背景技術：

0、發(fā)明背景

1、一些癌癥可具有十分有限的治療選擇，尤其在癌癥變?yōu)檗D移性及不可切除時。盡管諸如例如手術、化學療法及放射療法的治療已經取得進展，但許多癌癥(諸如例如胰腺癌、結腸直腸癌、肺癌、子宮內膜癌、卵巢癌和前列腺癌)的預后可能較差。因此，存在對癌癥的另外治療的未滿足的需求。

技術實現思路

0、發(fā)明簡述

1、本發(fā)明的實施方案提供了分離的或純化的t細胞受體(tcr)，其包含(i)seq?idno:1-3、(ii)seq?id?no:4-6或(iii)seq?id?no:1-6的氨基酸序列，其中所述tcr對由人白細胞抗原(hla)i類分子呈遞的突變的人ras氨基酸序列具有抗原特異性，并且其中所述突變的人ras氨基酸序列是突變的人kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(kras)氨基酸序列、突變的人harvey大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(hras)氨基酸序列或突變的人神經母細胞瘤大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(nras)氨基酸序列。

2、本發(fā)明的另一實施方案提供了分離的或純化的多肽，其包含本發(fā)明tcr的功能部分，其中所述功能部分包含以下氨基酸序列：(a)全部seq?id?no:1-3，(b)全部seq?id?no:4-6，或(c)全部seq?id?no:1-6。

3、本發(fā)明的另一實施方案提供了包含至少一種本發(fā)明多肽的分離的或純化的蛋白。

4、本發(fā)明的其它實施方案提供了與本發(fā)明的tcr、多肽及蛋白相關的核酸、重組表達載體、宿主細胞、細胞群體和藥物組合物。

5、本發(fā)明的實施方案還提供了檢測哺乳動物中癌癥的存在的方法以及治療或預防哺乳動物中癌癥的方法。

6、附圖中幾個視圖的簡要說明

7、圖1a描述了示例在與二甲基亞砜(dmso)或者用kras?wt?24-mer肽或kras?g12v24-mer肽脈沖的自體dc共培養(yǎng)后，外周血cd8+t細胞的cd137表達的圖。方框中的數字表示在每種共培養(yǎng)條件下表達cd137的t細胞的百分比。

8、圖1b是顯示在t細胞與用dmso、kras?wt?24-mer肽或kras?g12v?24-mer肽脈沖的自體dc共培養(yǎng)后，每2x104個細胞的ifn-γ斑點數目的圖。用pma:離子霉素培養(yǎng)的t細胞以及與用dmso脈沖的dc培養(yǎng)的t細胞作為對照。

9、圖2顯示了描述實驗數據的圖(點圖)，示例了已經用結合kras?g12v四聚體-別藻藍素(apc)或kras?g12v四聚體-藻紅蛋白(pe)的kras?g12v?24-mer肽進行ivs的cd8+外周血細胞的百分比(右圖)。左圖顯示了已被修飾以表達tcr的t細胞，該tcr在hla-a*11:01的背景下識別kras?g12d?10-mer，其與kras?g12v四聚體-apc或kras?g12v四聚體-pe結合。

10、圖3描述了顯示用實施例2的tcr轉導的來自第一供體和第二供體(分別為左圖和右圖)的同種異體t細胞表面上tcr表達的圖，如通過流式細胞術通過對鼠tcrβ鏈恒定區(qū)(mtcrβ)染色所測量的。方框中的數字表示mtcrβ表達陽性的細胞的百分比。

11、圖4的圖顯示了與表達不同krasg12突變的癌細胞系共培養(yǎng)過夜后，用實施例2的tcr轉導的來自兩個不同供體(供體1和供體2)的t細胞的ifn-γ產生(如通過elispot測定法測量的(ifn-γ斑點/2e4個細胞)以及4-1bb表達(％mtcrβ+cd137+)。每個靶癌細胞系未轉導或用hla-a*11:01轉導?！?gt;”表示大于500個斑點。

12、圖5a是顯示在將用實施例2的tcr轉導的t細胞與用指示濃度(ng/ml)的kras?g12v9-mer肽(實心圓)或kras?wt?9-mer肽(空心圓)脈沖的靶細胞共培養(yǎng)后分泌的ifn-γ的濃度(pg/ml)的圖。

13、圖5b是顯示在將用實施例2的tcr轉導的t細胞與用指示濃度(ng/ml)的kras?g12v10-mer肽(實心圓)或kras?wt?10-mer肽(空心圓)脈沖的靶細胞共培養(yǎng)后分泌的ifn-γ的濃度(pg/ml)的圖。

技術特征：

1.產生表達t細胞受體(tcr)的人細胞或人細胞群的方法，所述方法包括：

2.如權利要求1所述的方法，其中所述tcr還包含人可變區(qū)。

3.如權利要求1或2所述的方法，其中所述tcr包含：

4.如權利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述tcr包含：

5.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述tcr還包含：

6.如權利要求1-5任一項所述的方法，其中所述tcr還包含：

7.如權利要求1-6任一項所述的方法，其中所述tcr包含：

8.如權利要求1-7任一項所述的方法，其中所述tcr包含：

9.產生表達多肽的人細胞或人細胞群的方法，所述方法包括：

10.如權利要求9所述的方法，其中所述多肽還包含：

11.如權利要求9或10所述的方法，其中所述多肽包含：

12.如權利要求9-11任一項所述的方法，其中所述多肽包含：

13.如權利要求9-12任一項所述的方法，其中所述多肽包含：

14.如權利要求9-13任一項所述的方法，其中所述多肽包含：

15.如權利要求9-14任一項所述的方法，其中所述多肽包含：

16.產生表達蛋白的人細胞或人細胞群的方法，所述方法包括：

17.如權利要求16所述的方法，其中：

18.如權利要求16或17所述的方法，其中：

19.如權利要求16-18任一項所述的方法，其中：

20.如權利要求16-19任一項所述的方法，其中：

21.如權利要求16-20任一項所述的方法，其中：

22.如權利要求16-21任一項所述的方法，其中：

23.如權利要求1-22中任一項所述的方法，

24.如權利要求23所述的方法，其中所述突變的人ras氨基酸序列的氨基酸序列包含seq?id?no:29或30，或者由seq?id?no:29或30組成。

25.如權利要求1-24任一項所述的方法，其中所述hla?i類分子是hla-a分子。

26.如權利要求1-24任一項所述的方法，其中所述hla?i類分子是hla-a11分子。

27.如權利要求1-24任一項所述的方法，其中所述hla?i類分子是hla-a*11:01分子。

28.如權利要求1-24任一項所述的方法，其中所述突變的人ras氨基酸序列包括在第12位的甘氨酸被取代的野生型人kras、野生型人hras或野生型人nras氨基酸序列，其中第12位是通過分別參照野生型人kras、野生型人hras或野生型人nras蛋白來定義的。

29.如權利要求28所述的方法，其中所述取代是第12位的甘氨酸被纈氨酸取代。

技術總結
本申請公開了分離的或純化的T細胞受體(TCR)，其中所述TCR對人白細胞抗原(HLA)I類分子呈遞的突變的RAS氨基酸序列具有抗原特異性。還提供了相關的多肽和蛋白質，以及相關的核酸、重組表達載體、宿主細胞、細胞群和藥物組合物。還公開了檢測哺乳動物中癌癥的存在的方法以及治療或預防哺乳動物中的癌癥的方法。

技術研發(fā)人員：拉米·約瑟夫,盧勇成,蓋爾·卡弗里,史蒂文·A·羅森伯格
受保護的技術使用者：美國衛(wèi)生和人力服務部
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/12/23