本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)，特別是涉及外周血中外泌體環(huán)狀rna作為多發(fā)性骨髓瘤骨病生物標(biāo)志物的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、多發(fā)性骨髓瘤(multiple?myeloma,mm)是一種起源于骨髓的漿細(xì)胞惡性疾病，其特征是克隆異質(zhì)性和骨髓依賴性，目前仍無法治愈。多發(fā)性骨髓瘤骨病(mm?bonediseases,mbd)是mm的嚴(yán)重并發(fā)癥，大約80％的mm患者在初診時存在溶骨性病變，并且常常伴有骨骼相關(guān)事件，嚴(yán)重影響mm患者的生活質(zhì)量和生存。目前mm及mbd的診斷主要依靠骨髓檢查及影像學(xué)檢查，由于侵入性及輻射性難以獲得持續(xù)性樣本。相比之下，非侵入性液體活檢具有便捷、無創(chuàng)性、可重復(fù)性等優(yōu)勢，逐漸成為腫瘤精準(zhǔn)診治的焦點(diǎn)。而外泌體相較于其他分析物(如循環(huán)腫瘤細(xì)胞、循環(huán)腫瘤dna等)在外周血中含量較高，而且攜帶信息更加豐富，由多種細(xì)胞類型分泌，能反映腫瘤微環(huán)境等多種信息。越來越多的證據(jù)揭示了mbd的發(fā)病機(jī)制與骨髓微環(huán)境失調(diào)密切相關(guān)，mm細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、破骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、骨細(xì)胞和免疫細(xì)胞之間的相互作用導(dǎo)致骨代謝和骨重塑的失衡，導(dǎo)致mbd的發(fā)生。

2、目前，關(guān)于外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞通訊對mbd的影響多集中在mm細(xì)胞分泌的外泌體，例如mir-92a-2-5p和mir-373-3p經(jīng)由骨髓瘤細(xì)胞分泌的外泌體抑制單核細(xì)胞或間充質(zhì)干細(xì)胞中irf8、runx2的表達(dá)，誘導(dǎo)破骨細(xì)胞激活，抑制成骨細(xì)胞分化。骨髓瘤細(xì)胞中l(wèi)ncrnarunx2-as1經(jīng)由外泌體介導(dǎo)，通過下調(diào)間充質(zhì)干細(xì)胞中的runx2抑制其成骨分化能力。骨髓微環(huán)境中的其他細(xì)胞分泌的外泌體對mbd的作用尚缺乏相關(guān)研究。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提出了外周血中外泌體環(huán)狀rna作為多發(fā)性骨髓瘤骨病生物標(biāo)志物的應(yīng)用，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下所述：

2、本發(fā)明提供了外周血中外泌體環(huán)狀rna作為多發(fā)性骨髓瘤骨病生物標(biāo)志物的應(yīng)用，所述外周血中外泌體環(huán)狀rna選自如下所列的一個或若干個：

3、核苷酸序列如seq?id?no.1所示的chr2:2744264-2744443+；

4、核苷酸序列如seq?id?no.2所示的chr2:2744228-2744407+；

5、核苷酸序列如seq?id?no.3所示的chr7:75847812-75847976+；

6、核苷酸序列如seq?id?no.4所示的chr19:42853602-42853758-；

7、核苷酸序列如seq?id?no.5所示的chr7:33923121-33923277-；

8、核苷酸序列如seq?id?no.6所示的chr1:181379313-181379498-；

9、核苷酸序列如seq?id?no.7所示的chr11:85831034-85831205-；

10、核苷酸序列如seq?id?no.8所示的chr12:69748686-69748849-；

11、核苷酸序列如seq?id?no.9所示的chr3:3830938-3831112+；

12、核苷酸序列如seq?id?no.10所示的chr7:30728074-30728244+；

13、核苷酸序列如seq?id?no.11所示的chr7:151946961-151948051-；

14、核苷酸序列如seq?id?no.12所示的chr11:108046973-108047817-；

15、核苷酸序列如seq?id?no.13所示的chr5:138699448-138700432+；

16、核苷酸序列如seq?id?no.14所示的chr6:18236683-18258636-；

17、核苷酸序列如seq?id?no.15所示的chr8:71126138-71128999-；

18、核苷酸序列如seq?id?no.16所示的chr9:79996892-80022523+；

19、核苷酸序列如seq?id?no.17所示的chr2:89100616-89104394+；

20、核苷酸序列如seq?id?no.18所示的chr17:30267305-30315516+；

21、核苷酸序列如seq?id?no.19所示的chrx:76907604-76912143-；

22、核苷酸序列如seq?id?no.20所示的chr19:23541232-23545527-。

23、本發(fā)明還提供了一種檢測外周血中外泌體環(huán)狀rna標(biāo)志物的物質(zhì)的應(yīng)用，包括如下所述的一種或多種應(yīng)用：

24、a，在用于制備診斷多發(fā)性骨髓瘤骨病的產(chǎn)品中的應(yīng)用；

25、b，在用于制備多發(fā)性骨髓瘤骨病預(yù)后評估產(chǎn)品中的應(yīng)用；

26、所述外泌體環(huán)狀rna標(biāo)志物為核苷酸序列如seq?id?no.1～seq?id?no.20所示的一個或多個。

27、所述的產(chǎn)品可以為通過qrt-pcr、實(shí)時定量pcr、或高通量測序平臺檢測seq?idno.1～seq?id?no.20表達(dá)水平以診斷多發(fā)性骨髓瘤骨病的產(chǎn)品。

28、所述檢測是針對離體樣本的檢測，所述的離體樣本為外周血樣本。

29、所述應(yīng)用中，序列表如seq?id?no.1～seq?id?no.10所示的外泌體環(huán)狀rna標(biāo)志物在多發(fā)性骨髓瘤骨病環(huán)狀外周血樣本中表達(dá)為顯著上調(diào)。

30、序列表如seq?id?no.11～seq?id?no.20所示的外泌體環(huán)狀rna標(biāo)志物在多發(fā)性骨髓瘤骨病環(huán)狀外周血樣本中表達(dá)為顯著下調(diào)。

31、所述產(chǎn)品可以用于檢測序列表如seq?id?no.1～seq?id?no.20的表達(dá)量、或特應(yīng)性識別、或檢測seq?id?no.1～seq?id?no.20的含量的試劑。

32、所述產(chǎn)品可以是用于檢測seq?id?no.1～seq?id?no.20表達(dá)量的引物、或特異性識別seq?id?no.1～seq?id?no.20的引物；或含有所述引物的試劑組或試劑盒。

33、本發(fā)明提供了外周血中外泌體環(huán)狀rna作為治療多發(fā)性骨髓瘤骨病靶點(diǎn)的應(yīng)用。

34、發(fā)明人研究了對mm患者及健康志愿者的外周血外泌體進(jìn)行全轉(zhuǎn)錄組測序，篩選了差異表達(dá)的環(huán)狀rna，分析了對mbd起關(guān)鍵作用的環(huán)狀rna，并綜合單細(xì)胞測序(single?cellrna?sequencing,scrna-seq)技術(shù)，解析關(guān)鍵外泌體環(huán)狀rna的來源細(xì)胞，并在單細(xì)胞水平上明確了骨髓微環(huán)境中的細(xì)胞互作，揭示了骨髓微環(huán)境對mbd的重要作用，為mbd的發(fā)病機(jī)制、診療及監(jiān)測提供了新的見解。

35、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

36、1，本發(fā)明通過高通量測序并結(jié)合單細(xì)胞測序技術(shù)，分析了對mbd起關(guān)鍵作用的環(huán)狀rna，實(shí)驗證明seq?id?no.1～seq?id?no.10在mm患者外周血外泌體中顯著上調(diào)，seq?idno.1～seq?id?no.10在mm患者外周血外泌體中顯著下調(diào)，表明，這些環(huán)狀rna的表達(dá)水平可以作為mbd的標(biāo)志物；

37、2，本發(fā)明利用外泌體環(huán)狀rna相較于其他遺傳信息具有高穩(wěn)定性、高豐度、高特異性、高保守性等特點(diǎn)，提供了較理想的生物標(biāo)志物甚至治療靶點(diǎn)；

38、3，本發(fā)明通過外泌體環(huán)狀rna溯源，推測mbd相關(guān)差異環(huán)狀rna主要來源于骨髓微環(huán)境中的t細(xì)胞/自然殺傷細(xì)胞、b細(xì)胞和單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞。