本發(fā)明屬于生物，尤其涉及一種核酸處理試劑、檢測試劑、檢測試劑盒、微流控系統(tǒng)、檢測方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、體外核酸擴(kuò)增技術(shù)指的是在體外(即非生物體內(nèi)部)對特定的核酸序列進(jìn)行擴(kuò)增的一項(xiàng)技術(shù)，被廣泛用在科學(xué)研究、醫(yī)學(xué)、食品科學(xué)等領(lǐng)域中，其具體可分為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、cdna末端快速擴(kuò)增技術(shù)和等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。

2、其中，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(pcr)是指利用變性、退火和延伸的熱循環(huán)方式，實(shí)現(xiàn)dna雙鏈的解離、引物的結(jié)合以及dna子鏈的延伸，從而實(shí)現(xiàn)微量目標(biāo)dna的擴(kuò)增，而qpcr技術(shù)是其中最為廣泛被研究和使用的一項(xiàng)技術(shù)。目前，通過采用膜過濾、核酸酶處理、有機(jī)溶劑抽提、離心、沉淀以及柱層析等多種方法對待測樣本進(jìn)行前處理以獲得核酸模版，而質(zhì)量不良的核酸模版在很大程度上會(huì)影響擴(kuò)增效率，甚至可能會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增失敗。因此，需要采用復(fù)雜的樣本前處理步驟，以實(shí)現(xiàn)對待測樣本中核酸的充分提取以及pcr抑制物的有效去除，進(jìn)而獲得高質(zhì)量的核酸模版。

3、但是，復(fù)雜的前處理步驟極大限制了qpcr在現(xiàn)場快速檢測中的應(yīng)用，具有較大的局限性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的第一目的在于提供一種核酸處理試劑，該核酸處理試劑通過特定質(zhì)量比的水解酶、表面活性劑、胍類化合物、表面活性素、苯酚紅、低聚糖、糖醇以及硫酸鎂之間的協(xié)同作用，不僅能夠?qū)崿F(xiàn)對病原體的良好裂解效果，充分釋放基因組核酸；同時(shí)，對于呼吸道樣本、痰液樣本等常見樣本中所存在的pcr抑制物具有良好的抑制效果，可為后續(xù)qpcr擴(kuò)增反應(yīng)提供一個(gè)耐抑制的緩沖體系。在實(shí)際檢測中，取上述核酸處理試劑與呼吸道樣本、痰液樣本等常見樣本進(jìn)行混合所得的混合液即可直接進(jìn)行qpcr擴(kuò)增反應(yīng)，可免去復(fù)雜的樣本前處理步驟，實(shí)現(xiàn)了核酸的快速qpcr擴(kuò)增，可被很好地應(yīng)用于現(xiàn)場快速檢測，具有巨大的應(yīng)用前景。

2、本發(fā)明的第二目的在于提供一種核酸檢測試劑盒。

3、本發(fā)明的第三目的在于提供一種微流控系統(tǒng)。

4、本發(fā)明的第四目的在于提供一種核酸檢測方法。

5、本發(fā)明的第五目的在于提供上述核酸處理試劑、核酸檢測試劑盒和/或微流控系統(tǒng)在非診斷性核酸檢測中的應(yīng)用。

6、具體的，本發(fā)明提供的核酸處理試劑包括質(zhì)量比為(0.1～0.6):(0.01～1):(1～10):(50～100):(0.01～0.1):(5～50):(10～250):(0.1～1)的水解酶、表面活性劑、胍類化合物、表面活性素、苯酚紅、低聚糖、糖醇和硫酸鎂。

7、進(jìn)一步地，所述水解酶選自蛋白酶k和/或溶菌酶。

8、進(jìn)一步地，所述表面活性劑選自非離子型表面活性劑和/或陰離子表面活性劑。

9、進(jìn)一步地，所述胍類化合物選自異硫氰酸胍、鹽酸胍、硫氰酸胍和硫酸氨基胍中的一種或多種。

10、進(jìn)一步地，所述低聚糖選自海藻糖、蔗糖、水蘇糖、麥芽糖和果糖中的一種或多種。

11、進(jìn)一步地，所述糖醇選自甘露醇、麥芽糖醇、赤蘚糖醇和木糖醇中的一種或多種。

12、進(jìn)一步地，所述核酸處理劑包括質(zhì)量比為(0.1～0.55):(0.06～0.3):(2～9):(50～80):(0.01～0.05):(6～40):(25～200):(0.1～0.75)的水解酶、表面活性劑、胍類化合物、表面活性素、苯酚紅、低聚糖、糖醇和硫酸鎂。

13、進(jìn)一步地，所述水解酶包括蛋白酶k和/或溶菌酶，所述表面活性劑包括吐溫和十二烷基硫酸鈉，所述胍類化合物包括鹽酸胍和異硫氰酸胍，所述低聚糖包括海藻糖和蔗糖，所述糖醇為甘露醇。

14、本發(fā)明提供的核酸檢測試劑包括上述的核酸處理試劑和pcr反應(yīng)劑。

15、進(jìn)一步地，所述pcr反應(yīng)劑包括ung酶、taq酶和逆轉(zhuǎn)錄酶。

16、本發(fā)明提供的微流控裝置包括：主體，所述主體包括進(jìn)樣倉、微流道、混合倉和qpcr反應(yīng)倉；所述微流道的一端活動(dòng)插設(shè)于進(jìn)樣倉內(nèi)且與進(jìn)樣倉連通，另一端與所述混合倉連通；所述混合倉內(nèi)設(shè)置有pcr反應(yīng)劑，所述qpcr反應(yīng)倉內(nèi)設(shè)置刺破部和傳感器，所述刺破部用以破壞混合倉釋放待測樣本至qpcr反應(yīng)倉，所述傳感器用以控制反應(yīng)條件和檢測熒光信號；加樣柱，所述加樣柱活動(dòng)插設(shè)于進(jìn)樣倉遠(yuǎn)離微流道的一側(cè)，所述加樣柱驅(qū)動(dòng)微流道和混合倉沿著靠近qpcr反應(yīng)倉的方向移動(dòng)，且所述加樣柱、微流道、進(jìn)樣倉和qpcr反應(yīng)倉可形成封閉空間。

17、進(jìn)一步地，所述主體包括設(shè)置于微流道外周的溢流部，當(dāng)所述微流道離開進(jìn)樣倉時(shí)，所述溢流部與進(jìn)樣倉連通。

18、本發(fā)明提供的核酸檢測試劑盒包括上述核酸處理試劑、核酸檢測試劑和/或微流控裝置。

19、本發(fā)明提供的核酸檢測方法采用上述微流控裝置對待測樣本進(jìn)行檢測，具體包括：取待測樣本與上述核酸處理劑混合，得到待測液；取所述待測液加入微流控系統(tǒng)與上述pcr反應(yīng)劑混合，進(jìn)行qpcr擴(kuò)增，獲得檢測結(jié)果。

20、進(jìn)一步地，以所述待測樣本的體積為基準(zhǔn)，所述核酸處理劑的加入量為100～500μg/μl。

21、進(jìn)一步地，以所述待測液的體積為基準(zhǔn)，所述pcr反應(yīng)劑的加入量為1～15μg/μl。

22、本發(fā)明還提供上述核酸處理試劑、核酸檢測試劑、微流控裝置和/或核酸檢測試劑盒在非診斷性核酸檢測中的應(yīng)用。

技術(shù)特征：

1.一種核酸處理劑，其特征在于，所述核酸處理試劑包括質(zhì)量比為(0.1～0.6):(0.01～1):(1～10):(50～100):(0.01～0.1):(5～50):(10～250):(0.1～1)的水解酶、表面活性劑、胍類化合物、表面活性素、苯酚紅、低聚糖、糖醇和硫酸鎂。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸處理劑，其特征在于，所述水解酶選自蛋白酶k和/或溶菌酶；

3.一種核酸檢測試劑，其特征在于，該核酸檢測試劑包括權(quán)利要求1或2所述的核酸處理試劑和pcr反應(yīng)劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的核酸檢測試劑，其特征在于，所述pcr反應(yīng)劑包括ung酶、taq酶和逆轉(zhuǎn)錄酶。

5.一種微流控裝置，其特征在于，該微流控裝置包括：

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的微流控裝置，其特征在于，所述主體包括設(shè)置于微流道外周的溢流部，當(dāng)所述微流道離開進(jìn)樣倉時(shí)，所述溢流部與進(jìn)樣倉連通。

7.一種核酸檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括權(quán)利要求1或2所述的核酸處理試劑、權(quán)利要求3或4所述的核酸檢測試劑和/或權(quán)利要求5或6所述的微流控裝置。

8.一種核酸檢測方法，其特征在于，該檢測方法采用權(quán)利要求5或6所述的微流控裝置對待測樣本進(jìn)行檢測，具體包括：取待測樣本與權(quán)利要求1或2所述的核酸處理劑混合，得到待測液；取所述待測液加入微流控系統(tǒng)與pcr反應(yīng)劑混合，進(jìn)行qpcr擴(kuò)增，獲得檢測結(jié)果。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的核酸檢測方法，其特征在于，以所述待測樣本的體積為基準(zhǔn)，所述核酸處理劑的加入量為100～500μg/μl；

10.權(quán)利要求1或2所述的核酸處理試劑、權(quán)利要求3或4所述的核酸檢測試劑、權(quán)利要求5或6所述的微流控裝置和/或權(quán)利要求7所述的核酸檢測試劑盒在非診斷性核酸檢測中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種核酸處理試劑、檢測試劑、檢測試劑盒、微流控系統(tǒng)、檢測方法及其應(yīng)用。本發(fā)明的核酸處理試劑通過特定質(zhì)量比的水解酶、表面活性劑、胍類化合物、表面活性素、苯酚紅、低聚糖、糖醇以及硫酸鎂協(xié)同作用，充分釋放基因組核酸；并對呼吸道樣本、痰液樣本等樣本中所存在的PCR抑制物具有良好的抑制效果，為后續(xù)qPCR擴(kuò)增反應(yīng)提供一個(gè)耐抑制的緩沖體系。在實(shí)際檢測中，取上述核酸處理試劑與呼吸道樣本、痰液樣本等常見樣本進(jìn)行混合所得的混合液即可直接進(jìn)行qPCR擴(kuò)增反應(yīng)，可免去復(fù)雜的樣本前處理步驟，可在5min內(nèi)完成樣本前處理和qPCR擴(kuò)增，可實(shí)現(xiàn)對樣本的快速核酸檢測，因而可被很好地應(yīng)用于現(xiàn)場快速檢測，具有巨大的應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：汪大明,雷洋,白佳委
受保護(hù)的技術(shù)使用者：安邦（新疆）生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30