本發(fā)明屬于抗體，具體涉及一株分泌抗豬丹毒絲菌spaa蛋白的細(xì)胞株及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、豬丹毒是由豬丹毒絲菌(erysipelothrix?rhusiopathiae，er)引起的嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的一種人畜共患病。在臨床上，可分為特急性、急性敗血性、亞急性和慢性等四型，診斷特征主要為高熱、急性敗血癥、皮膚疹斑、心內(nèi)膜炎以及關(guān)節(jié)炎等癥狀，其中急性敗血癥病死率高達(dá)80％左右，對(duì)生豬養(yǎng)殖業(yè)危害較大。隨著農(nóng)業(yè)農(nóng)村部獸用抗菌藥使用減量化行動(dòng)的深入實(shí)施，豬丹毒等多種細(xì)菌混合或繼發(fā)病毒感染成為養(yǎng)殖場疾病控制的重要內(nèi)容。因此，開展豬丹毒檢測方法的研究對(duì)養(yǎng)豬業(yè)疫病防控工作具有重要技術(shù)意義。

2、目前，在診斷工作中主要使用pcr方法對(duì)豬丹毒進(jìn)行鑒別診斷。makino基于丹毒桿菌16s?rna序列建立了pcr方法用于鑒別豬丹毒絲菌屬和扁桃體絲菌屬，奠定了丹毒桿菌分子生物學(xué)檢測方法的基礎(chǔ)。takeshi采用4組寡核苷酸引物，擴(kuò)增4種丹毒桿菌16s?rrna序列，建立了快速篩選屠宰場丹毒桿菌的pcr方法，相比傳統(tǒng)的采樣檢測和分離培養(yǎng)，特異性和耗時(shí)都有所改進(jìn)。pal等創(chuàng)建了多重rt-pcr方法用于鑒別扁桃體和豬丹毒絲菌屬的2株菌，隨后多重rt-pcr用于鑒別多種疾病的混合感染。pcr方法具有靈敏度高、快速高效的特點(diǎn)，但是存在以下不足：一是無法實(shí)現(xiàn)抗原在組織中的定位；二是對(duì)于診斷混合其他烈性傳染病感染的樣品需要在高等級(jí)生物安全設(shè)施內(nèi)開展。而免疫組化檢測方法不僅能夠?qū)崿F(xiàn)組織定位，而且檢測樣品均經(jīng)甲醛滅活，在常規(guī)檢測實(shí)驗(yàn)室內(nèi)開展即可，最大程度降低了生物安全風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)，目前缺少有效的檢測豬丹毒絲菌抗體，給特異性檢測感染豬丹毒絲菌動(dòng)物帶來阻礙。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種能夠分泌抗豬丹毒絲菌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，所述抗豬丹毒絲菌單克隆抗體能夠特異性結(jié)合豬丹毒絲菌抗原，為豬丹毒的防控提供了保障。

2、本發(fā)明提供了一種鼠源雜交瘤細(xì)胞spaa-21d，保藏編號(hào)為cgmccno.45348。

3、本發(fā)明提供了一種抗豬丹毒絲菌單克隆抗體，由所述鼠源雜交瘤細(xì)胞spaa-21d分泌得到。

4、本發(fā)明提供了一種基于免疫學(xué)檢測技術(shù)的豬丹毒絲菌檢測試劑盒，包括所述抗豬丹毒絲菌單克隆抗體和其他檢測試劑。

5、優(yōu)選的，所述免疫學(xué)檢測技術(shù)包括以下至少一種技術(shù)：免疫組化、酶聯(lián)免疫檢測、免疫印跡和免疫層析技術(shù)。

6、優(yōu)選的，為豬丹毒絲菌免疫組化檢測試劑盒；

7、所述豬丹毒絲菌免疫組化檢測試劑盒中其他檢測試劑包括抗體稀釋液、二抗、洗滌液和顯色套件。

8、優(yōu)選的，所述抗豬丹毒絲菌單克隆抗體的工作稀釋度為1：100。

9、優(yōu)選的，所述二抗的工作稀釋度為1:400。

10、優(yōu)選的，所述洗滌液為pbs溶液；所述抗體稀釋液為pbs溶液。

11、優(yōu)選的，所述二抗為山羊抗鼠igg。

12、優(yōu)選的，還包括間接elisa檢測試劑盒；所述間接elisa檢測試劑盒中其他檢測試劑包括以下至少一種組分：包被有改造的豬丹毒絲菌抗原的檢測板、樣本稀釋液、洗滌液、酶標(biāo)二抗、顯色液、終止液；

13、所述改造的豬丹毒絲菌抗原的氨基酸序列如seq?id?no:2。

14、本發(fā)明提供了一種鼠源雜交瘤細(xì)胞spaa-21d，保藏編號(hào)為cgmccno.45348。本發(fā)明首次以大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)獲得以可溶性形式表達(dá)的豬丹毒絲菌(保藏編號(hào)cvcc43008)截短的spaa蛋白(spaa-n)作為免疫抗原，免疫小鼠后，進(jìn)行分泌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的篩選。篩選得到的鼠源雜交瘤細(xì)胞不僅能產(chǎn)生具有與免疫抗原或豬丹毒絲菌強(qiáng)特異性結(jié)合能力的單克隆抗體，而且其分泌單克隆抗體的性能具有較高的遺傳穩(wěn)定性。同時(shí)本發(fā)明驗(yàn)證利用所述鼠源雜交瘤細(xì)胞spaa-21d經(jīng)腹水制備和純化后能夠?qū)崿F(xiàn)豬丹毒絲菌的免疫組化檢測和間接elisa檢測，且具有良好的檢測特異性。可見，本發(fā)明提供的鼠源雜交瘤細(xì)胞為豬丹毒絲菌的檢測提供檢測基礎(chǔ)。

15、本發(fā)明提供了一種基于免疫學(xué)檢測技術(shù)的豬丹毒絲菌檢測試劑盒，包括所述抗豬丹毒絲菌單克隆抗體和其他檢測試劑?；诳关i丹毒絲菌單克隆抗體能夠與免疫抗原(spaa-n)或豬丹毒絲菌具有良好的親和力，本發(fā)明基于免疫學(xué)檢測技術(shù)制備豬丹毒絲菌檢測試劑盒，能夠?qū)崿F(xiàn)豬丹毒絲菌的快速、高效的檢測目的，從而實(shí)現(xiàn)豬丹毒疾病的快速診斷。

16、進(jìn)一步的，本發(fā)明具體限定了試劑盒的種類包括豬丹毒絲菌免疫組化檢測試劑盒。本發(fā)明首次利用抗豬丹毒絲菌spaa蛋白單克隆抗體建立豬丹毒絲菌免疫組化檢測方法，該方法還具有樣品操作簡便、成本低廉、反應(yīng)靈敏、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，從而為豬丹毒鑒別診斷和致病機(jī)制研究提供依據(jù)與技術(shù)支持。

技術(shù)特征：

1.一種鼠源雜交瘤細(xì)胞spaa-21d，其特征在于，保藏編號(hào)為cgmcc?no.45348。

2.一種抗豬丹毒絲菌單克隆抗體，其特征在于，由權(quán)利要求1所述鼠源雜交瘤細(xì)胞spaa-21d分泌得到。

3.一種基于免疫學(xué)檢測技術(shù)的豬丹毒絲菌檢測試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求2所述抗豬丹毒絲菌單克隆抗體和其他檢測試劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述基于免疫技術(shù)的豬丹毒絲菌檢測試劑盒，其特征在于，所述免疫學(xué)檢測技術(shù)包括以下至少一種技術(shù)：免疫組化、酶聯(lián)免疫檢測、免疫印跡和免疫層析技術(shù)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述基于免疫技術(shù)的豬丹毒絲菌檢測試劑盒，其特征在于，為豬丹毒絲菌免疫組化檢測試劑盒；

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述基于免疫技術(shù)的豬丹毒絲菌檢測試劑盒，其特征在于，所述抗豬丹毒絲菌單克隆抗體的工作稀釋度為1：100。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述基于免疫技術(shù)的豬丹毒絲菌檢測試劑盒，其特征在于，所述二抗的工作稀釋度為1:400。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述基于免疫技術(shù)的豬丹毒絲菌檢測試劑盒，其特征在于，所述洗滌液為pbs溶液；

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述基于免疫技術(shù)的豬丹毒絲菌檢測試劑盒，其特征在于，所述二抗為山羊抗鼠igg。

10.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述基于免疫技術(shù)的豬丹毒絲菌檢測試劑盒，其特征在于，還包括間接elisa檢測試劑盒；

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一株分泌抗豬丹毒絲菌SpaA蛋白的細(xì)胞株及其應(yīng)用，屬于抗體技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明首次以豬丹毒絲菌截短SpaA蛋白(SpaA?N)作為免疫抗原進(jìn)行分泌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的篩選，得到雜交瘤細(xì)胞，保藏編號(hào)為CGMCC?No.45348。該雜交瘤細(xì)胞不僅能產(chǎn)生具有與免疫抗原或豬丹毒絲菌強(qiáng)特異性結(jié)合能力的單克隆抗體，而且其分泌單克隆抗體的性能具有較高的遺傳穩(wěn)定性。同時(shí)所述雜交瘤細(xì)胞株SpaA?21D分泌的單克隆抗體能夠?qū)崿F(xiàn)豬丹毒絲菌的免疫組化檢測和間接ELISA檢測，且具有良好的檢測特異性?？梢?，本發(fā)明提供的雜交瘤細(xì)胞株及其分泌的單克隆抗體為豬丹毒絲菌的檢測提供新手段。

技術(shù)研發(fā)人員：王團(tuán)結(jié),敖小棠,杜吉革,張廣川,李婉清,吳思捷,李倩琳,孟伯龍,郭桐同,李正武,印春生,羅玉峰
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2