本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，具體涉及一種vsv-weev重組病毒、含有vsv-weev重組病毒的組合物和核酸分子及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、西方馬腦炎病毒(western?equine?encephalitis?virus,weev)屬于披膜病毒科、甲病毒屬，致病力較強，生物安全等級為bsl-3，主要分布在美國西部和南美洲，是我國出入境檢驗檢疫中規(guī)定的一類檢疫對象。近年來，隨著國際貿(mào)易和旅游人口的增加，已報道多例輸入性病例。weev病毒顆粒呈二十面體對稱，基因組為11000nt左右的單股正鏈rna分子，共編碼9種蛋白，包括4種非結(jié)構(gòu)蛋白(nsp1、nsp2、nsp3、nsp4)和5種結(jié)構(gòu)蛋白(核心蛋白c、包膜蛋白e3/e2/e1、6k蛋白)。weev主要由環(huán)喙庫蚊叮咬傳播，感染后除可引起發(fā)熱、頭暈、嘔吐等較輕癥狀外，還可以引起腦炎，致死率為3％～7％，幸存者中15％～30％會引起永久性神經(jīng)系統(tǒng)病變，例如智力遲鈍、癱瘓等癥狀。而目前尚無被批準的疫苗等有效減輕西方馬腦炎病毒致病力的手段。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、鑒于以上技術(shù)問題，本發(fā)明以weev的結(jié)構(gòu)蛋白e3e2e1代替vsv的g蛋白構(gòu)建vsv-weev重組病毒，以達到減毒并在bsl-2級實驗室代替weev野毒株進行試驗的目的。

2、為了獲得上述目的，本發(fā)明提供的具體技術(shù)方案如下：

3、本發(fā)明第一方面，提供一種vsv-weev重組病毒，是以西方馬腦炎病毒的結(jié)構(gòu)蛋白e3e2e1代替水泡性口炎病毒的g蛋白構(gòu)建得到。

4、作為本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例，所述vsv-weev重組病毒具體是按照以下步驟構(gòu)建得到：

5、根據(jù)西方馬腦炎病毒基因序列，合成編碼結(jié)構(gòu)蛋白e3e2e1的目的基因；

6、以所述目的基因為模板，設(shè)計引物并對目的基因進行擴增；

7、將擴增產(chǎn)物連接到pvsv-△g-egfp載體上，轉(zhuǎn)化至工具細胞，培養(yǎng)，提取得到pvsv-△g-weev-e3e2e1-egfp重組質(zhì)粒；

8、轉(zhuǎn)染拯救，得到所述vsv-weev重組病毒。

9、作為本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例，將pvsv-△g-egfp載體通過ecor?i單酶切后，與所述擴增產(chǎn)物在50℃連接10min，得到連接產(chǎn)物。

10、作為本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例，所述工具細胞為dh5α感受態(tài)細胞。將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)染至dh5α感受態(tài)細胞后，挑取單菌落在37℃搖床培養(yǎng)擴增，得到pvsv-△g-weev-e3e2e1-egfp重組質(zhì)粒。

11、本發(fā)明第二方面，提供一種含有所述重組病毒的組合物。

12、作為本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例，所述組合物包括藥學(xué)上可接受的載體或輔料。

13、本發(fā)明第三方面，提供一種包括所述重組病毒的基因組的核酸分子。

14、本發(fā)明第四方面，提供一種所述vsv-weev重組病毒、所述組合物或所述核酸分子在制備抗西方馬腦炎病毒感染的藥物中的應(yīng)用。

15、作為本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例，所述藥物為疫苗。

16、對比現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為：

17、本發(fā)明提供一種vsv-weev重組病毒，以西方馬腦炎病毒的結(jié)構(gòu)蛋白e3e2e1代替vsv的g蛋白構(gòu)建得到。vsv-weev重組病毒不僅能達到減毒的目的，并且相較于用熒光報告蛋白代替的g蛋白的重組病毒，vsv-weev重組病毒可以進行多輪復(fù)制。本發(fā)明對重組后的假病毒進行了鑒定及免疫原性評價，該重組病毒免疫的小鼠血清顯示出具有很高的針對weev的抗體效價。

18、通過空斑減少中和實驗證明由vsv-△g-weev-egfp免疫所得的血清(多抗)具有中和活性，可以有效的抑制另一種替代weev野毒株的嵌合病毒——sinv-weev對細胞的感染；而2f1e12株單克隆抗體無中和活性。

技術(shù)特征：

1.一種vsv-weev重組病毒，其特征在于，是以西方馬腦炎病毒的結(jié)構(gòu)蛋白e3e2e1代替水泡性口炎病毒的g蛋白構(gòu)建得到。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的vsv-weev重組病毒，其特征在于，所述vsv-weev重組病毒具體是按照以下步驟構(gòu)建得到：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的vsv-weev重組病毒，其特征在于，將pvsv-△g-egfp載體通過ecori單酶切后，與所述擴增產(chǎn)物連接。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的vsv-weev重組病毒，其特征在于，所述工具細胞為dh5α感受態(tài)細胞。

5.一種含有權(quán)利要求1所述重組病毒的組合物。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其特征在于，所述組合物包括藥學(xué)上可接受的載體或輔料。

7.一種包括權(quán)利要求1所述重組病毒的基因組的核酸分子。

8.一種權(quán)利要求1所述的vsv-weev重組病毒或權(quán)利要求5所述的組合物或權(quán)利要求7所述的核酸分子在制備抗西方馬腦炎病毒感染的藥物中的應(yīng)用。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物為疫苗。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種VSV?WEEV重組病毒、含有VSV?WEEV重組病毒的組合物和核酸分子及應(yīng)用。VSV?WEEV重組病毒是以西方馬腦炎病毒結(jié)構(gòu)蛋白E3E2E1代替水泡性口炎病毒G蛋白構(gòu)建得到。本發(fā)明對重組后的病毒進行了鑒定及免疫原性評價，該重組病毒免疫的小鼠血清顯示出具有很高的針對WEEV的抗體效價，通過空斑減少中和實驗也證明該血清可以有效的抑制另一種替代WEEV野毒株的嵌合病毒——SINV?WEEV對細胞的感染。

技術(shù)研發(fā)人員：雷迎峰,武福星,董陽超,張劍,薛潘,袁若棟,陳洋,元航,葉偉,張芳琳
受保護的技術(shù)使用者：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9