本發(fā)明涉及微陣列固定化合物，具體涉及一種雙吖丙啶類(lèi)化合物基底及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、微陣列（microarray）是一種高通量生物技術(shù)，用于同時(shí)檢測(cè)成千上萬(wàn)種生物分子（如dna、rna、蛋白質(zhì)或糖分子）的表達(dá)水平或存在情況。它是一種平板設(shè)備，通常使用硅片、玻璃片或尼龍膜作為基底，上面排列著許多微小的探針點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)都攜帶特定的分子探針（如寡核苷酸、抗體或糖類(lèi)分子）。這些探針能夠與樣品中的目標(biāo)分子發(fā)生特異性結(jié)合。使得對(duì)大量生物分子的快速分析成為可能，在生物醫(yī)學(xué)中有著廣泛的應(yīng)用。通過(guò)特殊的表面化學(xué)處理將各種生物分子有效地固定在基底表面是生物芯片制備和應(yīng)用的關(guān)鍵步驟。

2、傳統(tǒng)基質(zhì)（如普通載玻片）的修飾，涉及玻璃表面羥基的活化、將帶有氨基或者其他活潑基團(tuán)的分子共價(jià)固定玻璃表面的反應(yīng)、所固定分子與基質(zhì)的反應(yīng)等步驟，分子與基質(zhì)表面的化學(xué)反應(yīng)可能對(duì)其活性產(chǎn)生影響。其操作步驟較復(fù)雜，成本較高。在基質(zhì)上固定的分子探針數(shù)量有限，并且這些分子探針僅能在基質(zhì)表面的二維平面上排列，限制了蛋白質(zhì)或其他分子在三維空間中的識(shí)別和相互作用。

3、基于上述背景技術(shù)，發(fā)明人認(rèn)為，如何設(shè)計(jì)一種制作方法簡(jiǎn)單、并且具有較大的分子探針固定密度、較高的分子探針固化效率、以及較好的檢測(cè)靈敏度的微陣列芯片基底，是本領(lǐng)域的技術(shù)人員急需解決的技術(shù)問(wèn)題。

4、公開(kāi)于該背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對(duì)本發(fā)明的總體背景的理解，而不應(yīng)當(dāng)被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種雙吖丙啶類(lèi)化合物基底及其制備方法和應(yīng)用，以解決上述背景技術(shù)中提出的問(wèn)題。

2、一種雙吖丙啶類(lèi)化合物基底，包括修飾有雙吖丙啶類(lèi)化合物的多聚賴(lài)氨酸基底；優(yōu)選的，雙吖丙啶類(lèi)化合物層的厚度范圍在0.01-1000?nm之間。

3、一種如上述所述的雙吖丙啶類(lèi)化合物基底的制備方法，包括以下步驟：

4、在溶劑中加入縮合劑、雙吖丙啶類(lèi)化合物和有機(jī)堿，攪拌至溶解得到第一混合溶液；

5、將多聚賴(lài)氨酸基底浸泡在第一混合溶液中，在惰性氣體的保護(hù)條件下，避光反應(yīng)，得到雙吖丙啶類(lèi)化合物基底；

6、優(yōu)選的，在上述制備方法中，所述雙吖丙啶類(lèi)化合物在混合溶液中的終濃度選自1.5-5mm；所述hatu在混合溶液中的終濃度選自2-7.5?mm。

7、在上述制備方法中，所述惰性氣體為氬氣或氮?dú)狻?/p>

8、在上述制備方法中，所述避光反應(yīng)的時(shí)間選自1-48h。

9、在上述制備方法中，所述多聚賴(lài)氨酸基底中的基底可選自普通玻璃基底、石英玻璃基底、硅基底、金/鍍金基底、銀/鍍銀基底。

10、優(yōu)選的，有機(jī)堿和溶劑的體積比為1：1-1：200；縮合劑和雙吖丙啶類(lèi)化合物的摩爾量比為1:0.1-1:1。

11、優(yōu)選的，有機(jī)堿和溶劑的體積比為1:9；縮合劑和雙吖丙啶類(lèi)化合物的摩爾量比為1:0.8。

12、優(yōu)選的，溶劑包括n,?n-二甲基甲酰胺，dmf中的一種；縮合劑包括n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯，hatu中的一種；有機(jī)堿包括n,?n-二異丙基乙胺，dipea中的一種。

13、優(yōu)選的，所述雙吖丙啶類(lèi)化合物為1,2-二氮雜螺[2.3]己-1-烯-5-羧酸、5-(丙-2-炔-1-基)-1,2-二氮雜螺[2.3]己-1-烯-5-羧酸、1,2-二氮雜螺[2.4]庚-1-烯-5-羧酸、1,2-二氮雜螺[2.5]辛烷-1-烯-6-羧酸、1,2-二氮雜螺[2.3]己-1-烯-5-羧酸甲酯、1,2-二氮雜螺[2.5]辛-1-烯-6-羧酸甲酯、3-甲基-3h-雙吖丙啶-3-丙酸、4-[3-(三氟甲基)-3h-雙吖丙啶-3-基]苯甲酸、3h-雙吖丙啶-3,3-二羧酸二鉀、甲基-雙吖丙啶-丙氨酸、3-甲基-3h-雙吖丙啶-3-丙酰氯、酸-雙吖丙啶-丙酸甲酯、2-(3-丁炔基氮二丙啶-3-基)乙酸、4-[3-(三氟甲基)-3h-雙吖丙啶-3-基]-d-苯丙氨酸、3-(4-(3-(三氟甲基)-3h-二氮雜環(huán)丙烯-3-基)苯基)丙酸、2-(丙-2-炔-1-基氧基)-4-(3-(三氟甲基)-3h-二氮雜萘-3-基)苯甲酸、3-(3-(三氟甲基)-3h-二氮雜萘-3-基)苯甲酸、4-[3-(三氟甲基)-3h-雙吖丙啶-3-基]苯甲酸和3-(3-(丁-3-炔-1-基)-3h-二氮雜萘-3-基)丙酸中的一種。

14、一種如上述所述的雙吖丙啶類(lèi)化合物基底制備的微陣列芯片，雙吖丙啶類(lèi)化合物基底上固定有分子探針；所述雙吖丙啶類(lèi)化合物基底經(jīng)活化后形成卡賓與所述需固定分子層反應(yīng)相連。

15、優(yōu)選的，所述分子探針包括小分子活性化合物、氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、糖蛋白、糖、衍生糖類(lèi)化合物、dna、rna、脂質(zhì)中的一種。

16、一種如上述所述的雙吖丙啶類(lèi)化合物基底制備的微陣列芯片的制備方法，包括以下步驟：

17、取雙吖丙啶類(lèi)化合物基底利用有活化酯的化合物溶液進(jìn)行封閉反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后對(duì)其清洗吹干，得到目標(biāo)雙吖丙啶類(lèi)化合物基底；具體的，有活化酯的化合物如丁內(nèi)酯，戊內(nèi)酯、丁二酰亞胺活化的羧酸等；

18、配置一定濃度的分子探針溶液；

19、將配置好的分子探針溶液點(diǎn)樣并固定至目標(biāo)雙吖丙啶類(lèi)化合物基底表面上，制備微陣列芯片。

20、優(yōu)選的，所述有活化酯的化合物優(yōu)選戊內(nèi)酯，有活化酯的化合物溶液中戊內(nèi)酯的濃度為10%（v/v），所述pbs的濃度為20?mm；其中，取雙吖丙啶類(lèi)化合物基底利用有活化酯的化合物溶液進(jìn)行封閉反應(yīng)，目的在于將多聚賴(lài)氨酸基底上未反應(yīng)的氨基與活化酯發(fā)生?；磻?yīng)，形成氨基酸酯，通過(guò)這種方式，可以進(jìn)一步修飾基底的化學(xué)性質(zhì)，提升基底的功能性。

21、優(yōu)選的，所述將配置好的分子探針溶液點(diǎn)樣并固定至目標(biāo)雙吖丙啶類(lèi)化合物基底表面上的步驟中，分子探針的固定方式包括：第一固定方式和第二固定方式；

22、第一固定方式包括：將點(diǎn)好的目標(biāo)雙吖丙啶類(lèi)化合物基底放入密封容器中，抽干后用紫外燈照射一定時(shí)間，清洗后吹干，得到微陣列芯片；

23、第二固定方式包括：紫外線直接光照點(diǎn)好的目標(biāo)雙吖丙啶類(lèi)化合物基底一定時(shí)間，清洗后吹干，得到微陣列芯片。

24、本發(fā)明實(shí)施例提供的一種雙吖丙啶類(lèi)化合物基底及其制備方法和應(yīng)用，具有以下有益效果：

25、1.本發(fā)明利用雙吖丙啶類(lèi)化合物對(duì)多聚賴(lài)氨酸基底進(jìn)行修飾，其合成步驟簡(jiǎn)單，應(yīng)用范圍廣，可應(yīng)用于高通量生物芯片制備領(lǐng)域、生物分子間相互作用研究、生物分子活性評(píng)價(jià)、疾病診斷、高通量篩選、藥物篩選、熒光陣列成像以及表面等離子體共振成像等，具有廣泛的市場(chǎng)前景；

26、2.制備得到的雙吖丙啶類(lèi)化合物基底穩(wěn)定性良好，在制備生物芯片時(shí)，可通過(guò)光照來(lái)固定生物分子，不需要對(duì)蛋白或糖等偶聯(lián)物進(jìn)行化學(xué)修飾，使得制備結(jié)果更可靠；

27、3.與現(xiàn)有技術(shù)相比，由本發(fā)明研制的雙吖丙啶類(lèi)化合物基底所制備的生物芯片，其檢測(cè)結(jié)果更靈敏，背景低且信號(hào)好，具有普適性；

28、4.此外，本發(fā)明中生物芯片的制作方法具有操作簡(jiǎn)單、控制靈活、無(wú)需特殊設(shè)備、成本低廉、工作效率高的特點(diǎn)。