本發(fā)明屬于功能多肽制備，具體涉及一種能與微量元素離子螯合的靈芝蛋白肽的制備方法。

背景技術(shù)：

1、礦物質(zhì)元素是維持生物體機(jī)能包括生長(zhǎng)、發(fā)育、繁衍等不可或缺的一類(lèi)物質(zhì)，對(duì)生物體的生理機(jī)能的調(diào)節(jié)和營(yíng)養(yǎng)的補(bǔ)充有明顯的效果。雖然人體對(duì)礦物質(zhì)元素的需求量極少，但是對(duì)生物體的生理健康和有關(guān)生理疾病的預(yù)防都與之密不可分。缺硒、缺鈣、缺鐵等現(xiàn)象已成為當(dāng)今世界的普遍現(xiàn)象，因此礦物質(zhì)元素補(bǔ)充劑的開(kāi)發(fā)成為又一重大的課題。多肽與礦物質(zhì)元素的螯合物是礦物質(zhì)元素離子與多肽中的n-端氨基、氨基酸側(cè)鏈、c-端羧基以及肽鏈中的羰基和亞氨基之間的相互配位構(gòu)成的。其與單純的氨基酸和礦物質(zhì)元素相互作用所構(gòu)成的螯合物相比較能發(fā)現(xiàn)多肽與礦物質(zhì)元素的螯合物具有更好的穩(wěn)定性和配合率，同時(shí)還具備生物效益高、極佳的吸收效果、極好的營(yíng)養(yǎng)性等優(yōu)點(diǎn)，還有能夠結(jié)合多肽和礦物質(zhì)元素的互補(bǔ)功能活性如抗氧化、消炎、抗菌、增強(qiáng)免疫、降壓、降脂和降糖等。因此多肽與礦物質(zhì)元素的螯合物將會(huì)有極佳的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值及廣闊的研究發(fā)展前景，必將成為各界專(zhuān)家學(xué)者的科究熱點(diǎn)。由于我國(guó)的飲食結(jié)構(gòu)中植物性食品所占的比例較高，對(duì)乳制品的攝入相對(duì)較少，經(jīng)常產(chǎn)生缺鈣現(xiàn)象，尤其是一些兒童、老人中這種現(xiàn)象更明顯。螯合形式的鈣是鈣元素嵌合在氨基酸或多肽中間，不受食物中植物酸、草酸和腸道中堿性環(huán)境的影響，避免了鈣離子形成沉淀，提高了鈣離子的溶解度和穩(wěn)定性，從而可以直接通過(guò)腸道粘膜吸收，提高其吸收利用率。螯合鈣生物利用率高、吸收快，對(duì)其它營(yíng)養(yǎng)成分的吸收無(wú)影響，并且可以提升食品本身營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。國(guó)內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)從不同來(lái)源的活性蛋白酶解液中分離得到了具有金屬離子螯合活性的多肽。

2、多肽是分子結(jié)構(gòu)介于氨基酸和蛋白質(zhì)之間的一類(lèi)化合物，使蛋白質(zhì)具有一定的生理功能。在人類(lèi)的生命活動(dòng)中，肽在體內(nèi)的消化吸收優(yōu)于游離的氨基酸，且有著區(qū)別于氨基酸的體內(nèi)輸送體系。某些短肽在提供人體生長(zhǎng)、發(fā)育所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的同時(shí)，還能夠防病治病，調(diào)節(jié)人體機(jī)能，這些具有生物活性的多肽被稱(chēng)為生物活性肽。研究發(fā)現(xiàn)，很多不同來(lái)源的多肽都具有抗氧化能力，如水解酪蛋白、大豆蛋白、牛血清白蛋白、卵白蛋白、油料種子蛋白、小麥醇溶蛋白和玉米蛋白等得到的多肽都具有一定的抗氧化性。

3、靈芝因其具有滋補(bǔ)強(qiáng)壯、延年益壽、補(bǔ)氣安神等作用，在民間享有“仙草”的美譽(yù)。靈芝類(lèi)所含活性成分復(fù)雜，目前的研究多集中在其多糖生物活性上，對(duì)靈芝蛋白質(zhì)的研究較少。利用生物技術(shù)對(duì)靈芝進(jìn)行蛋白質(zhì)資源的深加工，進(jìn)行生物活性肽的篩選和提取分離，然后利用無(wú)機(jī)鈣、無(wú)機(jī)硒進(jìn)行螯合，制備多肽-硒、多肽-鈣螯合物。這種靈芝生物活性多肽-微量元素螯合物能顯著提高微量元素的吸收率和利用率，而且還具有抗氧化、抗菌、免疫調(diào)節(jié)、降血脂和降血糖等活性，有很高的開(kāi)發(fā)價(jià)值和應(yīng)用前景，為食藥用菌資源的利用開(kāi)辟了新的途徑。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種靈芝蛋白肽微量元素螯合物的制備方法。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是：一種靈芝蛋白肽微量元素螯合物的制備方法，包括采用復(fù)合蛋白酶對(duì)靈芝蛋白進(jìn)行酶解，制備得到靈芝蛋白多肽復(fù)合物溶液；采用液體螯合法使含微量元素的無(wú)機(jī)化合物中的微量元素與靈芝蛋白多肽復(fù)合物溶液中的靈芝蛋白肽進(jìn)行液體螯合，制備靈芝蛋白肽-微量元素螯合液；對(duì)靈芝蛋白肽-微量元素螯合液進(jìn)行離心、過(guò)濾、冷凍干燥得到靈芝蛋白肽微量元素螯合物。

3、優(yōu)選的技術(shù)方案為：靈芝蛋白的提取方法包括：將靈芝子實(shí)體烘干后粉碎，將粉碎后的靈芝碎屑與水以w/v為1:30-50的比例混合，調(diào)節(jié)ph值至8.9-9.1，超聲提取40-60min或者在溫度為50-70℃條件下加熱提取80-120min；提取液過(guò)濾去除靈芝渣；得到的濾液調(diào)節(jié)ph值至2.0-3?.0進(jìn)行蛋白沉淀，靜置后，離心得到沉淀蛋白，水洗至中性，再次離心、沉淀冷凍干燥即得靈芝蛋白粉末。

4、優(yōu)選的技術(shù)方案為：離心速率為4000-5000r/min，離心時(shí)間為10-30min。

5、優(yōu)選的技術(shù)方案為：酶解的方法包括：將靈芝蛋白溶解在水中，將ph值調(diào)節(jié)到6.5-8.5，加熱至40-60℃，然后加入復(fù)合蛋白酶，攪拌均勻，酶解30-90min，然后拿出到沸水浴鍋內(nèi)滅酶，冷卻至室溫；再有雜質(zhì)的前提下進(jìn)行離心，離心條件4000-5000r/10min，離心后取上清液，放入4℃冰箱內(nèi)保存，即得到靈芝蛋白多肽復(fù)合物溶液

6、優(yōu)選的技術(shù)方案為：所用復(fù)合蛋白酶活力為120u/mg，作用溫度40-60℃、作用ph值6.5-8.5。

7、優(yōu)選的技術(shù)方案為：采用液體螯合法使含微量元素的無(wú)機(jī)化合物中的微量元素與靈芝蛋白多肽復(fù)合物溶液中的靈芝蛋白肽進(jìn)行液體螯合，制備靈芝蛋白肽-微量元素螯合液，包括：采用液體螯合法使氯化鈣中的鈣與靈芝蛋白多肽復(fù)合物溶液中的靈芝蛋白肽進(jìn)行液體螯合，制備靈芝蛋白肽-鈣螯合液，和采用液體螯合法使亞硒酸鈉中的硒與靈芝蛋白多肽復(fù)合物溶液中的靈芝蛋白肽進(jìn)行液體螯合，制備靈芝蛋白-硒螯合液。

8、優(yōu)選的技術(shù)方案為：進(jìn)行微量元素離子液體螯合時(shí)，靈芝蛋白多肽復(fù)合物溶液：無(wú)機(jī)微量元素離子溶液=2：1的體積比混合加入，攪拌均勻，調(diào)節(jié)ph至7.0，在60℃條件下持續(xù)反應(yīng)1h，反應(yīng)后冷卻，離心分離去除雜質(zhì)，加入3-5倍體積95wt%的乙醇，沉淀靜置12h以上，離心去除上清液，獲得靈芝蛋白肽-微量元素螯合物液體，冷凍干燥得到靈芝蛋白鈣螯合物粉末。

9、由于上述技術(shù)方案運(yùn)用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有的優(yōu)點(diǎn)是：

10、本發(fā)明立足以來(lái)自于靈芝的靈芝蛋白為原材料，通過(guò)堿溶酸沉法對(duì)靈芝蛋白的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，再通過(guò)復(fù)合蛋白酶酶解控制，用氯化鈣、亞硒酸鈉螯合活性的肽，而使金屬螯合鈣、金屬螯合硒活性得以高效地實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明為靈芝蛋白的應(yīng)用提供了一條新思路。

技術(shù)特征：

1.一種靈芝蛋白肽微量元素螯合物的制備方法，其特征在于：包括采用復(fù)合蛋白酶對(duì)靈芝蛋白進(jìn)行酶解，制備得到靈芝蛋白多肽復(fù)合物溶液；采用液體螯合法使含微量元素的無(wú)機(jī)化合物中的微量元素與靈芝蛋白多肽復(fù)合物溶液中的靈芝蛋白肽進(jìn)行液體螯合，制備靈芝蛋白肽-微量元素螯合液；對(duì)靈芝蛋白肽-微量元素螯合液進(jìn)行離心、過(guò)濾、冷凍干燥得到靈芝蛋白肽微量元素螯合物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靈芝蛋白肽微量元素螯合物的制備方法，其特征在于：靈芝蛋白的提取方法包括：將靈芝子實(shí)體烘干后粉碎，將粉碎后的靈芝碎屑與水以w/v為1:30-50的比例混合，調(diào)節(jié)ph值至8.9-9.1，超聲提取40-60min或者在溫度為50-70℃條件下加熱提取80-120min；提取液過(guò)濾去除靈芝渣；得到的濾液調(diào)節(jié)ph值至2.0-3?.0進(jìn)行蛋白沉淀，靜置后，離心得到沉淀蛋白，水洗至中性，再次離心、沉淀冷凍干燥即得靈芝蛋白粉末。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的靈芝蛋白肽微量元素螯合物的制備方法，其特征在于：離心速率為4000-5000r/min，離心時(shí)間為10-30min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靈芝蛋白肽微量元素螯合物的制備方法，其特征在于：酶解的方法包括：將靈芝蛋白溶解在水中，將ph值調(diào)節(jié)到6.5-8.5，加熱至40-60℃，然后加入復(fù)合蛋白酶，攪拌均勻，酶解30-90min，然后拿出到沸水浴鍋內(nèi)滅酶，冷卻至室溫；再有雜質(zhì)的前提下進(jìn)行離心，離心條件4000-5000r/10min，離心后取上清液，放入4℃冰箱內(nèi)保存，即得到靈芝蛋白多肽復(fù)合物溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的靈芝蛋白肽微量元素螯合物的制備方法，其特征在于：所用復(fù)合蛋白酶活力為120u/mg，作用溫度40-60℃、作用ph值6.5-8.5。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靈芝蛋白肽微量元素螯合物的制備方法，其特征在于：采用液體螯合法使含微量元素的無(wú)機(jī)化合物中的微量元素與靈芝蛋白多肽復(fù)合物溶液中的靈芝蛋白肽進(jìn)行液體螯合，制備靈芝蛋白肽-微量元素螯合液，包括：采用液體螯合法使氯化鈣中的鈣與靈芝蛋白多肽復(fù)合物溶液中的靈芝蛋白肽進(jìn)行液體螯合，制備靈芝蛋白肽-鈣螯合液，和采用液體螯合法使亞硒酸鈉中的硒與靈芝蛋白多肽復(fù)合物溶液中的靈芝蛋白肽進(jìn)行液體螯合，制備靈芝蛋白-硒螯合液。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靈芝蛋白肽微量元素螯合物的制備方法，其特征在于：進(jìn)行微量元素離子液體螯合時(shí)，靈芝蛋白多肽復(fù)合物溶液：無(wú)機(jī)微量元素離子溶液=2：1的體積比混合加入，攪拌均勻，調(diào)節(jié)ph至7.0，在60℃條件下持續(xù)反應(yīng)1h，反應(yīng)后冷卻，離心分離去除雜質(zhì)，加入3-5倍體積95wt%的乙醇，沉淀靜置12h以上，離心去除上清液，獲得靈芝蛋白肽-微量元素螯合物液體，冷凍干燥得到靈芝蛋白鈣螯合物粉末。

技術(shù)總結(jié)
一種靈芝蛋白肽微量元素螯合物的制備方法，包括采用復(fù)合蛋白酶對(duì)靈芝蛋白進(jìn)行酶解，制備得到靈芝蛋白多肽復(fù)合物溶液；采用液體螯合法使含微量元素的無(wú)機(jī)化合物中的微量元素與靈芝蛋白多肽復(fù)合物溶液中的靈芝蛋白肽進(jìn)行液體螯合，制備靈芝蛋白肽?微量元素螯合液；對(duì)靈芝蛋白肽?微量元素螯合液進(jìn)行離心、過(guò)濾、冷凍干燥得到靈芝蛋白肽微量元素螯合物。本發(fā)明立足以來(lái)自于靈芝的靈芝蛋白為原材料，通過(guò)堿溶酸沉法對(duì)靈芝蛋白的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，再通過(guò)復(fù)合蛋白酶酶解控制，用氯化鈣、亞硒酸鈉螯合活性的肽，而使金屬螯合鈣、金屬螯合硒活性得以高效地實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明為靈芝蛋白的應(yīng)用提供了一條新思路。

技術(shù)研發(fā)人員：趙根海,常露,尤國(guó)慶,蔡君
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國(guó)科學(xué)院合肥物質(zhì)科學(xué)研究院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6