本發(fā)明涉及外泌體提取領(lǐng)域，具體是涉及一種外泌體低溫提取裝置及其使用方法。

背景技術(shù)：

1、外泌體提取是細(xì)胞生物學(xué)研究中的一個重要步驟，主要用于從復(fù)雜的生物樣本中分離和純化外泌體，在進(jìn)行外泌體提取時，應(yīng)盡量避免樣本中內(nèi)容物的降解和變性，所有操作應(yīng)在4℃條件下進(jìn)行，提取外泌體的操作過程需要嚴(yán)格控制提取溫度。

2、中國專利cn218596389u公開了一種外泌體提取裝置，包括殼體以及位于殼體內(nèi)并依次連通的第一過濾器、第二過濾器以及切向流過濾器。殼體上設(shè)置有用于對殼體內(nèi)進(jìn)行冷卻的冷卻元件。第二過濾器上設(shè)置有用于對第二過濾器以及第一過濾器內(nèi)產(chǎn)生負(fù)壓的真空泵；第二過濾器與切向流過濾器之間設(shè)置有第一蠕動泵；第一過濾器、第二過濾器以及切向流過濾器的濾孔孔徑依次減??；該外泌體提取裝置不僅可以使得整個外泌體提取過程處于低溫環(huán)境，有效抑制待提取體系中酶的活性，以避免待提取體系中的酶將蛋白水解成較多的雜質(zhì)小分子；也無需借助昂貴的超速離心設(shè)備，相比于超速離心方式可有效縮短提取分離外泌體的時間，更高效。

3、多次過濾提取外泌體涉及到多個過濾結(jié)構(gòu)、傳輸液體的泵體、管道結(jié)構(gòu)，整體提取設(shè)備的體積較大，并且細(xì)胞液在經(jīng)過多次過濾后，過濾隔離在濾膜上的液體量逐漸減少，部分外泌體沉淀在濾膜上，外泌體無法完全被傳輸?shù)讲煌^濾結(jié)構(gòu)中，傳輸過濾過程中外泌體存在損耗，并且沉淀在濾膜上的部分外泌體對于濾膜過濾的效果也產(chǎn)生較大的影響，使得部分小分子物質(zhì)難以被過濾出來，從而影響到最終過濾外泌體的純度。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對上述問題，提供一種外泌體低溫提取裝置及其使用方法，通過轉(zhuǎn)向組件和液體輸送組件簡化多次過濾結(jié)構(gòu)，并且收集筒在轉(zhuǎn)動至不同的過濾筒下方時通過振蕩組件對過濾筒中的細(xì)胞液進(jìn)行振蕩分散解決了次過濾提取外泌體涉及到多個過濾結(jié)構(gòu)、傳輸液體的泵體、管道結(jié)構(gòu)，整體提取設(shè)備的體積較大，并且細(xì)胞液在經(jīng)過多次過濾后，過濾隔離在濾膜上的液體量逐漸減少，部分外泌體沉淀在濾膜上，外泌體無法完全被傳輸?shù)讲煌^濾結(jié)構(gòu)中，傳輸過濾過程中外泌體存在損耗，并且沉淀在濾膜上的部分外泌體對于濾膜過濾的效果也產(chǎn)生較大的影響，使得部分小分子物質(zhì)難以被過濾出來，從而影響到最終過濾外泌體的純度等問題。

2、為解決現(xiàn)有技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種外泌體低溫提取裝置，包括提取架和固定在提取架上的承載臺，外泌體提取裝置還包括等角度安裝在承載臺上的多個過濾筒、圓周滑動安裝有提取架上的收集筒、連接在收集筒上的真空管、固定在過濾筒中用于加入輔助外泌體提取試劑的進(jìn)液管；多個過濾筒中安裝有孔隙大小不同的濾膜；所述收集筒側(cè)壁上滑動安裝有滑行塊，滑行塊上固定有連接密封收集筒與過濾筒的連接環(huán)，收集筒上固定連接有轉(zhuǎn)向架，轉(zhuǎn)向架上固定安裝有銜接升降桿，銜接升降桿升降端固定有滑行塊；所述提取架上設(shè)置有控制收集筒轉(zhuǎn)動至不同過濾筒下方的轉(zhuǎn)向組件，轉(zhuǎn)向組件上設(shè)置有控制不同過濾筒中液體傳輸?shù)囊后w輸送組件。

3、優(yōu)選的，所述轉(zhuǎn)向組件包括固定在提取架上的驅(qū)動電機(jī)，驅(qū)動電機(jī)輸出端固定連接有驅(qū)動轉(zhuǎn)桿，驅(qū)動轉(zhuǎn)桿上固定有下齒柱，下齒柱上卡合滑動套設(shè)有內(nèi)齒槽桿，內(nèi)齒槽桿活動連接在承載臺上，提取架上轉(zhuǎn)動安裝有上齒柱，上齒柱與內(nèi)齒槽桿之間卡合滑動連接；所述轉(zhuǎn)向架上固定安裝有移位升降桿，移位升降桿升降端固定有升降環(huán)，升降環(huán)與內(nèi)齒槽桿之間轉(zhuǎn)動裝配。

4、優(yōu)選的，所述液體輸送組件包括固定套設(shè)在內(nèi)齒槽桿上的支撐架，支撐架上固定安裝有泵體，泵體上連接有吸收外泌體液體的吸收管，泵體上還連接有排出外泌體液體的排液管，吸收管和排液管分別與圓周相鄰的兩組過濾筒位置相互對應(yīng)；所述吸收管和排液管的出口端與過濾筒同軸對應(yīng)，吸收管的長度大于排液管的長度。

5、優(yōu)選的，所述進(jìn)液管上設(shè)置有控制過濾筒振蕩從而避免濾膜被細(xì)胞液沉淀物堵塞的振蕩組件。

6、優(yōu)選的，所述振蕩組件包括開設(shè)在進(jìn)液管上的s形滑槽，s形滑槽上滑動連接有滑環(huán)，滑環(huán)上轉(zhuǎn)動裝配有定位環(huán)；所述滑環(huán)上固定連接有振蕩桿，振蕩桿上固定連接有用于振動敲擊過濾筒內(nèi)側(cè)壁的振蕩錘。

7、優(yōu)選的，所述提取架上轉(zhuǎn)動安裝有與上齒柱固定連接的主動齒輪，提取架上轉(zhuǎn)動連接有多個與主動齒輪嚙合裝配的從動齒輪，從動齒輪的數(shù)量與過濾筒的數(shù)量相同，所述從動齒輪上偏軸心連接有滑柱，所述提取架上固定安裝有導(dǎo)向滑軌，導(dǎo)向滑軌上滑動裝配有導(dǎo)向滑架，導(dǎo)向滑架與滑柱之間滑動裝配，所述導(dǎo)向滑架上轉(zhuǎn)動連接有推行桿，推行桿與定位環(huán)之間轉(zhuǎn)動連接。

8、優(yōu)選的，所述提取架上套設(shè)安裝有用于調(diào)控外泌體提取溫度的低溫控制組件；所述低溫控制組件包括套設(shè)在提取架上的保溫罩，保溫罩上安裝有冷卻管，保溫罩中固定有冷凝器，冷凝器與冷卻管之間連接的一端安裝有壓縮機(jī)，冷凝器與冷卻管之間連接的另一端安裝有節(jié)流閥，保溫罩上安裝有控制冷凝器散熱的風(fēng)機(jī)。

9、優(yōu)選的，所述冷卻管上連接有均勻調(diào)控過濾筒中外泌體提取溫度的分流冷卻組件。

10、優(yōu)選的，所述分流冷卻組件包括同軸套設(shè)在過濾筒外部的冷卻環(huán)，冷卻環(huán)中安裝有冷卻支管，冷卻支管上貫通連接有控制冷卻液進(jìn)出的進(jìn)水管和出水管，進(jìn)水管和出水管通過伸縮導(dǎo)管與冷卻管貫通連接；所述進(jìn)水管、出水管和冷卻環(huán)之間固定安裝有固定架，固定架與定位環(huán)之間固定裝配有定位架。

11、本發(fā)明還包括一種外泌體低溫提取裝置的使用方法，具有上述的一種外泌體低溫提取裝置，包括以下步驟：

12、s1、簡化提取設(shè)備多次過濾，通過進(jìn)液管將細(xì)胞液導(dǎo)入一個過濾筒中，初步過濾后關(guān)閉過濾筒的閥門，通過液體輸送組件將該過濾筒中的液體導(dǎo)入相鄰過濾筒中，且通過轉(zhuǎn)向組件控制收集筒移動到不同的過濾筒下方，多個過濾筒和一組液體輸送組件可以完成對細(xì)胞液的多次過濾。

13、s2、振蕩細(xì)胞液輔助外泌體提取，外泌體顆粒沉淀的情況下容易堵塞濾膜，在轉(zhuǎn)動收集筒的過程中振蕩過濾筒，避免過濾筒中的外泌體沉淀堵塞在濾膜上。

14、s3、調(diào)節(jié)外泌體提取溫度，通過調(diào)節(jié)過濾筒的溫度精準(zhǔn)控制外泌體提取的環(huán)境溫度，保持提取溫度在4℃，避免外泌體在提取時出現(xiàn)降解的情況，提取后外泌體存放溫度控制在-70℃。

15、本發(fā)明相比較于現(xiàn)有技術(shù)的有益效果是：

16、1.本發(fā)明中設(shè)置有轉(zhuǎn)向組件和液體傳輸組件簡化設(shè)備且能完成對細(xì)胞液多次過濾處理，細(xì)胞液經(jīng)過一次過濾處理后，通過液體傳輸組件可以傳輸?shù)搅硪粋€過濾筒中，并且通過轉(zhuǎn)向組件轉(zhuǎn)動切換收集筒和液體輸送組件的位置，使得細(xì)胞液可以多次被過濾處理，并且細(xì)胞液在傳輸?shù)倪^程中可以關(guān)閉過濾筒下方的閥門結(jié)構(gòu)，通過進(jìn)液管向過濾筒中添加輔助外泌體提取的試劑，增加液體容積，減少外泌體在不斷傳輸過程中的損耗。

17、2.本發(fā)明中設(shè)置有振蕩組件在轉(zhuǎn)向組件驅(qū)動的過程中對過濾筒產(chǎn)生振蕩，轉(zhuǎn)向組件驅(qū)動控制收集筒圓周轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)向組件中的上齒柱帶動主動齒輪轉(zhuǎn)動，在齒輪嚙合傳動作用下控制從動齒輪轉(zhuǎn)動，從動齒輪通過滑柱推動導(dǎo)向滑架橫向往復(fù)移動，導(dǎo)向滑架通過推行桿控制定位環(huán)縱向移動，定位環(huán)在縱向移動過程中控制滑環(huán)在進(jìn)液管外部上下移動的同時往復(fù)轉(zhuǎn)動，定位環(huán)轉(zhuǎn)動通過振蕩桿和振蕩錘振蕩敲擊過濾筒，使得過濾筒中的細(xì)胞液振蕩分散，避免細(xì)胞液中的外泌體沉淀在濾膜上，降低外泌體傳輸時的損耗，同時也避免外泌體沉淀堵塞在濾膜上。

18、3.本發(fā)明中設(shè)置有分流冷卻組件可以均勻有效調(diào)控過濾筒提取外泌體的溫度，冷卻管中流動的冷卻液通過伸縮導(dǎo)管、進(jìn)水管流動進(jìn)入冷卻支管中，冷卻支管套設(shè)對應(yīng)在過濾筒外部，近距離調(diào)整過濾筒周邊的溫度，并且當(dāng)振蕩組件中的定位環(huán)縱向移動過程中，定位環(huán)通過定位架打動冷卻環(huán)同步上下移動，冷卻環(huán)上下往復(fù)移動能夠擴(kuò)大冷卻支管調(diào)控過濾筒溫度的范圍，提高調(diào)控溫度的效果，快速有效保持過濾筒中的細(xì)胞液在低溫的環(huán)境下提取外泌體。