本發(fā)明屬于基因工程，具體涉及一種蕓薹屬植物的遺傳轉化方法及其應用。

背景技術：

1、蕓薹根腫菌專性寄生油菜、白菜等十字花科作物，發(fā)病植物根部細胞分裂異常而腫大，輕則植物生長受抑制，重則植物死亡，是十字花花科植物生長的最大威脅之一，同時也是世界最具經(jīng)濟意義的病害之一。因此，研究根腫菌和寄主互作機理，對于防治根腫病尤為重要。但是，根腫菌是一種專性活體寄生菌，需要依賴宿主才能完成其生命周期，不能用配制的培養(yǎng)基在體外分離培養(yǎng)，敲除根腫菌自身基因的難度大。

2、現(xiàn)有技術通常利用農(nóng)桿菌介導的遺傳轉化技術將某個基因轉入蕓薹屬植物，驗證基因的功能。然而，傳統(tǒng)的農(nóng)桿菌介導的遺傳轉化方法通常需要將外植體置于不同培養(yǎng)基中進行共培養(yǎng)、篩選培養(yǎng)等步驟，過程繁瑣，實驗操作復雜，條件嚴苛，成本高，而且鑒定收獲t0代種子后才能開展實驗做后續(xù)研究，整個過程需要的周期長。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種蕓薹屬植物的遺傳轉化方法及其應用，簡化培養(yǎng)過程，將外植體在基質中進行培養(yǎng)，即可誘導毛狀根，不需要復雜的無菌操作和培養(yǎng)條件，可降低實驗的復雜性和成本。

2、本發(fā)明提供了一種蕓薹屬植物的遺傳轉化方法，包括以下步驟：利用重組農(nóng)桿菌侵染蕓薹屬植物外植體，得到侵染后的蕓薹屬植物外植體；將所述侵染后的蕓薹屬植物外植體置于基質中進行暗培養(yǎng)和毛狀根誘導培養(yǎng)，得到陽性蕓薹屬植物；

3、所述重組農(nóng)桿菌包括基礎農(nóng)桿菌和轉入所述基礎農(nóng)桿菌的目的基因；

4、所述基礎農(nóng)桿菌包括msu440和/或lba1334；

5、所述基質包括蛭石。

6、作為一種優(yōu)選的方案，所述基質包括植物營養(yǎng)液浸濕的基質。

7、作為一種優(yōu)選的方案，所述植物營養(yǎng)液包括霍格蘭營養(yǎng)液。

8、作為一種優(yōu)選的方案，所述外植體包括下胚軸。

9、作為一種優(yōu)選的方案，所述下胚軸包括蕓薹屬植物兩片子葉展開時的下胚軸。

10、作為一種優(yōu)選的方案，所述毛狀根誘導培養(yǎng)后還包括：剪除初次生長的非陽性毛狀根。

11、作為一種優(yōu)選的方案，所述蕓薹屬植物包括油菜。

12、作為一種優(yōu)選的方案，所述侵染的方式包括：將所述蕓薹屬植物外植體蘸取所述重組農(nóng)桿菌。

13、作為一種優(yōu)選的方案，所述暗培養(yǎng)的時間為1～2d，溫度為20～24℃；所述毛狀根誘導培養(yǎng)的時間為7～14d，溫度為20～24℃。

14、本發(fā)明還提供了上述方案所述的遺傳轉化方法在蕓薹屬植物基因功能驗證和/或培育轉基因植物中的應用。

15、有益效果：

16、本發(fā)明提供了一種蕓薹屬植物的遺傳轉化方法，包括以下步驟：利用重組農(nóng)桿菌侵染蕓薹屬植物外植體，得到侵染后的蕓薹屬植物外植體；將所述侵染后的蕓薹屬植物外植體置于基質中進行暗培養(yǎng)和毛狀根誘導培養(yǎng)，得到陽性蕓薹屬植物，并限定農(nóng)桿菌種類、基質類型。利用本發(fā)明所述方法能夠簡化培養(yǎng)過程，將外植體在基質中培養(yǎng)，即可誘導毛狀根，整個過程不需要復雜的無菌操作和培養(yǎng)條件，從而降低了實驗的復雜性和成本；并且不需要收獲t0代種子，鑒定的陽性毛狀根即可轉入營養(yǎng)豐富的土中繼代培養(yǎng)，直接開展實驗做后續(xù)研究，大大縮短了實驗周期。實施例結果表明，利用本發(fā)明方法獲得陽性毛狀根可成功接種油菜根腫病病原根腫菌，整個周期縮短至兩個半月，為以后研究原生動物根腫菌與油菜的互作，以及鑒定轉基因植株的抗病能力提供了快速有效的方法。

技術特征：

1.一種蕓薹屬植物的遺傳轉化方法，其特征在于，包括以下步驟：利用重組農(nóng)桿菌侵染蕓薹屬植物外植體，得到侵染后的蕓薹屬植物外植體；將所述侵染后的蕓薹屬植物外植體置于基質中進行暗培養(yǎng)和毛狀根誘導培養(yǎng)，得到陽性蕓薹屬植物；

2.根據(jù)權利要求1所述的遺傳轉化方法，其特征在于，所述基質包括植物營養(yǎng)液浸濕的基質。

3.根據(jù)權利要求2所述的遺傳轉化方法，其特征在于，所述植物營養(yǎng)液包括霍格蘭營養(yǎng)液。

4.根據(jù)權利要求1所述的遺傳轉化方法，其特征在于，所述外植體包括下胚軸。

5.根據(jù)權利要求4所述的遺傳轉化方法，其特征在于，所述下胚軸包括蕓薹屬植物兩片子葉展開時的下胚軸。

6.根據(jù)權利要求1所述的遺傳轉化方法，其特征在于，所述毛狀根誘導培養(yǎng)后還包括：剪除初次生長的非陽性毛狀根。

7.根據(jù)權利要求1所述的遺傳轉化方法，其特征在于，所述蕓薹屬植物包括油菜。

8.根據(jù)權利要求1所述的遺傳轉化方法，其特征在于，所述侵染的方式包括：將所述蕓薹屬植物外植體蘸取所述重組農(nóng)桿菌。

9.根據(jù)權利要求1所述的遺傳轉化方法，其特征在于，所述暗培養(yǎng)的時間為1～2d，溫度為20～24℃；所述毛狀根誘導培養(yǎng)的時間為7～14d，溫度為20～24℃。

10.權利要求1～9任一項所述的遺傳轉化方法在蕓薹屬植物基因功能驗證和/或培育轉基因植物中的應用。

技術總結
本發(fā)明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種蕓薹屬植物的遺傳轉化方法及其應用。本發(fā)明提供了一種蕓薹屬植物的遺傳轉化方法，包括以下步驟：利用重組農(nóng)桿菌侵染蕓薹屬植物外植體，得到侵染后的蕓薹屬植物外植體；將所述侵染后的蕓薹屬植物外植體置于基質中進行暗培養(yǎng)和毛狀根誘導培養(yǎng)，得到陽性蕓薹屬植物，并限定農(nóng)桿菌種類、基質類型。利用本發(fā)明所述方法能夠簡化培養(yǎng)過程，將外植體在基質中培養(yǎng)，即可誘導毛狀根，整個過程不需要復雜的無菌操作和培養(yǎng)條件，可降低實驗的復雜性和成本；并且不需要收獲T0代種子，鑒定的陽性毛狀根即可轉入營養(yǎng)豐富的土中繼代培養(yǎng)，直接開展實驗做后續(xù)研究，大大縮短了實驗周期。

技術研發(fā)人員：陳桃,崔苗苗,程家森,謝甲濤,付艷蘋,姜道宏
受保護的技術使用者：華中農(nóng)業(yè)大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/1/6