本發(fā)明涉及基于激動性(agonistic)抗cd40抗體cp870,893的新的干擾素相關(guān)抗原結(jié)合蛋白以及編碼這些干擾素相關(guān)抗原結(jié)合蛋白的核酸、載體和載體體系。本發(fā)明還涉及包含這些干擾素相關(guān)抗原結(jié)合蛋白、核酸、載體和載體體系的組合物。新的干擾素相關(guān)抗原結(jié)合蛋白提供了優(yōu)于本領(lǐng)域當(dāng)前狀態(tài)的有益改善，例如，其中它們有效破壞病毒復(fù)制并借此減少hbv病毒載量。因此，本發(fā)明還提供了這些干擾素相關(guān)抗原結(jié)合蛋白、核酸、載體、載體體系和組合物，例如，在治療受試者中乙型肝炎病毒(hbv)感染和/或減少一種或多種hbv感染癥狀中的醫(yī)學(xué)用途。本發(fā)明還提供了包含這些核酸、載體和載體體系的宿主細(xì)胞以及使用所述宿主細(xì)胞制備根據(jù)本發(fā)明的干擾素相關(guān)抗原結(jié)合蛋白的方法。

背景技術(shù)：

1、hbv感染全世界超過3億人并且是造成肝臟疾病和肝癌的常見原因(liang(2009)hepatology?49:s13)。hbv是具有類似于反轉(zhuǎn)錄病毒的不常見特征的小dna病毒，其通過rna中間體(前基因組rna，pgrna)復(fù)制并且可以整合到宿主基因組中。hbv復(fù)制循環(huán)的獨(dú)特特征賦予病毒在感染細(xì)胞中持續(xù)的獨(dú)特能力。hbv感染導(dǎo)致了從急性肝炎(包括暴發(fā)性肝衰竭)到慢性肝炎、肝硬化和肝細(xì)胞癌的一系列廣譜肝臟疾病。急性hbv感染可以是無癥狀的或者呈現(xiàn)有癥狀的急性肝炎。90-95％的感染hbv的兒童和5-10％的感染hbv的成年人不能清除病毒并且成為慢性感染。多位慢性感染者具有輕微肝臟疾病，其幾乎沒有長期發(fā)病或死亡。患有慢性hbv感染的其他個體出現(xiàn)活動性疾病，其可以發(fā)展成肝硬化和肝癌。這些患者需要小心監(jiān)測和批準(zhǔn)的治療干預(yù)。

2、需要通過調(diào)節(jié)細(xì)胞中hbv感染用于治療hbv感染的新方法。具體地，需要有效破壞病毒復(fù)制，減少hbv感染細(xì)胞的hbv病毒載量，減少hbv感染細(xì)胞中共價(jià)閉環(huán)hbv?dna的轉(zhuǎn)錄和/或減少hbv感染細(xì)胞中前基因組hbv?rna的量的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明涉及包含(i)激動性抗-cd40抗體或其激動性抗原結(jié)合片段和(ii)干擾素(ifn)或其功能性片段的干擾素相關(guān)抗原結(jié)合蛋白，其中激動性抗-cd40抗體或其激動性抗原結(jié)合片段包含

2、(a)與seq?id?no?3內(nèi)的cdrl1、cdrl2和cdrl3序列具有至少90％的同一性的3個輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)；和與seq?id?no?6內(nèi)的cdrh1、cdrh2和cdrh3序列具有至少90％的同一性的3個重鏈cdr；其中根據(jù)cdr的kabat定義、chothia定義、abm定義或接觸定義(contactdefinition)來定義每個cdr；優(yōu)選地其中根據(jù)cdr的kabat定義或者cdr的chothia定義來定義每個cdr；

3、(b)與seq?id?no?3內(nèi)的cdrl1、cdrl2和cdrl3序列相同的3個輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)；和與seq?id?no?6內(nèi)的cdrh1、cdrh2和cdrh3序列相同的3個重鏈cdr；其中根據(jù)cdr的kabat定義、chothia定義、abm定義或接觸定義來定義每個cdr；優(yōu)選地其中根據(jù)cdr的kabat定義或者cdr的chothia定義來定義每個cdr；

4、(c)重鏈或其片段，其包含與seq?id?no?56具有至少90％的同一性的互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)cdrh1、與seq?id?no?57具有至少90％的同一性cdrh2和與seq?id?no?58具有至少90％的同一性的cdrh3；和輕鏈或其片段，其包含與seq?id?no?52具有至少90％的同一性的cdrl1、與seq?id?no?53具有至少90％的同一性的cdrl2和與seq?id?no?54具有至少90％的同一性的cdrl3；

5、(d)重鏈或其片段，其包含與seq?id?no?56相同的互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)cdrh1、與seqid?no?57相同的cdrh2和與seq?id?no?58相同的cdrh3；和輕鏈或其片段，其包含與seq?idno?52相同的cdrl1、與seq?id?no?53相同的cdrl2和與seq?id?no?54相同的cdrl3；

6、(e)包含seq?id?no?51中所示序列或與之具有至少90％的同一性的序列的輕鏈可變區(qū)vl；和/或包含seq?id?no?55中所示序列或與之具有至少90％的同一性的序列的重鏈可變區(qū)vh；

7、(f)包含seq?id?no?12中所示氨基酸序列或與之具有至少90％的同一性的序列的fab區(qū)重鏈；或者

8、(g)包含seq?id?no?3中所示序列或與之具有至少90％的同一性的序列的輕鏈(lc)；和/或包含選自由seq?id?no?6、seq?id?no?9、seq?id?no?49和seq?id?no?48組成的組的序列或與之具有至少90％的同一性的序列的重鏈(hc)。

9、根據(jù)本發(fā)明的這個方面，ifn或其功能性片段選自由i型ifn、ii型ifn和iii型ifn或其功能性片段組成的組。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，i型ifn或其功能性片段是ifnα或ifnβ或其功能性片段。

10、根據(jù)一個實(shí)施方式，ifn或其功能性片段是ifnα2a或其功能性片段。優(yōu)選地，ifnα2a包含seq?id?no?17中所示序列或與之具有至少90％的同一性的序列。

11、根據(jù)另一個實(shí)施方式，ifn或其功能性片段是ifnβ或其功能性片段。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，ifnβ包含seq?id?no?14中所示序列或與之具有至少90％的同一性的序列。

12、根據(jù)其它實(shí)施方式，ifn或其功能性片段融合至激動性抗-cd40抗體或其激動性抗原結(jié)合片段的輕鏈。優(yōu)選地，ifn或其功能性片段融合至激動性抗-cd40抗體或其激動性抗原結(jié)合片段的輕鏈的c-末端。

13、根據(jù)另一個實(shí)施方式，ifn或其功能性片段融合至激動性抗-cd40抗體或其激動性抗原結(jié)合片段的重鏈。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，ifn或其功能性片段融合至激動性抗-cd40抗體或其激動性抗原結(jié)合片段的重鏈的c-末端。

14、根據(jù)另一個實(shí)施方式，將激動性抗-cd40抗體或其激動性抗原結(jié)合片段和ifn或其功能性片段通過接頭彼此融合。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，接頭包含seq?id?no?20、seq?id?no21、seq?id?no?24、seq?id?no?25或者seq?id?no?26中所示序列。

15、根據(jù)另一個實(shí)施方式，干擾素相關(guān)抗原結(jié)合蛋白包含選自由下列組成的組的序列：seq?id?no?28、seq?id?no?29、seq?id?no?30、seq?id?no?31、seq?id?no?32、seq?id?no33、seq?id?no?34、seq?id?no?35、seq?id?no?36、seq?id?no?37、seq?id?no?38、seq?id?no39、seq?id?no?40、seq?id?no?41、seq?id?no?42、seq?id?no?43、seq?id?no?44、seq?id?no45、seq?id?no?46和seq?id?no?47。

16、根據(jù)其它實(shí)施方式，干擾素相關(guān)抗原結(jié)合蛋白是包含表8中所公開的序列組合之一的干擾素融合的激動性抗-cd40抗體或干擾素融合的其激動性抗原結(jié)合片段。

17、根據(jù)另一個方面，本發(fā)明涉及編碼根據(jù)本發(fā)明的干擾素相關(guān)抗原結(jié)合蛋白的核酸。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，核酸還編碼分泌性信號肽。

18、根據(jù)其它方面，本發(fā)明涉及包含所述核酸的載體。

19、根據(jù)另一個方面，本發(fā)明涉及載體體系，其包含

20、(i)第一載體，其包含編碼融合至本發(fā)明的干擾素相關(guān)抗原結(jié)合蛋白的激動性抗-cd40抗體或其激動性抗原結(jié)合片段的輕鏈的ifn或其功能性片段的核酸；和第二載體，其包含編碼本發(fā)明的干擾素相關(guān)抗原結(jié)合蛋白的激動性抗-cd40抗體或其激動性抗原結(jié)合片段的重鏈的核酸；或者

21、(ii)第一載體，其包含編碼融合至本發(fā)明的干擾素相關(guān)抗原結(jié)合蛋白的激動性抗-cd40抗體或其激動性抗原結(jié)合片段的重鏈的ifn或其功能性片段的核酸；和第二載體，其包含編碼本發(fā)明的干擾素相關(guān)抗原結(jié)合蛋白的激動性抗-cd40抗體或其激動性抗原結(jié)合片段的輕鏈的核酸。

22、根據(jù)另一個方面，本發(fā)明涉及組合物，優(yōu)選地藥物組合物，其包含根據(jù)本發(fā)明的干擾素相關(guān)抗原結(jié)合蛋白、核酸、載體或載體體系。

23、根據(jù)其它方面，本發(fā)明涉及包含根據(jù)本發(fā)明的核酸、載體或載體體系的宿主細(xì)胞。根據(jù)另一個方面，本發(fā)明涉及制備根據(jù)本發(fā)明的干擾素相關(guān)抗原結(jié)合蛋白的方法，其包括培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞和回收(recover)所述干擾素相關(guān)抗原結(jié)合蛋白。

24、根據(jù)另一個方面，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明用作藥物的干擾素相關(guān)抗原結(jié)合蛋白、核酸、載體、載體體系或組合物。

25、根據(jù)另一個方面，本發(fā)明涉及用于治療受試者中乙型肝炎病毒(hbv)感染和/或減少一種或多種hbv感染癥狀的根據(jù)本發(fā)明的干擾素相關(guān)抗原結(jié)合蛋白、核酸、載體、載體體系或組合物。

26、此外：

27、表9a-表9b：這些表總結(jié)了在得自健康志愿者的全血細(xì)胞(wbc)體外刺激之后獲得的數(shù)據(jù)。對來自4位不同供體的wbc測試每個ifa。wbc保持未處理(nt)，用lps(10ng/ml)或用ifa(1μg/ml)處理24h。收集上清液并使用msd?u-plex試劑盒對人細(xì)胞因子進(jìn)行細(xì)胞因子釋放定量。結(jié)果代表來自每位供體的兩個獨(dú)立刺激的平均值并且以pg/ml表示(nd：未檢出)。

28、表10a：pk報(bào)告總結(jié)：向雄性cd1瑞士(swiss)小鼠單次靜脈內(nèi)施用0.5mg/kg后的cp870,893、ifa27、ifa29和ifa30的pk參數(shù)。在7-天實(shí)驗(yàn)中研究了cp870,893的pk參數(shù)并且在10-天實(shí)驗(yàn)中研究了ifa27、ifa29和ifa30的那些pk參數(shù)(使用2種不同的elisa方法進(jìn)行ifa27定量)。

29、表10b：向雄性cd1瑞士小鼠單次靜脈內(nèi)推注施用0.5mg/kg后的cp870,893、pegasys和3種不同的ifa(ifa25、ifa26和ifa28)的pk參數(shù)。在21-天實(shí)驗(yàn)中研究了cp870,893和ifa25、ifa26、ifa28和pegasys的pk參數(shù)(使用2種不同的elisa方法進(jìn)行ifa25定量)。