本發(fā)明涉及一種人源環(huán)狀rna在制備診斷、預(yù)防或治療心臟疾病的檢測(cè)試劑盒或藥物中的用途，以及一種環(huán)狀rna翻譯產(chǎn)生的衍生肽及其用途。

背景技術(shù)：

1、隨著心血管病心肌肥大、心肌梗死、心力衰竭等心臟疾病具有發(fā)病機(jī)制復(fù)雜、發(fā)病過程隱蔽等特點(diǎn)，缺乏特效的診療手段。

2、環(huán)狀rna是一種具有共價(jià)閉合結(jié)構(gòu)的rna，可穩(wěn)定存在于細(xì)胞、甚至體液中，通過作為mirna/蛋白海綿、蛋白支架、蛋白翻譯模板調(diào)控基因的表達(dá)。此外，環(huán)狀rna的失調(diào)已被證明與心臟疾病的發(fā)病密切相關(guān)。如circular?rnas?in?cardiovascular?diseases:regulation?and?therapeutic?applications，doi:10.34133/research.0038，公開了環(huán)狀rna在心血管疾病中的調(diào)控和治療應(yīng)用。袁近松，等，環(huán)狀rna與心血管疾病關(guān)系的研究進(jìn)展，山東醫(yī)藥2018年第58卷第6期，研究發(fā)現(xiàn)，circrnas與心血管疾病的病理生理機(jī)制密切相關(guān)，在心力衰竭、心肌梗死、心肌病、高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化及心臟衰老等心血管疾病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。劉葉紅，等，circrna在心血管疾病中的研究進(jìn)展，心臟雜志(chinheart?j)2020，32(3)，研究證實(shí)circrna與人動(dòng)脈粥樣硬化，心肌梗死，心力衰竭等心血管疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，可能成為疾病診斷更為理想的生物標(biāo)志物。

3、目前，國內(nèi)已有將環(huán)狀rna應(yīng)用于診斷心肌損傷的實(shí)例。如：申請(qǐng)?zhí)?02211216356.x，發(fā)明名稱：用于診斷乳腺癌化療導(dǎo)致的心肌損傷的環(huán)狀rna標(biāo)志物、試劑盒及其應(yīng)用，公開了一種檢測(cè)環(huán)狀rna標(biāo)志物的物質(zhì)的應(yīng)用，包括下述應(yīng)用中的一種或多種：a1)在用于制備診斷乳腺癌化療導(dǎo)致的心肌損傷的產(chǎn)品中的應(yīng)用；a2)在用于制備篩查乳腺癌化療導(dǎo)致的心肌損傷的產(chǎn)品中的應(yīng)用；a3)在用于制備評(píng)估乳腺癌化療導(dǎo)致的心肌損傷的風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)品中的應(yīng)用；a4)在用于制備乳腺癌化療導(dǎo)致的心肌損傷的預(yù)后評(píng)估產(chǎn)品中的應(yīng)用；a5)在用于制備鑒別區(qū)分乳腺癌化療導(dǎo)致的心肌損傷與其他疾病產(chǎn)品中的應(yīng)用。該專利文獻(xiàn)公開的環(huán)狀rna標(biāo)志物適用于乳腺癌化療造成的心肌損傷。然而該研究?jī)H僅將環(huán)狀rna在正常樣本和受損樣本中相對(duì)表達(dá)水平差異(表達(dá)量倍數(shù)變化)作為篩選標(biāo)準(zhǔn)，而忽略了環(huán)形rna的絕對(duì)表達(dá)水平。若篩選的環(huán)形rna基礎(chǔ)表達(dá)水平較低，其檢測(cè)結(jié)果易受個(gè)體差異、樣本質(zhì)量、操作誤差等因素影響，產(chǎn)生假陽性或假陰性。因此尚存不完善之處。

4、本技術(shù)的發(fā)明人此前申請(qǐng)了一項(xiàng)將環(huán)形rna應(yīng)用于心肌梗死診斷的發(fā)明(申請(qǐng)?zhí)?02010400681.6，發(fā)明名稱：人源環(huán)狀rna在制備心臟疾病相關(guān)產(chǎn)品中的應(yīng)用)。該發(fā)明提供了一種高表達(dá)與心臟的人源環(huán)狀rna，可作為穩(wěn)定的心肌梗死血液診斷標(biāo)志物。將該人源環(huán)狀rna應(yīng)用制備心臟疾病相關(guān)產(chǎn)品中作為診斷標(biāo)志物能夠兼?zhèn)錂z測(cè)靈敏性和特異性。

5、病理性心肌肥大和心肌梗死是兩種不同的心臟疾病，它們?cè)诓±砩頇C(jī)制、臨床表現(xiàn)和治療方面都有所區(qū)別。病理性心肌肥大是指心肌細(xì)胞的體積增大，可能是由于心臟長(zhǎng)時(shí)間承受過大的負(fù)荷，如高血壓、瓣膜疾病等，導(dǎo)致心肌細(xì)胞增生和增大。病理性心肌肥大可以是心臟對(duì)長(zhǎng)期負(fù)荷增加的一種適應(yīng)性反應(yīng)，但長(zhǎng)期的心肌肥大可能導(dǎo)致心臟功能減退，甚至心力衰竭。心肌梗死則是由于冠狀動(dòng)脈血流急劇減少或中斷，導(dǎo)致心肌嚴(yán)重而持久的缺血，最終導(dǎo)致心肌的壞死。心肌梗死通常表現(xiàn)為劇烈胸痛、呼吸困難、出汗等癥狀，需要緊急醫(yī)療干預(yù)。心肌梗死的原因可能包括冠狀動(dòng)脈粥樣硬化、血栓形成、血管痙攣等。

6、目前尚無特異性檢測(cè)病理性心肌肥大的人源環(huán)狀rna的相關(guān)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供了一種人源環(huán)狀rna在制備診斷、預(yù)防或治療病理性心肌肥大的檢測(cè)試劑盒或藥物中的用途，以及一種環(huán)狀rna翻譯產(chǎn)生的衍生肽及其用途。

2、本發(fā)明提供了一種人源環(huán)狀rna在制備診斷病理性心肌肥大的檢測(cè)試劑盒或藥物中的用途，所述人源環(huán)狀rna包括含有如seq?id?no.1所示序列的核酸，或含有如seq?idno.1所示序列的核酸的生物活性功能片段、變體或衍生物。

3、本發(fā)明提供了一種環(huán)狀rna翻譯產(chǎn)生的衍生肽，包含如seq?id?no.2所示序列的多肽，或含有如seq?id?no.2所示序列的多肽的片段、變體或衍生物。

4、本發(fā)明提供了所述的衍生肽在制備診斷病理性心肌肥大的檢測(cè)試劑盒或藥物中的用途。

5、本發(fā)明提供了一種診斷或預(yù)后評(píng)估病理性心肌肥大的試劑盒，所述試劑盒包含用于特異性檢測(cè)環(huán)狀rna的探針或引物，或特異性檢測(cè)多肽的抗體或小分子化合物；其中所述環(huán)狀rna為包含seq?id?no.1所示序列的核酸、所述多肽為包含seq?id?no.2所示序列多肽。

6、本發(fā)明還提供了一種特異性rna干擾腺病毒在制備治療或/和預(yù)防病理性心肌肥大的藥物中的應(yīng)用，所述的特異性rna干擾腺病毒是將特異性靶向環(huán)形rna的shrna表達(dá)序列整合入腺病毒表達(dá)載體、包裝為重組腺病毒載體獲得，即以腺病毒為載體表達(dá)特異性靶向環(huán)形rna的干擾shrna；

7、所述的環(huán)形rna的核酸序列如seq?id?no.1所示。

8、本發(fā)明還提供了一種治療或/和預(yù)防病理性心肌肥大的藥物組合物，它含有有效量的特異性rna干擾腺病毒，所述的特異性rna干擾腺病毒是將特異性靶向環(huán)形rna的shrna表達(dá)序列整合入腺病毒表達(dá)載體、包裝為重組腺病毒載體獲得，即以腺病毒為載體表達(dá)特異性靶向環(huán)形rna的干擾shrna；

9、所述的環(huán)形rna的核酸序列如seq?id?no.1所示。

10、本發(fā)明藥物組合物是含有有效量的特異性rna干擾腺病毒，加入藥學(xué)上可接受的載體或輔料，制備成藥學(xué)上常用的制劑；所述藥學(xué)上可接通受的載體或輔料選自質(zhì)粒表達(dá)載體、殼聚糖、膽固醇、脂質(zhì)體、納米顆粒。

11、其中，所述的制劑是口服制劑或注射制劑。

12、絕大部分蛋白質(zhì)是由信使rna(mrna)在細(xì)胞內(nèi)翻譯產(chǎn)生。本發(fā)明所述circhdr與其他大多數(shù)非編碼環(huán)形rna不同，其特殊之處在于具有與mrna類似的蛋白質(zhì)翻譯能力。該衍生肽為circhdr在心肌細(xì)胞內(nèi)的天然翻譯產(chǎn)物，而非人為翻譯產(chǎn)生，其功能和表達(dá)與circhdr具有同一性，通過circhdr腺病毒即可抑制其翻譯。此外，環(huán)形rna雖然較其他線性rna穩(wěn)定，配合circhdr檢測(cè)還可進(jìn)一步減小因檢測(cè)單項(xiàng)指標(biāo)造成的誤差。

13、本發(fā)明所應(yīng)用的circhdr為心臟中表達(dá)量最高的環(huán)形rna之一，能較為穩(wěn)定準(zhǔn)確的反應(yīng)心臟病變情況。

14、本發(fā)明提供的人源環(huán)狀rna在制備心臟疾病相關(guān)產(chǎn)品中的應(yīng)用中，尤其是針對(duì)病理性心肌肥大，涉及的心臟疾病相關(guān)環(huán)形rna(circ-heart?disease-related,circhdr)是在心臟中表達(dá)量最高的環(huán)狀rna之一，具有較高的保守性，其功能也與心臟疾病密切相關(guān)，在心臟疾病的診斷、治療方面具有極大的意義。同時(shí)由于環(huán)狀rna穩(wěn)定、特異的性質(zhì)，相較于其他類型的標(biāo)志物其在患者體液中豐度更大、變化也更為顯著，具備成為新型診斷標(biāo)志物的潛力。制備成特異性rna干擾腺病毒，表達(dá)效率高；病毒基因組不會(huì)整合到宿主細(xì)胞基因組中，可控性好、安全性高。