗炎、降血糖和心臟保護(hù)等多種活性。目前關(guān)于化橘紅多糖的研究主要集中于對(duì)其提取工藝及抗炎化活性方面優(yōu)化方面，對(duì)化橘紅多糖其均一多糖結(jié)構(gòu)和心肌保護(hù)作用的報(bào)道很少。因此，有必要提供一種提取純化、結(jié)構(gòu)鑒定的方法，為化橘紅多糖質(zhì)量控制及深入研究其缺血再灌注損傷保護(hù)活性奠定基礎(chǔ)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種化橘紅多糖及其制備方法、鑒定方法和應(yīng)用，以便為化橘紅多糖在醫(yī)藥上的應(yīng)用提供基礎(chǔ)。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

3、在第一方面，本發(fā)明提供了一種化橘紅多糖，具有以下結(jié)構(gòu)式：

4、

5、其中為l-呋喃型阿拉伯糖，式中n+6m＝34。

6、在第二方面，本發(fā)明提供了如上所述的化橘紅多糖的制備方法，包括以下步驟：

7、s1剪切：將化橘紅果皮切成小段，得到化橘紅段；

8、s2水提：將化橘紅段加入水中，加熱提取，過(guò)濾得到提取液；

9、s3醇沉：將提取液濃縮得到濃縮液，向濃縮液中加入乙醇，收集沉淀得到粗多糖；

10、s4純化：利用層析對(duì)粗多糖進(jìn)行純化得到成品化橘紅多糖。

11、優(yōu)選地，剪切得到的化橘紅段的長(zhǎng)度為1～8cm。

12、優(yōu)選地，水提取的參數(shù)為：水的添加量為化橘紅段重量的5～15倍，加熱溫度為60～100℃，提取時(shí)間1～10h。

13、優(yōu)選地，所述醇沉步驟為分級(jí)醇沉，步驟為：

14、s31：將提取液減壓濃縮，得到第一濃縮液，加入乙醇至乙醇體積濃度為a％，靜置，收集沉淀和上清液，得到第一粗多糖和第一上清液；

15、s32：將第一上清液減壓濃縮，得到第二濃縮液，加入乙醇至乙醇體積濃度為b％，靜置，收集沉淀和上清液，得到第二粗多糖和第二上清液；

16、s33：將第二上清液減壓濃縮，得到第三濃縮液，加入乙醇至乙醇體積濃度為c％，靜置，收集沉淀和上清液，得到第三粗多糖，

17、其中減壓濃縮時(shí)溫度為40～70℃，靜置時(shí)間為10～28h，10≤a＜b＜c＜100。

18、優(yōu)選地，純化步驟為：取第三粗多糖進(jìn)行一次純化去除蛋白，再取一次純化后的第三粗多糖進(jìn)行層析，獲得成品化橘紅多糖。

19、進(jìn)一步，層析過(guò)程包括：先取一次純化后的第三粗多糖進(jìn)行離子交換柱層析，用0～2m的nacl進(jìn)行梯度洗脫，使用苯酚-硫酸法繪制洗脫曲線，根據(jù)洗脫曲線分別收集糖部分，濃縮、冷凍干燥，再分別用水進(jìn)行溶解，離心，取上清液，再對(duì)上清液進(jìn)行分子篩凝膠柱層析，用水進(jìn)行洗脫，利用苯酚-硫酸法檢測(cè)洗脫曲線，根據(jù)洗脫曲線收集糖部分，濃縮、冷凍干燥，得到成品化橘紅多糖。

20、在第三方面，本發(fā)明提供了一種化橘紅多糖的鑒定方法，包括以下步驟：

21、(1)取化橘紅多糖樣品，完全酸水解，水解產(chǎn)物pmp衍生化后液相色譜檢測(cè)；

22、(2)取化橘紅多糖樣品，干燥，壓片，紅外光譜檢測(cè)；

23、(3)取化橘紅多糖樣品，甲基化，水解，還原，乙?；?，進(jìn)行g(shù)c-ms檢測(cè)；

24、(4)取化橘紅多糖樣品溶于d2o，進(jìn)行核磁共振分析；

25、(5)取化橘紅多糖樣品采用多角度光散射系統(tǒng)和剛果紅法進(jìn)行分子構(gòu)象分析。

26、在第四方面，本發(fā)明公開了如上所述的化橘紅多糖用于制造缺血再灌注損傷保護(hù)藥物或保健品的用途。

27、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

28、1、本發(fā)明采用水提醇沉法，對(duì)化橘紅多糖進(jìn)行初步分離，效果顯著，且本制備方法簡(jiǎn)單，反應(yīng)條件溫和，可大規(guī)模生產(chǎn)；

29、2、本發(fā)明通過(guò)柱層析法對(duì)化橘紅粗多糖進(jìn)行二次分離純化，效果顯著，首次制備出一種化橘紅多糖純品；

30、3、本發(fā)明對(duì)純化得到的多糖純品的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定，明確了各多糖組分的理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)，為探究其藥理活性機(jī)制提供結(jié)構(gòu)依據(jù)；

31、4、本發(fā)明得到的化橘紅多糖純品，組分保存完好，結(jié)構(gòu)明確，質(zhì)量可控，能增強(qiáng)ac16心肌細(xì)胞在ogd/r誘導(dǎo)后的保護(hù)作用，降低乳酸脫氫酶(ldh)的水平，抑制ac16心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激水平，并通過(guò)調(diào)控nrf2/keap1、ire1/grpc78和bax/bcl-2信號(hào)通路的串?dāng)_發(fā)揮心肌保護(hù)作用，為化橘紅多糖在醫(yī)藥、保健品等領(lǐng)域的應(yīng)用提供依據(jù)；

32、5、同時(shí)，本發(fā)明為化橘紅多糖藥物、質(zhì)量控制及深入研究其構(gòu)效關(guān)系和作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

技術(shù)特征：

1.一種化橘紅多糖，其特征在于，具有以下結(jié)構(gòu)式：

2.如權(quán)利要求1所述的化橘紅多糖的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，剪切得到的化橘紅段的長(zhǎng)度為1～8cm。

4.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，水提取的參數(shù)為：水的添加量為化橘紅段重量的5～15倍，加熱溫度為60～100℃，提取時(shí)間1～10h。

5.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述醇沉步驟為分級(jí)醇沉，步驟為：

6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，純化步驟為：取第三粗多糖進(jìn)行一次純化去除蛋白，再取一次純化后的第三粗多糖進(jìn)行層析，獲得成品化橘紅多糖。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，層析過(guò)程包括：先取一次純化后的第三粗多糖進(jìn)行離子交換柱層析，用0～2m的nacl進(jìn)行梯度洗脫，使用苯酚-硫酸法繪制洗脫曲線，根據(jù)洗脫曲線分別收集糖部分，濃縮、冷凍干燥，再分別用水進(jìn)行溶解，離心，取上清液，再對(duì)上清液進(jìn)行分子篩凝膠柱層析，用水進(jìn)行洗脫，利用苯酚-硫酸法檢測(cè)洗脫曲線，根據(jù)洗脫曲線收集糖部分，濃縮、冷凍干燥，得到成品化橘紅多糖。

8.一種化橘紅多糖的鑒定方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

9.如權(quán)利要求1所述的化橘紅多糖用于制造缺血再灌注損傷保護(hù)藥物或保健品的用途。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種化橘紅多糖及其制備方法、鑒定方法和應(yīng)用,屬于醫(yī)藥及保健食品技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供的化橘紅多糖的分子量為11917Da。本發(fā)明制備方法簡(jiǎn)單，反應(yīng)條件溫和，可大規(guī)模生產(chǎn)；且本發(fā)明對(duì)得到的高純度化橘紅多糖化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定，明確了其結(jié)構(gòu)，為探究其藥理活性機(jī)制提供結(jié)構(gòu)依據(jù)。同時(shí)，本發(fā)明得到的化橘紅多糖純品為化橘紅多糖藥物、保健食品、功能食品，及其質(zhì)量控制和深入研究其構(gòu)?效關(guān)系、作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

技術(shù)研發(fā)人員：張少杰,王唐贛,吳忠南
受保護(hù)的技術(shù)使用者：廣東醫(yī)科大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9