本發(fā)明涉及干細(xì)胞培養(yǎng)，特別是涉及一種促進(jìn)精原干細(xì)胞體外增殖的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)：

1、精原干細(xì)胞(spermatogonal?stem?cells，sscs)是睪丸中一類特殊的成體干細(xì)胞，是精子發(fā)生的基礎(chǔ)。由于sscs在睪丸中數(shù)量稀少，因此體外培養(yǎng)系統(tǒng)的建立是研究和操作sscs這一稀有細(xì)胞群體的重要前提，而體外sscs的長期培養(yǎng)是探索sscs自我更新和分化的先決條件。但由于sscs所處微環(huán)境的復(fù)雜性及在整個(gè)睪丸組織中含量占比少，使得在體外培養(yǎng)過程中，無論是niche微環(huán)境的構(gòu)建，還是sscs的純化都是極其困難的，這給sscs的研究造成了一定的影響。

2、即使成功分離富集并初步培養(yǎng)sscs，現(xiàn)有的培養(yǎng)體系也難以維持其體外長期增殖，在培養(yǎng)過程中sscs的干細(xì)胞特性也會(huì)逐漸喪失，隨著時(shí)間的延長，分化和凋亡在細(xì)胞事件中起主導(dǎo)作用，最終結(jié)果是sscs的體外培養(yǎng)停滯。因此，研究sscs的干性維持機(jī)制、建立支持sscs自我更新并保持其干細(xì)胞潛能的培養(yǎng)系統(tǒng)就顯得尤為重要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種促進(jìn)精原干細(xì)胞體外增殖的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法，以解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的培養(yǎng)基加入了n-環(huán)己基乙醇胺和阿托伐他汀能夠影響精原干細(xì)胞和飼養(yǎng)層細(xì)胞的代謝活性，降低飼養(yǎng)層細(xì)胞競爭營養(yǎng)的活性，在促進(jìn)精原干細(xì)胞的自我更新和增殖具備協(xié)同增效的作用。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下方案：

3、本發(fā)明提供了一種促進(jìn)精原干細(xì)胞體外增殖的組合物，包括n-環(huán)己基乙醇胺和阿托伐他汀。

4、本發(fā)明還提供了一種促進(jìn)精原干細(xì)胞體外增殖的培養(yǎng)基，包括所述的組合物。

5、優(yōu)選的是，所述培養(yǎng)基中，所述n-環(huán)己基乙醇胺和所述阿托伐他汀的質(zhì)量比為(2-6):1。

6、優(yōu)選的是，所述培養(yǎng)基中，所述n-環(huán)己基乙醇胺和所述阿托伐他汀的質(zhì)量比為3:1。

7、優(yōu)選的是，所述培養(yǎng)基中，所述n-環(huán)己基乙醇胺的濃度為15μg/ml，所述阿托伐他汀的濃度為5μg/ml。

8、優(yōu)選的是，所述培養(yǎng)基的制備方法包括以下步驟：

9、將15mgn-環(huán)己基乙醇胺和5mg阿托伐他汀混合，使用dmso溶解，調(diào)整所述n-環(huán)己基乙醇胺的濃度為15mg/ml，所述阿托伐他汀的濃度為5mg/ml，使用0.22μm濾器過濾除菌，制得混合溶液；

10、制備精原干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基；

11、將所述混合溶液按照體積比1:1000加入所述精原干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基，即得所述培養(yǎng)基。

12、優(yōu)選的是，所述精原干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括dmem/f12培養(yǎng)基、fbs、谷氨酰胺濃縮液、非必需氨基酸原液和β-巰基乙醇。

13、優(yōu)選的是，每100ml所述精原干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備方法包括如下步驟：

14、量取87.9mldmem/f12培養(yǎng)基加入到200ml容器中，先后加入10ml?fbs、1ml谷氨酰胺濃縮液，1ml非必需氨基酸原液，0.1mlβ-巰基乙醇；

15、充分混勻后，使用0.22μm濾器過濾除菌，即得所述精原干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

16、本發(fā)明還提供了所述的組合物或所述的培養(yǎng)基在促進(jìn)精原干細(xì)胞體外增殖中的應(yīng)用。

17、本發(fā)明還提供了一種促進(jìn)精原干細(xì)胞體外增殖的培養(yǎng)方法，包括使用所述的培養(yǎng)基進(jìn)行精原干細(xì)胞體外培養(yǎng)的步驟。

18、本發(fā)明公開了以下技術(shù)效果：

19、本發(fā)明將n-環(huán)己基乙醇胺和阿托伐他汀加入精原干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基，制備得到促進(jìn)精原干細(xì)胞體外增殖的培養(yǎng)基；實(shí)驗(yàn)證明，特定濃度配比的n-環(huán)己基乙醇胺和阿托伐他汀能夠共同影響精原干細(xì)胞和飼養(yǎng)層細(xì)胞的代謝活性，降低飼養(yǎng)層細(xì)胞競爭營養(yǎng)的活性，在促進(jìn)精原干細(xì)胞的自我更新和增殖具備協(xié)同增效的作用。利用本發(fā)明的培養(yǎng)基，可以簡單、高效地大量擴(kuò)增精原干細(xì)胞，為人類精原干細(xì)胞的體外培養(yǎng)及擴(kuò)增提供了不同于傳統(tǒng)添加生長因子的新路徑。將本發(fā)明用于培養(yǎng)精原干細(xì)胞，治療男性生殖系統(tǒng)疾病，具有十分重要的科學(xué)價(jià)值。

技術(shù)特征：

1.一種促進(jìn)精原干細(xì)胞體外增殖的組合物，其特征在于，包括n-環(huán)己基乙醇胺和阿托伐他汀。

2.一種促進(jìn)精原干細(xì)胞體外增殖的培養(yǎng)基，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的組合物。

3.如權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基中，所述n-環(huán)己基乙醇胺和所述阿托伐他汀的質(zhì)量比為(2-6):1。

4.如權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基中，所述n-環(huán)己基乙醇胺和所述阿托伐他汀的質(zhì)量比為3:1。

5.如權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基中，所述n-環(huán)己基乙醇胺的濃度為15μg/ml，所述阿托伐他汀的濃度為5μg/ml。

6.如權(quán)利要求5所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基的制備方法包括以下步驟：

7.如權(quán)利要求6所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述精原干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括dmem/f12培養(yǎng)基、fbs、谷氨酰胺濃縮液、非必需氨基酸原液和β-巰基乙醇。

8.如權(quán)利要求7所述的培養(yǎng)基，其特征在于，每100ml所述精原干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備方法包括如下步驟：

9.如權(quán)利要求1所述的組合物或權(quán)利要求2-8任一項(xiàng)所述的培養(yǎng)基在促進(jìn)精原干細(xì)胞體外增殖中的應(yīng)用。

10.一種促進(jìn)精原干細(xì)胞體外增殖的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括使用權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的培養(yǎng)基進(jìn)行精原干細(xì)胞體外培養(yǎng)的步驟。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種促進(jìn)精原干細(xì)胞體外增殖的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法，屬于干細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明將N?環(huán)己基乙醇胺和阿托伐他汀加入精原干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基，制備得到促進(jìn)精原干細(xì)胞體外增殖的培養(yǎng)基；實(shí)驗(yàn)證明，特定濃度配比的N?環(huán)己基乙醇胺和阿托伐他汀能夠共同影響精原干細(xì)胞和飼養(yǎng)層細(xì)胞的代謝活性，降低飼養(yǎng)層細(xì)胞競爭營養(yǎng)的活性，在促進(jìn)精原干細(xì)胞的自我更新和增殖具備協(xié)同增效的作用。利用本發(fā)明的培養(yǎng)基，可以簡單、高效地大量擴(kuò)增精原干細(xì)胞，為人類精原干細(xì)胞的體外培養(yǎng)及擴(kuò)增提供了不同于傳統(tǒng)添加生長因子的新路徑。將本發(fā)明用于培養(yǎng)精原干細(xì)胞，治療男性生殖系統(tǒng)疾病，具有十分重要的科學(xué)價(jià)值。

技術(shù)研發(fā)人員：劉陶迪,張巖,云霞
受保護(hù)的技術(shù)使用者：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/23