本發(fā)明涉及中醫(yī)藥領域，具體涉及從箭葉淫羊藿中提取的黃酮對映體化合物及其制備方法與應用。

背景技術：

1、中藥治療疾病已有幾千年的文明史，但隨著科技的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)中藥的成分復雜，對中藥成分的研究越來越引起醫(yī)藥界的高度重視，淫羊藿為小檗科植物淫羊藿、箭葉淫羊藿或柔毛淫羊藿的干燥葉，其中箭葉淫羊藿分布最廣、使用最多?，F(xiàn)代藥理學研究表明，箭葉淫羊藿具有廣泛的藥理作用，如抗腫瘤、抗氧化、抗骨質(zhì)疏松、調(diào)節(jié)免疫功能、抗動脈粥樣硬化和抗抑郁活性等。根據(jù)文獻報道，黃酮是箭葉淫羊藿中的主要有效成分類型，而異戊烯基黃酮是在黃酮骨架上有異戊烯基取代的一類結構類型，通常具有更好的親脂性和藥理活性。

2、乳腺癌是常見的多發(fā)病，嚴重威脅著人們的生命安全和身體健康，特別是人乳腺癌細胞mcf-7引起的乳腺癌，現(xiàn)雖有治療藥物，但效果有限，由于中藥活性成分復雜，具有多重靶向性，而且有治療疾病的獨特療效，從原藥中提取活性成分用于治療特定的疾病，已是中藥發(fā)展的新趨勢，那么能否從淫羊藿活性部位中提取針對通過對乳腺癌細胞mcf-7細胞有顯著抑制作用的黃酮對映體化合物，實現(xiàn)制備抗乳腺癌的藥物，但至今未見有公開的報道。

技術實現(xiàn)思路

1、針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術之不足，本發(fā)明之目的在于，提供從箭葉淫羊藿中提取的黃酮對映體化合物及其制備方法與應用，可有效解決從箭葉淫羊藿中提取的黃酮對映體化合物，實現(xiàn)在制備抗乳腺癌藥物中的應用問題。

2、本發(fā)明解決的技術方案是，從箭葉淫羊藿中提取的黃酮對映體化合物為(2”r,3”r,2”'r)-epimesatine?m(1a)和(2”s,3”s,2”'s)-epimesatine?m(1b)的對映體化合物，分子結構式分別為：

3、

4、化合物(2”s,3”s)-epimesatine?n(2a)和(2”r,3”r)-epimesatine?n(2b)的對映體化合物，分子結構式分別為：

5、

6、其制備方法是：

7、將干燥的箭葉淫羊藿地上部分粉碎，用乙醇，回流提取，得浸膏，用水混懸成混懸液，再分別用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別得石油醚部位浸膏、二氯甲烷部位浸膏、乙酸乙酯部位浸膏和正丁醇部位浸膏，對二氯甲烷部位浸膏，采用硅膠柱層析法進行梯度洗脫分離，根據(jù)薄層色譜(tlc)顯色結果將相似部分合并，得到極性段fr.a……fr.g、fr.h；

8、將極性段fr.f用硅膠柱層析，以石油醚/乙酸乙酯進行梯度洗脫，減壓回收溶劑得到多個組分，然后將所有組分通過薄層色譜(tlc)點板，將薄層板上吸收相似的組分合并，得15個第一分組分fr.f1……fr.f15；

9、將第一分組分fr.f15使用反相硅膠柱層析，以甲醇/水進行梯度洗脫，減壓回收溶劑得到多個組分，然后將多個組分通過薄層色譜(tlc)點板，對薄層板上吸收相似的組分合并，得到12個第二分組分fr.f15.1…fr.f15.9…fr.f15.12；

10、然后將分組分fr.f15.9純化，通過手性色譜柱，以甲醇:水＝80:20洗脫，流速為2ml/min，收集保留時間tr＝39.3min的流分，得到化合物(2”s,3”s)-epimesatine?n(1.3mg)，收集保留時間tr＝33.3min的流分，得化合物(2”r,3”r)-epimesatine?n(1.2mg)；

11、將極性段fr.g用硅膠柱層析，以石油醚/乙酸乙酯進行梯度洗脫，減壓回收得到多個組分，然后將多個組分通過薄層色譜(tlc)點板，對薄層板上吸收相似的組分合并，得到18個第四分組分fr.f1…fr.f17、fr.f18；

12、將第四分組分fr.g17經(jīng)正相硅膠層析，以石油醚/乙酸乙酯進行梯度洗脫，減壓回收得到多個組分，然后將多個組分通過薄層色譜(tlc)點板，對薄層板上吸收相似的組分合并，得到19個第五分組分，即fr.g17.1…fr.g17.15…fr.g17.19；

13、將第五分組分fr.g17.15上ods柱色譜，以甲醇/水進行梯度洗脫，減壓回收得到多個組分，然后將多個組分通過薄層色譜(tlc)點板，對薄層板上吸收相似的組分合并，得到12個第六分組分fr.g17.15.1…fr.g17.15.10…fr.g17.15.12；

14、將第六分組分fr.g17.15.10上ods柱色譜，以甲醇/水進行梯度洗脫，減壓回收得到多個組分，然后將多個組分通過薄層色譜(tlc)點板，對薄層板上吸收相似的組分合并，得到13個組分fr.g17.15.10.1…fr.g17.15.10.6…fr.g17.15.10.13；

15、然后將組分fr.g17.15.10.6經(jīng)半制備hplc純化，采用液相色譜柱，流動相為體積比的乙腈/水，流速為2ml/min，分離得到7個組分fr.g17.15.10.6.1、fr.g17.15.10.6.2…fr.g17.15.10.6.7；

16、將組分fr.g17.15.10.6.2再次經(jīng)hplc純化，采用液相色譜柱，流動相為體積比的乙腈/水，流速為2ml/min，收集保留時間tr63.1?min的流分，干燥，得化合物(2”r,3”r,2”'r)-epimesatine?m，收集保留時間tr59.1?min的流分，干燥，得化合物(2”s,3”s,2”'s)-epimesatine?m。

17、本發(fā)明從箭葉淫羊藿中提取異戊烯基黃酮對映體化合物(2”r,3”r,2”'r)-epimesatine?m和(2”s,3”s,2”'s)-epimesatine?m、(2”s,3”s)-epimesatine?n和(2”r,3”r)-epimesatine?n對人乳腺癌細胞mcf-7的細胞活力有顯著的抑制作用，具有抗乳腺癌活性，實現(xiàn)在制備治療乳腺癌藥物中的應用。

18、本發(fā)明原料豐富，制備方法易操作，可有效從箭葉淫羊藿中提取異戊烯基黃酮對映體化合物(2”r,3”r,2”'r)-epimesatine?m和(2”s,3”s,2”'s)-epimesatine?m、(2”s,3”s)-epimesatine?n和(2”r,3”r)-epimesatine?n，上述化合物具有抗乳腺癌活性，對人乳腺癌細胞mcf-7的細胞活力有顯著的抑制作用，且對人正常乳腺細胞mcf-10a無毒性，可有效用于制備治療乳腺癌藥物，開拓了箭葉淫羊藿的藥用價值和經(jīng)濟價值，是治療乳腺癌藥物上的創(chuàng)新，有巨大的經(jīng)濟和社會效益。

技術特征：

1.?從箭葉淫羊藿中提取的黃酮對映體化合物，(2''r,3''r,2'''r)-epimesatine?m(1a)和(2''s,3''s,2'''s)-epimesatine?m?(1b)為對映體化合物，分子結構式分別為：

2.?從箭葉淫羊藿中提取的黃酮對映體化合物，其制備方法是：

3.?權利要求1所述的從箭葉淫羊藿中提取的黃酮對映體化合物(2''r,3''r,2'''r)-epimesatine?m和(2''s,3''s,2'''s)-epimesatine?m、(2''s,3''s)-epimesatine?n和(2''r,3''r)-epimesatine?n在制備抗乳腺癌藥物中的應用。

4.根據(jù)權利要求3所述的從箭葉淫羊藿中提取的黃酮對映體化合物(2''r,3''r,2'''r)-epimesatine?m和(2''s,3''s,2'''s)-epimesatine?m、(2''s,3''s)-epimesatine?n和(2''r,3''r)-epimesatine?n在制備抗乳腺癌藥物中的應用，其特征在于，所述的乳腺癌為人乳腺癌細胞mcf-7。

技術總結
從箭葉淫羊藿中提取的黃酮對映體化合物及其制備方法與應用,其制備方法是：將箭葉淫羊藿粉碎制膏，用水混懸，分別用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得各部位浸膏，用硅膠柱層析法進行梯度洗脫分離，根據(jù)薄層色譜（TLC）顯色結果將相似部分合并，得到多個極性段；將目標極性段層析，梯度洗脫，得多個組分，然后通過薄層色譜（TLC）點板吸收相似組分合并，得多個分組分；將目標分組分洗脫純化，收集不同保留時間的流分，干燥，分別得4個化合物，對人乳腺癌細胞MCF?7的細胞活力有顯著的抑制作用，具有抗乳腺癌活性，實現(xiàn)在制備治療乳腺癌藥物中的應用，社會和經(jīng)濟效益巨大。

技術研發(fā)人員：解雙雙,張靖柯,曾夢楠,喻翔,鄭曉珂,馮衛(wèi)生
受保護的技術使用者：河南中醫(yī)藥大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/1/28