本發(fā)明屬于抗體制備和蛋白檢測領域，具體涉及一種檢測igfbp2蛋白或igfbp2多肽的單克隆抗體對及其應用。

背景技術：

1、胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(insulin-like?growth?factorbindingprotein2，igfbp2)是胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白(insulin-like?growth?factorbindingprotein，igfbp)家族中的一員。igfbp是由n端結(jié)構(gòu)域、連接子和c端結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，其結(jié)構(gòu)的特殊性使得其可以與整合素、肝素和高親和力胰島素樣生長因子(insulin-like?growth?factor，igf)結(jié)合，在細胞增殖、分化以及人體生長發(fā)育中發(fā)揮重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)，igfbp2在多種惡性腫瘤如肺癌、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、結(jié)直腸癌、肝癌、高級別膠質(zhì)瘤以及膠質(zhì)母細胞瘤等腫瘤中高表達，并能促進腫瘤細胞增殖、遷移、侵襲以及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化。此外，igfbp2在神經(jīng)發(fā)育和神經(jīng)退行性疾病中也起著重要作用。生物學含義上，igfbp2可作為腫瘤標志物用于臨床診斷和治療。在正常人體內(nèi)，igfbp2含量較低，但在癌癥患者中常常高表達。據(jù)文獻報道，健康人血清中igfbp2的含量為385.70±28.47ng/ml，良性腫瘤患者中igfbp2的含量為464.15±67.8ng/ml，惡性腫瘤患者中igfbp2的含量為706.75±140.30ng/ml(房小龍.惡性腫瘤患者血清igfbp2水平的檢測及臨床意義[j].醫(yī)學動物防制,2004,(12):776-777)；另有文獻報道，高級別膠質(zhì)瘤患者血清中igfbp2的水平明顯高于低級別膠質(zhì)瘤及健康對照血清中的igfbp2水平(liny,jiangt,zhouk,et?al.plasma?igfbp-2levelspredict?clinical?outcomes?ofpatients?withhigh-grade?gliomas[j].neuro-oncology,2009,11(5):468-476)。

2、目前，國內(nèi)外多家生物公司如r&d、abcam、invitrogen等公司可購買到igfbp2蛋白檢測試劑盒，但價格比較昂貴，關于試劑盒中的捕獲抗體和檢測抗體序列，目前尚未有報道，因此，有必要自主開發(fā)一組igfbp2蛋白的檢測抗體對，組裝成性價比高的檢測試劑盒，用以檢測患者樣本中的igfbp2的變化水平，從而為臨床提供診斷依據(jù)。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種檢測igfbp2的單克隆抗體對及其應用，特異性檢測igfbp2蛋白或igfbp2多肽，尤其是檢測人血清、血漿、尿液中的igfbp2，為臨床腫瘤患者的診斷和治療提供依據(jù)。

2、本發(fā)明提供了一種檢測igfbp2蛋白或igfbp2多肽的單克隆抗體對，所述單克隆抗體對包括第一抗體和第二抗體；所述第一抗體包括14f8抗體或8f1抗體；所述第二抗體包括6f2抗體或9g1抗體；所述14f8抗體的輕鏈互補決定區(qū)cdr1包括如seq?id?no.2所示的氨基酸序列，輕鏈互補決定區(qū)cdr2包括如seq?id?no.3所示的氨基酸序列，輕鏈互補決定區(qū)cdr3包括如seq?id?no.4所示的氨基酸序列；所述14f8抗體的重鏈互補決定區(qū)cdr1包括如seqid?no.6所示的氨基酸序列，重鏈互補決定區(qū)cdr2包括如seq?id?no.7所示的氨基酸序列，重鏈互補決定區(qū)cdr3包括如seq?id?no.8所示的氨基酸序列；所述8f1抗體的輕鏈互補決定區(qū)cdr1包括如seq?id?no.2所示的氨基酸序列，輕鏈互補決定區(qū)cdr2包括如seq?id?no.3所示的氨基酸序列，輕鏈互補決定區(qū)cdr3包括如seq?id?no.4所示的氨基酸序列；所述8f1抗體的重鏈互補決定區(qū)cdr1包括如seq?id?no.10所示的氨基酸序列，重鏈互補決定區(qū)cdr2包括如seq?id?no.11所示的氨基酸序列，重鏈互補決定區(qū)cdr3包括如seq?id?no.12所示的氨基酸序列；所述6f2抗體的輕鏈互補決定區(qū)cdr1包括如seq?id?no.14所示的氨基酸序列，輕鏈互補決定區(qū)cdr2包括如seq?id?no.15所示的氨基酸序列，輕鏈互補決定區(qū)cdr3包括如seq?id?no.16所示的氨基酸序列；所述6f2抗體的重鏈互補決定區(qū)cdr1包括如seq?idno.18所示的氨基酸序列，重鏈互補決定區(qū)cdr2包括如seq?id?no.19所示的氨基酸序列，重鏈互補決定區(qū)cdr3包括如seq?id?no.20所示的氨基酸序列；所述9g1抗體的輕鏈互補決定區(qū)cdr1包括如seq?id?no.14所示的氨基酸序列，輕鏈互補決定區(qū)cdr2包括如seq?id?no.15所示的氨基酸序列，輕鏈互補決定區(qū)cdr3包括如seq?id?no.16所示的氨基酸序列；所述9g1抗體的重鏈互補決定區(qū)cdr1包括如seq?id?no.22所示的氨基酸序列，重鏈互補決定區(qū)cdr2包括如seq?id?no.23所示的氨基酸序列，重鏈互補決定區(qū)cdr3包括如seq?id?no.24所示的氨基酸序列。

3、優(yōu)選的，所述14f8抗體的輕鏈可變區(qū)包括如seq?id?no.1所示的氨基酸序列，或者與seq?id?no.1所示序列相比具有至少75％同一性，并且具有與igfbp2蛋白或igfbp2多肽結(jié)合能力的氨基酸序列；所述14f8抗體的重鏈可變區(qū)包括如seq?id?no.5所示的氨基酸序列，或者與seq?id?no.5所示序列相比具有至少75％同一性，并且具有與igfbp2蛋白或igfbp2多肽結(jié)合能力的氨基酸序列；所述8f1抗體的輕鏈可變區(qū)包括如seq?id?no.1所示的氨基酸序列，或者與seq?id?no.1所示序列相比具有至少75％同一性，并且具有與igfbp2蛋白或igfbp2多肽結(jié)合能力的氨基酸序列；所述8f1抗體的重鏈可變區(qū)包括如seq?id?no.9所示的氨基酸序列，或者與seq?id?no.9所示序列相比具有至少75％同一性，并且具有與igfbp2蛋白或igfbp2多肽結(jié)合能力的氨基酸序列；所述6f2抗體的輕鏈可變區(qū)包括如seqid?no.13所示的氨基酸序列，或者與seq?id?no.13所示序列相比具有至少75％同一性，并且具有與igfbp2蛋白或igfbp2多肽結(jié)合能力的氨基酸序列；所述6f2抗體的重鏈可變區(qū)包括如seq?id?no.17所示的氨基酸序列，或者與seq?id?no.17所示序列相比具有至少75％同一性，并且具有與igfbp2蛋白或igfbp2多肽結(jié)合能力的氨基酸序列；所述9g1抗體的輕鏈可變區(qū)包括如seq?id?no.13所示的氨基酸序列，或者與seq?id?no.13所示序列相比具有至少75％同一性，并且具有與igfbp2蛋白或igfbp2多肽結(jié)合能力的氨基酸序列；所述9g1抗體的重鏈可變區(qū)包括如seq?id?no.21所示的氨基酸序列，或者與seq?id?no.21所示序列相比具有至少75％同一性，并且具有與igfbp2蛋白或igfbp2多肽結(jié)合能力的氨基酸序列。

4、本發(fā)明還提供了一種核酸分子，所述核酸分子編碼上述技術方案所述的單克隆抗體對。

5、優(yōu)選的，所述核酸分子編碼14f8抗體輕鏈可變區(qū)的序列包括如seq?id?no.25所示的核苷酸序列；所述核酸分子編碼14f8抗體重鏈可變區(qū)的序列包括如seq?id?no.26所示的核苷酸序列；所述核酸分子編碼8f1輕鏈可變區(qū)的序列包括如seq?id?no.25所示的核苷酸序列；所述核酸分子編碼8f1抗體重鏈可變區(qū)的序列包括如seq?id?no.27所示的核苷酸序列；所述核酸分子編碼6f2抗體輕鏈可變區(qū)的序列包括如seq?id?no.28所示的核苷酸序列；所述核酸分子編碼6f2抗體重鏈可變區(qū)的序列包括如seq?id?no.29所示的核苷酸序列；所述核酸分子編碼9g1輕鏈可變區(qū)的序列包括如seq?id?no.28所示的核苷酸序列；所述核酸分子編碼9g1抗體重鏈可變區(qū)的序列包括如seq?id?no.30所示的核苷酸序列。

6、本發(fā)明還提供了一種生物材料，所述生物材料為表達上述技術方案所述的單克隆抗體對的生物材料；所述生物材料包括載體或細胞。

7、本發(fā)明還提供了上述技術方案所述單克隆抗體對或上述技術方案所述核酸分子編碼產(chǎn)生的單克隆抗體對或上述技術方案所述生物材料表達的單克隆抗體對在檢測igfbp2蛋白或igfbp2多肽中的應用。

8、本發(fā)明還提供了上述技術方案所述單克隆抗體對或上述技術方案所述核酸分子編碼產(chǎn)生的單克隆抗體對或上述技術方案所述生物材料表達的單克隆抗體對在下述一項或者多項中的應用：

9、(1)制備檢測igfbp2蛋白或igfbp2多肽的產(chǎn)品；(2)制備診斷腫瘤的產(chǎn)品；(3)制備輔助治療腫瘤的產(chǎn)品；(4)制備區(qū)分良性腫瘤和惡性腫瘤的產(chǎn)品。

10、本發(fā)明還提供了一種檢測igfbp2蛋白或igfbp2多肽的試劑盒，所述試劑盒包括捕獲抗體和示蹤物標記的檢測抗體；所述檢測抗體為上述技術方案所述單克隆抗體對中的第一抗體；所述捕獲抗體為上述技術方案所述單克隆抗體對中的第二抗體。

11、優(yōu)選的，所述示蹤物包括放射性同位素、酶、熒光物質(zhì)、發(fā)光物質(zhì)、膠體金和有色膠乳中的一種或多種。

12、本發(fā)明還提供了一種檢測igfbp2蛋白或igfbp2多肽的方法，將待檢測樣品、示蹤物標記的檢測抗體和捕獲抗體混合，形成復合物；檢測所述復合物中的示蹤物信號，確定所述待檢測樣品中igfbp2蛋白或igfbp2多肽濃度；所述檢測抗體為上述技術方案所述單克隆抗體對中的第一抗體；所述捕獲抗體為上述技術方案所述單克隆抗體對中的第二抗體。

13、有益效果：本發(fā)明提供的單克隆抗體對包括第一抗體和第二抗體；所述第一抗體包括14f8抗體或8f1抗體；所述第二抗體包括6f2抗體或9g1抗體。本發(fā)明明確單克隆抗體的輕鏈、重鏈可變區(qū)的互補決定區(qū)cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列，能夠特異性檢測igfbp2蛋白或igfbp2多肽，特異性強，靈敏度高，可以檢測人血清中的igfbp2，為臨床腫瘤患者的診斷和治療提供依據(jù)。