本發(fā)明屬于新型鴨呼腸孤病毒檢測，尤其涉及一種抗新型鴨呼腸孤病毒的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株、單克隆抗體、試劑或試劑盒與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、新型鴨呼腸孤病毒病是近年影響?zhàn)B鴨業(yè)的新發(fā)疫病，該病主要感染多品種雛鴨，以脾臟出血和壞死為主要病理特征，并能引起免疫抑制和生長障礙，且易繼發(fā)細(xì)菌感染，致使肉鴨體重下降、出欄合格率顯著降低和種鴨產(chǎn)蛋率下降、種蛋出雛率降低，給養(yǎng)鴨業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。該病由新型鴨呼腸孤病毒(novel?duckreovirus，ndrv)引起，屬于呼腸孤病毒科正呼腸孤病毒屬，是一種分節(jié)段的雙股rna病毒。其在血清上不同于之前流行的經(jīng)典番鴨呼腸孤病毒(muscovy?duck?reovirus，mdrv)，目前尚無商品化的疫苗和有效藥物。

2、ndrv不能凝集雞、鴨、鵝、綿羊、鼠、兔的紅細(xì)胞，能在乳倉鼠腎細(xì)胞(bhk-21)、雞胚成纖維細(xì)胞(cef)、雞肝癌細(xì)胞(lmh)等多種細(xì)胞增殖，導(dǎo)致巨融合、圓縮等細(xì)胞病變。ndrv總基因組大小為23.5kb，包含10個片段，3個長片段(l1、l2、l3)，3個中片段(m1、m2、m3)與4個小片段(s1、s2、s3、s4)。s1基因是小片段基因組中最大的基因，與arv和mdrv的同源性最低，是與arv和mdrv二者進(jìn)行區(qū)別的最主要基因，是與ndrv感染、致病及免疫保護(hù)等關(guān)系密切的基因之一。

3、針對ndrv的檢測方法的研究很多，如病原學(xué)檢測方法、免疫學(xué)檢測方法和分子生物學(xué)檢測方法，不同檢測方法的靈敏性也存在差異。包括瓊脂擴(kuò)散試驗，血清中和試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗(elisa)、pcr方法、熒光定量rt-pcr方法等。但上述方法均存在缺點，比如瓊脂擴(kuò)散試驗存在敏感性低的缺點，中和試驗存在費時耗力的缺點，進(jìn)行ndrv?elisa抗體檢測必須通過雞檢查法獲得雞血清進(jìn)行檢測，又存在費時成本高的問題。而使用elisa檢測ndrv的基礎(chǔ)是得到對ndrv具有高特異性和高靈敏度的單克隆抗體。因此，亟需一種高特異性和高靈敏度的抗新型鴨呼腸孤病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，實現(xiàn)新型鴨呼腸孤病毒的高靈敏度檢測，建立穩(wěn)定高效的檢測ndrv的ifa方法用于禽活疫苗的質(zhì)量檢測和ndrv疫病的診斷。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種抗新型鴨呼腸孤病毒的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株、單克隆抗體、試劑或試劑盒與應(yīng)用，該雜交瘤細(xì)胞株分泌的抗新型鴨呼腸孤病毒的單克隆抗體，在檢測新型鴨呼腸孤病毒方面具有良好的特異性和靈敏度。

2、為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供了一種抗新型鴨呼腸孤病毒的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，所述抗新型鴨呼腸孤病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株命名為雜交瘤細(xì)胞株ndrv?mab-sigma?c-9，所述雜交瘤細(xì)胞株ndrv?mab-sigma?c-9保藏編號為cctccno:c2024284。

4、本發(fā)明提供了一種抗新型鴨呼腸孤病毒的單克隆抗體，所述單克隆抗體通過上述抗新型鴨呼腸孤病毒的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株或其傳代單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株分泌得到。

5、本發(fā)明提供了一種檢測新型鴨呼腸孤病毒的試劑或試劑盒，包括上述的單克隆抗體。

6、本發(fā)明提供了一種間接免疫熒光試劑盒，所述試劑盒包括上述的單克隆抗體和熒光素標(biāo)記的山羊抗小鼠抗體。

7、優(yōu)選的，所述熒光素包括fitc。

8、優(yōu)選的，所述試劑盒還包括樣品稀釋液和樣品洗滌液。

9、優(yōu)選的，所述樣品稀釋液包括ph值為7.0～7.4的9～11mm磷酸緩沖液；所述樣品洗滌液包括ph值為7.0～7.4的9～11mm磷酸緩沖液。

10、本發(fā)明提供了一種上述的抗新型鴨呼腸孤病毒的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株、單克隆抗體、試劑或試劑盒或間接免疫熒光試劑盒在檢測禽病毒活疫苗的安全性中的應(yīng)用。

11、本發(fā)明提供了一種上述的抗新型鴨呼腸孤病毒的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株或單克隆抗體在制備檢測新型鴨呼腸孤病毒產(chǎn)品中的應(yīng)用。

12、優(yōu)選的，所述產(chǎn)品包括試劑或試劑盒。

13、相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有如下有益效果：

14、本發(fā)明提供了一種抗新型鴨呼腸孤病毒的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株、單克隆抗體、試劑或試劑盒與應(yīng)用，本發(fā)明所述抗新型新型鴨呼腸孤病毒的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株分泌的單克隆抗體同時識別ndrv不同毒株，而不與雞減蛋綜合征病毒、禽白血病病毒、雞傳染性喉氣管炎病毒、禽呼腸孤病毒、番鴨呼腸孤病毒等病毒發(fā)生交叉反應(yīng)，利用該單克隆抗體檢測新型鴨呼腸孤病毒最低檢出限為10tcid50。因此，利用本發(fā)明抗新型鴨呼腸孤病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株分泌的單克隆抗體制備的間接免疫熒光試劑盒具有良好的特異性和靈敏性。該試劑盒不僅可用于禽病毒類活疫苗中ndrv的外源病毒檢測，還可用于ndrv的臨床檢測和流行病學(xué)調(diào)查。

15、生物保藏證明

16、所述抗新型鴨呼腸孤病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株命名為雜交瘤細(xì)胞株ndrvmab-sigma?c-9，于2024年8月26日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(cctcc)，保藏編號為cctcc?no:c2024284，保藏單位地址：湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號武漢大學(xué)校內(nèi)。

技術(shù)特征：

1.一種抗新型鴨呼腸孤病毒的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，其特征在于，所述抗新型鴨呼腸孤病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株命名為雜交瘤細(xì)胞株ndrv?mab-sigma?c-9，所述雜交瘤細(xì)胞株ndrv?mab-sigma?c-9保藏編號為cctccno:c2024284。

2.一種抗新型鴨呼腸孤病毒的單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體通過權(quán)利要求1所述抗新型鴨呼腸孤病毒的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株或其傳代單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株分泌得到。

3.一種檢測新型鴨呼腸孤病毒的試劑或試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求2所述的單克隆抗體。

4.一種間接免疫熒光試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求2所述的單克隆抗體和熒光素標(biāo)記的山羊抗小鼠抗體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的間接免疫熒光試劑盒，其特征在于，所述熒光素包括fitc。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的間接免疫熒光試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括樣品稀釋液和樣品洗滌液。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的間接免疫熒光試劑盒，其特征在于，所述樣品稀釋液包括ph值為7.0～7.4的9～11mm磷酸緩沖液；所述樣品洗滌液包括ph值為7.0～7.4的9～11mm磷酸緩沖液。

8.權(quán)利要求1所述的抗新型鴨呼腸孤病毒的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株、權(quán)利要求2所述的單克隆抗體、權(quán)利要求3所述的試劑或試劑盒或權(quán)利要求4～7任一項所述的間接免疫熒光試劑盒在檢測禽病毒活疫苗的安全性中的應(yīng)用。

9.權(quán)利要求1所述的抗新型鴨呼腸孤病毒的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株或權(quán)利要求2所述的單克隆抗體在制備檢測新型鴨呼腸孤病毒產(chǎn)品中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述產(chǎn)品包括試劑或試劑盒。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種抗新型鴨呼腸孤病毒的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株、單克隆抗體、試劑或試劑盒與應(yīng)用，屬于新型鴨呼腸孤病毒檢測技術(shù)領(lǐng)域。所述抗新型鴨呼腸孤病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株命名為雜交瘤細(xì)胞株NDRV?Mab?Sigma?C?9，所述雜交瘤細(xì)胞株NDRV?Mab?Sigma?C?9保藏編號為CCTCC?NO:C2024284。利用本發(fā)明抗新型鴨呼腸孤病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株分泌的單克隆抗體制備的間接免疫熒光試劑盒具有良好的特異性和靈敏性。該試劑盒不僅可用于禽病毒類活疫苗中NDRV的外源病毒檢測，還可用于NDRV的臨床檢測和流行病學(xué)調(diào)查。

技術(shù)研發(fā)人員：黃小潔,劉丹,毛婭卿,薛麒,鄧永,孔冬妮,吳華偉
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9