：本發(fā)明屬于生物活性物質提取，更具體地涉及一種低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法及其應用。

背景技術

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背景技術：

1、何首烏為蓼科植物何首烏(polygonum?multiflorum?thunb)的干燥塊根，具有解毒、消癰、截瘧、潤腸通便等功效。現(xiàn)代藥理研究表明何首烏具有抗腫瘤、降血脂、抗動脈粥樣硬化、抗衰老、提高免疫力、抗炎等活性，因此，近年來何首烏在藥品、保健品、化妝品等領域應用廣泛?；瘜W成分研究表明何首烏塊根中主要含有二苯乙烯苷類、多糖類、蒽醌類、黃酮類、磷脂類等活性成分。何首烏提取物主要活性成分是何首烏苷，二苯乙烯苷是何首烏苷中特有的水溶性生物活性成分，也是一種有效的化妝品護膚成分。因此，何首烏提取物被作為化妝品添加劑通過外用而得到廣泛應用。在生發(fā)和防止脫發(fā)中的效果與作用機制的研究表明何首烏提取物有效成分何首烏苷能夠調控與生發(fā)或防止脫發(fā)相關的5α-還原酶、堿性磷酸酶(alpl)、雄激素受體、dkk-1等基因表達，在促進生發(fā)與防止脫發(fā)方面效果顯著。

2、目前，何首烏苷的提取方法多采用水作為反應溶劑提取，并結合相應的超聲波處理技術和微波處理技術，提取技術研究相對成熟，二苯乙烯苷是何首烏苷中特有的水溶性生物活性成分，水作為優(yōu)選溶劑，可以用于二苯乙烯苷的提取，但是何首烏為木本植物，何首烏苷有一部分作為游離態(tài)處于細胞之間，這部分可以很方便的利用水提提取出來，還有一部分作為結合態(tài)或游離態(tài)處于何首烏的細胞內(nèi)或者細胞膜蛋白上，這部分何首烏苷不能直接通過水提的方式提取出來，

3、最近也有些研究表明：可以通過超聲波細胞破碎機對何首烏粉末進行處理，該法可以破壞細胞壁，再通過破碎細胞的方式，將細胞內(nèi)容物釋放，再利用水提的方式將何首烏苷提取出來，然而隨著細胞的破碎，其他水溶性活性物質也會進入水溶液，給后續(xù)精帶來無法解決的難題，導致產(chǎn)品純度極差。

4、如何獲得一種純度高、收率高、操作流程簡單的何首烏苷的提取方法至關重要。

技術實現(xiàn)思路

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技術實現(xiàn)要素：

1、為解決上述問題，克服現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供了一種低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法及其應用，能夠有效的解決首烏苷不能直接通過水提的方式提取和提取率低的問題。

2、本發(fā)明解決上述技術問題的具體技術方案為：低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法，其特征在于包括如下步驟：

3、(1)將何首烏粉末利用超聲波連續(xù)流細胞破碎機處理得到何首烏破壁粉末，將何首烏破壁粉末按照料液比為1：(7-9)置于水中，加入磷脂酶和螯合樹脂并混合攪拌，同時控制容器溫度為40-50℃，反應1-2h,得到處理液；撈出螯合樹脂，離心取上層清液得到處理液；

4、(2)將螯合樹脂加入到處理液中，加入糖苷內(nèi)切酶h、處理液的ph為7.5-8.3，控制容器溫度為40-50℃，反應0.5h，再加1％edta反應0.5-2h，撈出螯合樹脂，抽濾取上層清液得到反應液；

5、(3)在反應液中加入乙醚溶劑中，常溫萃取48小時后，得到上清液；

6、(4)將上清液經(jīng)濃縮并干燥后，得到何首烏苷粗品。

7、進一步地，按照處理液的質量百分比加入1-5％磷脂酶、10-15％螯合樹脂、1％-5％糖苷內(nèi)切酶h、1-2％反應助劑，處理液的ph為7.5-8.3。

8、進一步地，反應助劑為金屬螯合劑，金屬螯合劑為edta。

9、進一步地，所述何首烏粉末與所述乙醚的質量體積比為(45～55)g：(0.5～1.5)l。

10、進一步地，何首烏苷粗品通過精制工藝得到精制何首烏苷。

11、進一步地，所述精制工藝：

12、(1)將何首烏苷粗品，加入蒸餾水，搖勻后進行超聲預處理，冷卻，調節(jié)溶液ph5-8；加入纖維素酶，添加量為0.5-2.5％，在溫度45-65℃下酶解4-8h，取出，高溫進行滅酶，冷卻；

13、(2)將上述酶解液放入大孔樹脂，以水為洗脫液洗脫，洗脫得到洗脫液，洗脫液干燥，得到精制何首烏苷。

14、一種低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法制備的何首烏苷。

15、一種何首烏苷在制備促進生發(fā)與防止脫發(fā)的化妝品中的應用。

16、本發(fā)明的有益效果是：

17、本發(fā)明創(chuàng)造性的將可以通過超聲波細胞破碎機對何首烏粉末進行處理，將細胞內(nèi)容物釋放，極大地提高了體系中的何首烏苷的含量，借助螯合樹脂將糖蛋白捕獲，并通過水提和將不溶于水的內(nèi)容物去掉，避免雜質引入，再借助乙醚萃取將水解后的何首烏苷轉移至乙醚相與水溶性物質分離。

18、本發(fā)明創(chuàng)造性地在何首烏粉末的細胞內(nèi)容物中加入糖苷內(nèi)切酶h，糖苷內(nèi)切酶h能夠將螯合樹脂捕獲的糖蛋白中結合態(tài)的何首烏苷釋放，極大地提高體系中的首烏苷的含量，從而配合乙醚的加入使水溶性的蛋白的變性進入水相，將產(chǎn)物與雜質有效分離，極大地提高了首烏苷的收率和純度。

19、本發(fā)明創(chuàng)造性地分步加入edta，保證了螯合樹脂優(yōu)先捕獲的糖蛋白，進一步地作為金屬螯合劑避免金屬離子能夠對何首烏苷起到了降解的作用，還能夠對糖苷內(nèi)切酶h起到一定的緩沖作用，避免過度水解的產(chǎn)生。

技術特征：

1.一種低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法，其特征在于包括如下步驟：

2.根據(jù)權利要求1所述的低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法，其特征在于按照處理液的質量百分比加入1-5％磷脂酶、10-15％螯合樹脂、1％-5％糖苷內(nèi)切酶h、1-2％反應助劑。

3.根據(jù)權利要求1所述的低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法，其特征在于反應助劑為金屬螯合劑，金屬螯合劑為edta。

4.根據(jù)權利要求1所述的低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法，其特征在于何首烏粉末與乙醚的質量體積比為(45～55)g：(0.5～1.5)l。

5.根據(jù)權利要求1所述的低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法，其特征在于何首烏苷粗品通過精制工藝得到精制何首烏苷。

6.根據(jù)權利要求5所述的低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法，其特征在于所述精制工藝：

7.一種權利要求1～6任一項所述低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法制備的何首烏苷。

8.一種如權利要求7所述何首烏苷在制備促進生發(fā)與防止脫發(fā)的化妝品中的應用。

技術總結
本發(fā)明公開了一種低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法及其應用，屬于生物活性物質提取技術領域，其特征在于包括如下步驟：將何首烏粉末利用超聲波連續(xù)流細胞破碎機處理得到何首烏破壁粉末，加入螯合樹脂、糖苷內(nèi)切酶H、EDTA，離心取上層清液得到反應液；加入乙醚溶劑萃取，經(jīng)濃縮至揮散乙醚液、干燥后，得到何首烏苷粗品；本發(fā)明的有益效果是：通過超聲波細胞破碎機對何首烏粉末進行處理，極大地提高了體系中的何首烏苷的含量，并通過水提將不溶于水的內(nèi)容物去掉，并借助乙醚萃取將何首烏苷轉移至乙醚相與水溶性物質分離，并借助螯合樹脂能夠吸附一定的何首烏苷類生物，避免雜質引入。

技術研發(fā)人員：顧世海,揭從能
受保護的技術使用者：山東蔚揚藥業(yè)有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/1/6