本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，具體涉及一種ebv腫瘤疫苗及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、epstein-barr病毒(ebv)是一種廣泛傳播的人類病毒，與多種惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，包括伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、鼻咽癌等，此外它還同傳染性單核細(xì)胞和多發(fā)性硬化癥有關(guān)。盡管大多數(shù)人在初次感染ebv后能夠在免疫系統(tǒng)的控制下無癥狀長期攜帶病毒，但ebv在宿主中的持久性感染有可能導(dǎo)致免疫系統(tǒng)無法完全清除病毒，從而為病毒引發(fā)惡性轉(zhuǎn)化提供了條件。尤其是在免疫功能受損或抑制的個體中，如接受器官移植或干細(xì)胞移植的患者，ebv的再激活會顯著增加發(fā)生淋巴瘤等淋巴增殖性疾病的風(fēng)險。

2、據(jù)統(tǒng)計全球每年新增ebv相關(guān)的腫瘤約200,000例，包括鼻咽癌78,100例，霍奇金淋巴瘤28,600例，伯基特淋巴瘤6,700例，胃癌84,050例等。雖然ebv的感染會給全球的醫(yī)療衛(wèi)生體系帶來嚴(yán)重的負(fù)擔(dān)，但是目前仍然無有效的疫苗和藥物成功上市。因此，開發(fā)一款成功的ebv疫苗用于預(yù)防ebv感染所引起的腫瘤顯得極為重要。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明第一方面的目的，在于提供一種抗原組合物。

2、本發(fā)明第二方面的目的，在于提供與抗原組合物相關(guān)的生物材料。

3、本發(fā)明第三方面的目的，在于提供本發(fā)明第一方面的抗原組合物或本發(fā)明第二方面的生物材料在制備產(chǎn)品中的應(yīng)用。

4、本發(fā)明第四方面的目的，在于提供一種產(chǎn)品。

5、本發(fā)明第五方面的目的，在于提供一種疫苗。

6、為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

7、本發(fā)明的第一個方面，提供一種抗原組合物，所述抗原組合物包括bzlf1、ebna1、ebna3b或ghgl中的至少一種；

8、其中，其中，所述bzlf1的氨基酸序列如seq?id?no:1所示，或seq?id?no:1所示的氨基酸序列經(jīng)一個或多個氨基酸的取代、缺失或添加修飾后且功能相同或相似的氨基酸序列。

9、在本發(fā)明一些實施方式中，所述ebna1的氨基酸序列如seq?id?no:2所示，或seqid?no:2所示的氨基酸序列經(jīng)一個或多個氨基酸的取代、缺失或添加修飾后且功能相同或相似的氨基酸序列。

10、在本發(fā)明一些實施方式中，所述ebna3b的氨基酸序列如seq?id?no:3所示，或seqid?no:3所示的氨基酸序列經(jīng)一個或多個氨基酸的取代、缺失或添加修飾后且功能相同或相似的氨基酸序列。

11、在本發(fā)明一些實施方式中，所述ghgl的氨基酸序列如seq?id?no:4所示，或seq?idno:4所示的氨基酸序列經(jīng)一個或多個氨基酸的取代、缺失或添加修飾后且功能相同或相似的氨基酸序列。

12、上述抗原組合物中的抗原均經(jīng)過一定程度的改造(bzlf1和ebna1具有致癌性，在最大限度地保留其t細(xì)胞表位的同時，對其進(jìn)行安全性，改造如下：刪除甘氨酸-丙氨酸重復(fù)序列，刪除核定位信號和將氨基酸進(jìn)行突變，以消除它們的潛在影響；針對ebna3b，其刪除了部分核定位信號；gl的全長通過(ggggs)3與gh的胞外域全長連接)，改造后的抗原組合物具有很好的安全性與免疫原性，能夠有效預(yù)防因為ebv感染所引起的腫瘤的發(fā)生。

13、本發(fā)明的第二個方面，提供抗原組合物相關(guān)的生物材料，所述生物材料為a1)～a12)中的任一種：

14、a1)編碼本發(fā)明第一方面的抗原組合物的核酸分子；

15、a2)含有a1)所述核酸分子的表達(dá)盒；

16、a3)含有a1)所述核酸分子的重組載體；

17、a4)含有a2)所述表達(dá)盒的重組載體；

18、a5)含有a1)所述核酸分子的重組微生物；

19、a6)含有a2)所述表達(dá)盒的重組微生物；

20、a7)含有a3)所述重組載體的重組微生物；

21、a8)含有a4)所述重組載體的重組微生物；

22、a9)含有a1)所述核酸分子的轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞系；

23、a10)含有a2)所述表達(dá)盒的轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞系；

24、a11)含有a3)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞系；

25、a12)含有a4)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞系；

26、所述轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞系不包含繁殖材料。

27、在本發(fā)明一些實施方式中，所述載體包括啟動子，所述啟動子與所述核酸分子可操作的連接。

28、在本發(fā)明一些實施方式中，所述載體獨(dú)立地選自非致病性病毒載體和非病毒載體。

29、在本發(fā)明一些實施方式中，所述非致病性病毒載體包括腺病毒載體或逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。

30、在本發(fā)明一些實施方式中，所述非病毒載體包括質(zhì)粒載體。

31、在本發(fā)明一些實施方式中，所述載體為質(zhì)粒載體、噬菌粒、病毒載體、細(xì)胞載體、噬菌體、黏粒、f黏粒、人工染色體。

32、在本發(fā)明一些實施方式中，所述質(zhì)粒載體可以是任選的質(zhì)粒，所述病毒載體可以任選的病毒。

33、本發(fā)明的第三個方面，提供本發(fā)明第一方面的抗原組合物或本發(fā)明第二方面的生物材料在制備產(chǎn)品中的應(yīng)用。

34、在本發(fā)明一些實施方式中，所述產(chǎn)品包括藥物(如疫苗)、試劑(如檢測試劑、診斷試劑)、試劑盒中至少一種。

35、在本發(fā)明一些實施方式中，所述產(chǎn)品的功能為(1)～(6)中任一種：

36、(1)預(yù)防和/或治療ebv感染相關(guān)疾??；

37、(2)制備eb病毒抗體；

38、(3)檢測樣品中eb病毒中bzlf1、ebna1、ebna3b和/或ghgl；

39、(4)eb病毒特異性中和抗體診斷；

40、(5)引發(fā)體液-細(xì)胞免疫應(yīng)答；

41、(6)抑制腫瘤生長。

42、在本發(fā)明一些實施方式中，所述ebv感染相關(guān)疾病包括ebv相關(guān)b細(xì)胞淋巴瘤、鼻咽癌、慢性活動性ebv感染、嗜血細(xì)胞綜合征、造血干細(xì)胞移植或器官移植后ebv感染、淋巴增殖性疾病以及與ebv相關(guān)的胃癌中的至少一種。

43、在本發(fā)明一些實施方式中，所述ebv感染具體為感染上皮細(xì)胞或感染b淋巴細(xì)胞；優(yōu)選為b淋巴細(xì)胞。

44、本發(fā)明的第四個方面，提供一種產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包括本發(fā)明第一發(fā)明的抗原組合物或本發(fā)明第二方面的生物材料。

45、在本發(fā)明一些實施方式中，所述產(chǎn)品包括藥物、試劑、試劑盒中至少一種。

46、在本發(fā)明一些實施方式中，當(dāng)所述產(chǎn)品為藥物時，所述產(chǎn)品還包括藥學(xué)上可接受的輔料。

47、在本發(fā)明一些實施方式中，所述藥物上可接受的輔料包括稀釋劑、潤濕劑、黏合劑、崩解劑、潤滑劑、色香味調(diào)節(jié)劑、溶劑、增溶劑、助溶劑、乳化劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、抗氧劑、賦形劑、穩(wěn)定劑、矯味劑、緩釋劑、金屬絡(luò)合劑、惰性氣體、防腐劑、填充劑、局部止痛劑、ph調(diào)節(jié)劑以及等滲或等張調(diào)節(jié)劑中的至少一種。

48、在本發(fā)明一些實施方式中，所述稀釋劑包括但不限于：淀粉類、糖類、纖維素類、無機(jī)鹽類中至少一種。所述潤濕劑包括但不限于：水、乙醇、丙醇中至少一種。所述黏合劑包括但不限于：淀粉漿、糊精、糖、纖維素衍生物、明膠、聚維酮、聚乙二醇中至少一種。所述崩解劑包括但不限于：微晶纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉淀粉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮、表面活性劑(如十二烷基苯磺酸鈉、硬脂酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、脂肪酸山梨坦或聚山梨等)、泡騰崩解劑中至少一種。所述潤滑劑包括但不限于：滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鎂、微粉硅膠、碳酸鈣、碳酸氫鈉、聚乙二醇中至少一種。所述色香味調(diào)節(jié)劑包括但不限于：色素、香料、甜味劑、膠漿劑、矯臭劑中至少一種。所述溶劑包括但不限于：水、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、二甲基亞砜、液體石蠟、脂肪油、乙酸乙酯、植物油(如大豆油、蓖麻油、花生油、調(diào)和油等)中至少一種。所述增溶劑包括但不限于：吐溫類、賣澤類、聚氧乙烯脂肪醇醚類、肥皂類、硫酸化物、磺酸化物中至少一種。所述助溶劑包括但不限于：有機(jī)酸及其鹽類、酰胺及胺類化合物、無機(jī)鹽、聚乙二醇、聚維酮、甘油中至少一種。所述乳化劑包括但不限于：司盤類、吐溫類、賣澤類、芐澤類、甘油脂肪酸酯、高級脂肪酸鹽、硫酸化物、磺酸化物、阿拉伯膠、西黃耆膠、明膠、果膠、磷脂、瓊脂、海藻酸鈉、氫氧化物、二氧化硅、皂土中至少一種。所述助懸劑包括但不限于：甘油、糖漿、阿拉伯膠、西黃耆膠、瓊脂、海藻酸鈉、纖維素衍生物、聚維酮、卡波普、聚乙烯醇、觸變膠中至少一種。所述抗氧劑包括但不限于：亞硫酸鹽、焦亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、抗壞血酸、沒食子酸及其酯類中至少一種。所述金屬絡(luò)合劑包括但不限于：乙二胺四乙酸二鈉、多羧酸化合物中至少一種；所述惰性氣體包括但不限于：氮?dú)?、二氧化碳中至少一種。所述防腐劑包括但不限于：尼泊金類、有機(jī)酸及其鹽、季銨類化合物、醋酸氯己定、醇類、酚類、揮發(fā)油中至少一種。所述填充劑包括淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素或葡萄糖中至少一種。所述矯味劑包括阿斯巴甜、蔗糖素、香精、甜菊素、安賽蜜、檸檬酸或糖精鈉中至少。所述局部止痛劑包括但不限于：苯甲醇、三氯叔丁醇、利多卡因、普魯卡因中至少一種。所述ph調(diào)節(jié)劑包括但不限于：鹽酸、硫酸、磷酸、枸櫞酸、酒石酸、醋酸、氫氧化鈉、碳酸氫鈉、乙二胺、葡甲胺、磷酸鹽、醋酸鹽、枸櫞酸鹽中至少一種。所述等滲或等張調(diào)節(jié)劑包括但不限于：葡萄糖、氯化鈉、枸櫞酸鈉、山梨醇、木糖醇中至少一種。

49、在本發(fā)明一些實施方式中，所述藥物還可以包含聯(lián)用藥物。所述聯(lián)用藥物包括治療或預(yù)防ebv感染相關(guān)疾病的藥物。

50、在這種情況下，至少兩種活性成分可一起給予或分別給予，以及作為同一藥物制劑的一部分或作為不同的制劑給予。

51、在本發(fā)明一些實施方式中，所述藥物可以通過經(jīng)口、胃腸外(例如靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi))、顱內(nèi)、鞘內(nèi)、動脈內(nèi)(例如經(jīng)由頸動脈)、直腸、皮膚、經(jīng)鼻、陰道、吸入、皮膚(貼劑)或眼部等方式施用，施用的有效劑量為藥學(xué)上可接受的劑量。

52、在本發(fā)明一些實施方式中，所述藥物的劑型選自片劑(如普通片劑、雙層片劑、多層片劑、緩釋片劑、單室控釋片劑、雙室控釋片劑、微孔型控釋片劑、舌下含片、口腔速崩片、分散片、腸溶片)、丸劑、貼劑、粉劑、混懸劑、凝膠、乳液、乳膏、顆粒劑、溶液劑、納米顆粒、滴劑、膠囊(如普通膠囊、緩釋膠囊、控釋膠囊、含有微丸或小片的膠囊、含有微丸或小片的ph依賴型膠囊、胃腸復(fù)合膠囊)、灌腸劑、栓劑、沖劑、茶劑、注射劑、噴霧劑和針劑。

53、本發(fā)明的第五個方面，提供一種疫苗，包括本發(fā)明第一方面的抗原組合物或本發(fā)明第二方面的生物材料。

54、在本發(fā)明一些實施方式中，所述疫苗包括dna載體疫苗和病毒載體疫苗。所述疫苗在使用時，首先接種dna載體疫苗，最后加強(qiáng)免疫是使用病毒載體疫苗。

55、在本發(fā)明一些實施方式中，所述dna載體疫苗由包括含有bzlf1、ebna1、ebna3b和/或ghgl作為抗原與dna疫苗載體構(gòu)建得到；所述病毒載體疫苗由包括含有bzlf1、ebna1、ebna3b和/或ghgl作為抗原與病毒疫苗載體構(gòu)建得到。

56、在本發(fā)明一些實施方式中，所述疫苗包括單價疫苗或多價疫苗。

57、在本發(fā)明一些實施方式中，所述dna載體疫苗包括dna載體單價疫苗和dna載體多價疫苗，其中，所述dna載體單價疫苗由bzlf1、ebna1、ebna3b或ghgl作為抗原分別與dna疫苗載體構(gòu)建得到；所述dna載體多價疫苗由各dna載體單價疫苗按一定比例(如各抗原等質(zhì)量比)混合得到。所述dna疫苗載體可以任選本領(lǐng)域常見的dna載體，如pdrvi3.0。

58、在本發(fā)明一些實施方式中，所述病毒載體疫苗包括病毒載體單價疫苗和病毒載體多價疫苗，其中，所述病毒載體單價疫苗由bzlf1、ebna1、ebna3b或ghgl作為抗原分別與病毒疫苗載體構(gòu)建得到；所述病毒載體多價疫苗由各病毒載體單價疫苗按一定比例(如各抗原等質(zhì)量比)混合得到。所述病毒疫苗載體可以任選本領(lǐng)域常見病毒，如天壇株痘病毒。

59、本發(fā)明的有益效果是：

60、本發(fā)明提供了一種新的ebv疫苗抗原組合，ebna1、ebna3b和bzlf1基因為強(qiáng)t細(xì)胞反應(yīng)的靶點(diǎn)，可通過誘導(dǎo)針對這些基因的特異性t細(xì)胞免疫來識別和消滅ebv感染的陽性細(xì)胞；ghgl誘導(dǎo)的特異性抗體中和細(xì)胞外的ebv病毒，將四種抗原進(jìn)行結(jié)合形成ebv多價疫苗，其具有很好的安全性與免疫原性，可顯著減少ebv復(fù)制，預(yù)防ebv腫瘤的發(fā)生。